【摘要】：研究背景及目的據統計有1/3的創(chuàng)傷所致死亡是由失血性休克引起,盡管目前關于失血性休克病理生理機制的研究已有很多,但難以避免的急性失血性休克后繼機體級聯損傷的存在,使我們意識到其生理病理機制仍需要進一步探索完善,藉此尋找新的有效藥物靶標和診斷治療手段。本研究應用蛋白質組學高通量技術篩選創(chuàng)傷性休克的特異性蛋白,探討失血性休克特異性蛋白C3在失血性休克中的作用機制,以進一步闡明失血性休克病理生理機制,尋找檢測失血性休克進展和機體損傷程度的有效指標,探索改善預后的有效治療標靶。 方法采用頸動脈放血法建立大鼠失血性休克模型,記錄血壓、心率等血流動力學指標,留取血漿和肝臟樣本。應用雙向電泳和質譜技術篩選分析失血性休克血漿差異蛋白。應用ELISA驗證差異蛋白在失血性休克大鼠血漿中的表達情況。通過ELISA、 Western blot.免疫組化、免疫熒光、HE染色法檢測C3在失血性休克大鼠體內的表達分布；通過ELISA、NBT法、化學方法等技術檢測C3耗竭的失血性休克模型血漿中ALT、AST、SOD、MDA、MT-1、NO和血管中CX43的表達水平,與血漿中C3表達水平比較,分析C3對失血性休克后血管舒縮性反應性、血管通透性、機體氧化應激、炎癥反應和肝臟、血管損傷的影響。進一步在同等條件下,給予失血性休克大鼠注入sCR1抑制C3激活,ELISA檢測上述指標,MPO法檢測肝臟中白細胞浸潤程度,石蠟切片HE染色法和TUNEL實驗觀察肝臟和血管損傷凋亡情況,以評估C3抑制后對血管舒縮性反應性、血管通透性、機體氧化應激、炎癥反應和組織器官損傷的影響。 結果(1)失血性血漿蛋白質組學篩選共發(fā)現10個有意義差異蛋白點,鑒定出6個高表達蛋白(α-白蛋白、補體C3、血色素結合蛋白、纖維蛋白原γ鏈、F2凝血酶、角蛋白1)和2個低表達蛋白(酪氨酸激酶受體A5亞基1、角蛋白6A)。發(fā)現大鼠發(fā)生失血性休克時,血漿中α-白蛋白、補體C3、血色素結合蛋白、凝血酶F2明顯高表達(P0.05)。(2)失血性休克發(fā)生時補體C3在肝臟和大血管組織的表達含量明顯升高；廣泛分布位于肝臟和血管內皮細胞中；在肝細胞和內皮細胞的胞漿中均勻分布,在肝細胞胞核中大量聚集；肝臟和血管的可見明顯形態(tài)學學損傷。(3)C3在血漿中的表達含量與IL-6、TNF-α、MDA、ALT、AST、NO、ET-1呈正相關,與SOD、CX43與C3呈負相關；其中C3與NO、ET-1、CX43、ALT、IL-6具有強相關性,與SOD、MDA、AST具有中度相關性。(4)失血性休克后,應用sCR1抑制C3激活干預液體復蘇后心率和平均動脈壓在10min內快速恢復正常,且在復蘇后一直較平穩(wěn),其心率明顯較HS組、HS+Saline組低(P＜0.05)：平均動脈壓在液體復蘇后基本接近正常對照組水平。血漿中的IL-6、TNF-α、MDA、ALT、AST、NO、ET-1水平明顯低于單純生理鹽水復蘇組,SOD水平較之升高；肝臟白細胞浸潤顯著減少,細胞凋亡明顯減少,肝臟和血管形態(tài)學損傷同樣明顯減少。 結論本研究成功篩選出一批失血性休克的差異表達蛋白,明確了其在外周血中的含量情況,明確了C3在失血性休克機體中的表達分布情況,初步闡明了C3作為一種急性期反應蛋白在失血性休克中的作用機制,明確C3在失血性休克時參與血流動力學、血管舒縮反應性、血管通透性、氧化應激、炎癥反應、組織器官損傷等多項機體反應。證實了通過sCR1抑制C3在失血性休克早期的活化,可以穩(wěn)定休克后的血壓、心率等血流動力學,改善血管舒縮反應性,提高休克后血管的反應性,降低血管通透性,有效削弱機體在失血性休克后的過度炎癥反應,減弱機體氧化應激。降低休克后對肝臟和血管的損傷。本研究表明,C3參與了失血性休克病理生理過程,可作為一種新的失血性休克指標監(jiān)測休克的進展情況和機體損傷程度,抑制C3活化可能是一種有潛在價值的改善失血性休克預后的治療手段,為失血性休克的靶向治療研究提供新的思路和方法。
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R459.7

【參考文獻】

相關期刊論文 前9條

1 郝進,劉薇,汪正清;旁路活化補體激活內皮細胞表達趨化因子及其NF-kB調控作用的實驗研究[J];創(chuàng)傷外科雜志;2002年01期

2 趙超英,鄭成竹,聞兆章,馬立業(yè),畢建威,沈炎明,華積德;失血性休克犬模型的改進[J];第二軍醫(yī)大學學報;1999年11期

3 胡蓉;;COPD患者治療前后血清hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-8檢測的臨床意義[J];放射免疫學雜志;2007年06期

4 鄭偉;李曉峰;王波;張玉靜;周虹;;失血性休克大鼠血漿蛋白質的差異分析[J];醫(yī)學分子生物學雜志;2008年05期

5 史建國;董亞南;高軍;杜斌;孟雷;;腦損傷大鼠補體C3與腦水腫的動態(tài)變化研究[J];中國醫(yī)藥科學;2012年09期

6 吳勤,王鵬巨,王玲,萬勇,高小紅;創(chuàng)傷家兔應激激素及血糖的變化與急性皮膚壓傷的關系[J];解放軍護理雜志;2001年03期

7 余新沛,陳政良;C3研究進展[J];免疫學雜志;2004年06期

8 鄭偉;黃靈芝;趙蓮;王波;王廣義;王字玲;周虹;;失血性休克大鼠肝臟蛋白質的差異分析[J];中國生物化學與分子生物學報;2007年04期

9 田中秋;鄧立普;;TNF-α、IL-6在全身炎癥反應綜合征表達的研究進展[J];蛇志;2008年04期

，

本文編號：2523935