本文關(guān)鍵詞：大黃素通過抑制NF-κB和HIF-1a信號通路改善缺氧和LPS誘導(dǎo)的腸上皮屏障損傷，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《天津醫(yī)科大學(xué)》 2014年

大黃素通過抑制NF-κB和HIF-1a信號通路改善缺氧和LPS誘導(dǎo)的腸上皮屏障損傷

祁蕾  

【摘要】：論文一大黃素對脂多糖誘導(dǎo)腸上皮細(xì)胞缺氧誘導(dǎo)因子-1a/環(huán)氧化酶-2通路的干預(yù) 一、目的 觀察脂多糖(LPS)處理腸上皮細(xì)胞對缺氧誘導(dǎo)因子-1a(HIF-la)及下游炎癥相關(guān)靶基因環(huán)氧化酶-2(COX-2)表達(dá)的影響,探討大黃素干預(yù)的可能作用靶點。 二、方法 建立LPS處理人腸上皮細(xì)胞的體外實驗?zāi)Ｐ汀? 1.用Western blot檢測LPS不同劑量和不同時間處理組的HIF-la和COX-2蛋白表達(dá)的變化趨勢；檢測LPS和不同劑量大黃素共同干預(yù)組的HIF-1a、COX-2、NF-κB抑制因子(IκB-a)和核轉(zhuǎn)錄因子-κB (NF-kB)蛋白表達(dá)的變化趨勢。 2.用PCR檢測LPS處理組與LPS和大黃素共同干預(yù)組HIF-la的mRNA水平。 3.用MTT法檢測大黃素對腸上皮細(xì)胞增殖情況的影響。數(shù)據(jù)采用單因素方差分析,以P0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。 三、結(jié)果 1.LPS作用可引起HIF-1a表達(dá)升高,且有時間和劑量效應(yīng)關(guān)系。隨LPS濃度的增加,HIF-la的表達(dá)量先增高后降低,在濃度為10-3mg/ml時HIF-1a表達(dá)量最高(P0.05)。作用時間在0.5h HIF-1a表達(dá)達(dá)峰值,到4h下降至最低,隨后又增高(P0.05)；COX-2蛋白表達(dá)變化趨勢與HIF-la基本一致(P0.05)。大黃素可抑制LPS誘導(dǎo)的HIF-1a、COX-2、Phospho-IkB-a和Phospho-NF-kB p65的表達(dá),并有明顯量效關(guān)系(P0.05)。 2.PCR檢測LPS刺激后HIF-la的mRNA水平增高,而大黃素抑制其增高。 3.MTT法檢測大黃素濃度在0-80μmol/L對細(xì)胞增殖無明顯影響(0.95±0.02,0.89±0.03,0.88±0.04,0.91±0.03,0.83±0.03,P0.05)。雖然大黃素在此濃度范圍產(chǎn)生了生物學(xué)效應(yīng),但對細(xì)胞基本無藥物毒性。 四、結(jié)論 LPS激活腸上皮細(xì)胞HIF-1a—COX-2信號通路,且具有時間和劑量依賴性。大黃素可能通過阻斷LPS—HIF-1a—COX-2的缺氧通路和LPS—IκB-a—NF-1κB—COX-2的炎癥通路,對腸上皮細(xì)胞起到保護作用。 論文二缺氧再復(fù)氧和脂多糖激活腸上皮細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子 -κB和低氧誘導(dǎo)因子-1a信號通路及大黃素干預(yù)作用 一、目的 觀察缺氧(H)、缺氧/再復(fù)氧(HR)和脂多糖(LPS)處理腸上皮細(xì)胞對低氧誘導(dǎo)因子-1a(HIF-1a)、核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)及二者共同的下游靶基因環(huán)氧化酶-2(COX-2)表達(dá)的影響,探討大黃素在腸上皮細(xì)胞的缺氧和炎癥過程中干預(yù)的可能作用靶點。 二、方法 用H±LPS、HR±LPS處理人結(jié)腸上皮細(xì)胞株(FHC)來模擬體內(nèi)腸上皮細(xì)胞遭受缺血、缺血/再灌注和炎癥打擊的病理過程。常氧組：在37℃下用95%空氣和5%CO2下培養(yǎng)細(xì)胞作為對照。H組：在37℃下用1%O2、5%CO2和94%N2的混合厭氧氣體使細(xì)胞缺氧1、2、3、4h。H+LPS組：在厭氧處理基礎(chǔ)上同時給予LPS1μg/mL。HR組：缺氧3h后再復(fù)氧1、2、3、4h。HR+LPS組：在缺氧3h后再復(fù)氧2h的基礎(chǔ)上同時給予LPS1μg/mL。大黃素干預(yù)組：在H3hR2h+LPS組基礎(chǔ)上給予20、40、60.80μmol/L大黃素進行干預(yù)。用Western Blot檢測HIF-1a、Phospho-IκB-a、Phospho-NF-κB p65和COX-2的變化趨勢；相差顯微鏡下觀察各組腸上皮細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。 三、結(jié)果 1.H組：與常氧組相比,NF-κB通路的三個蛋白表達(dá)量均增高,且變化趨勢一致,在H1h達(dá)峰值,然后遞減(IκB-a、NF-kB、COX-2組P分別為：P=0.013,0.000,0.005)。 HIF-1a在H3h表達(dá)最高,但各組無顯著差異(P=0.062)。H+LPS組：四個蛋白的變化趨勢一致,表達(dá)量均隨著H的延長而增加,到H3h達(dá)峰后減少(HIF-1a、IκB-a、NF-κB、COX-2組的P分別為：P=0.026,0.011,0.000,0.000)。HR組：隨著R的延長,NF-κB通路蛋白的趨勢大致遞減,到H3hR4h表達(dá)量降至最低(IκB-a、NF-κB、COX-2組P分別為：P=0.063,0.000,0.016)。與H組相比,HR組的HIF-la在R過程中表達(dá)明顯減少,但組間無顯著差異(P=0.081)。HR+LPS組：隨著R的延長,四個蛋白并無降解,增至R2h-3h達(dá)峰(HIF-1a、IκB-a、NF-κB、COX-2組的P分別為：P=0.037,0.001,0.067,0.000)。大黃素同時干預(yù)組：大黃素可以抑制NF-κB和HIF-1a通路表達(dá),存在量效關(guān)系。在大黃素濃度為80μumol/L時,蛋白表達(dá)量均降至最低(HIF-1a、IκB-a、NF-κB、COX-2組的P分別為：P=0.044,0.029,0.000,0.053)；大黃素后處理組此效應(yīng)不顯著。 2.經(jīng)過HR+LPS處理的細(xì)胞內(nèi)發(fā)生空泡樣變、形態(tài)改變、細(xì)胞融合,相比常氧組生長速度緩慢。 四、結(jié)論 缺氧或炎癥均可激活HIF-la的缺氧通路和NF-κB的炎癥通路,但不同刺激會導(dǎo)致這兩條通路不同程度激活,在HR過程中,這兩條通路的表達(dá)水平隨著再復(fù)氧時間延長而降低,在HR+LPS過程中仍相對高表達(dá),這可能與腸缺血／再灌注損傷的病理生理機制相關(guān)：缺血／再灌注損傷會與內(nèi)毒素共同作用破壞腸上皮細(xì)胞,導(dǎo)致腸源性膿毒癥的發(fā)生。大黃素可以抑制NF-KB/HIF-1a-COX-2信號通路,從而發(fā)揮抗炎作用。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R459.7
【目錄】：

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉愛明;抗白介素-6受體單克隆抗體對LPS誘導(dǎo)的大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡的保護作用[D];蘇州大學(xué);2009年

2 喬麗麗;LPS對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的增敏作用[D];鄭州大學(xué);2002年

3 孫燁華;顧客忠誠計劃（LPs）評估模型研究[D];南京師范大學(xué);2006年

4 黃曉佩;不同氧濃度對LPS誘導(dǎo)的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞水通道蛋白-5的影響[D];中南大學(xué);2012年

5 曾靜玲;芪蛭皺肺顆粒對LPS誘導(dǎo)致炎肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的增殖和生物學(xué)活性的影響[D];甘肅中醫(yī)學(xué)院;2014年

6 王帥濤;禽多殺性巴氏桿菌OMPs、LPS和滅活疫苗的制備與免疫[D];河南科技大學(xué);2011年

7 李丹;LPS抑制小鼠和肉雞食欲的機制研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

8 鄧華明;蛇床子素對LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響[D];暨南大學(xué);2011年

9 曾悅翔;利多卡因?qū)PS誘導(dǎo)的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞水通道蛋白5表達(dá)的影響[D];中南大學(xué);2011年

10 楊洋;內(nèi)體酸化成熟障礙對LPS活化巨噬細(xì)胞的調(diào)控作用及機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：大黃素通過抑制NF-κB和HIF-1a信號通路改善缺氧和LPS誘導(dǎo)的腸上皮屏障損傷，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：249978