【摘要】：目的：利用活體成像技術(shù)研究�；撬嵩谥匦惋B腦創(chuàng)傷裸鼠體內(nèi)實(shí)時(shí)代謝分布變化情況,并觀察腦創(chuàng)傷后腦組織TauT、GFAP表達(dá),探討�；撬釋χ匦惋B腦創(chuàng)傷的治療機(jī)制。 方法：本課題分為活體成像和免疫組化兩部分,①活體成像部分：取6-8周齡BALB/C裸鼠32只,隨機(jī)數(shù)字表法分為正常(normal)組、假手術(shù)(sham)組、腦創(chuàng)傷染料(TBI-Cy7)組和�；撬嶂委�(TBI-Tau)組。后兩組用液壓打擊儀制作左側(cè)腦創(chuàng)傷模型,sham組在左側(cè)相同位置只開骨窗,不予打擊。TBI-Tau組、sham組傷后立即尾靜脈注射Cy7-Tau, normal組不做處理,直接注射Cy7-Tau, TBI-Cy7組注射游離Cy7,劑量均為5mg/Kg。給藥后1、2、4、8、12、24h行活體成像；②免疫組化部分：選用6-8周齡BALB/C小鼠48只,隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)(sham)組、腦創(chuàng)傷(TBI)組和�；撬嶂委�(TAU)和,造模同上,TAU組、sham組傷后立即尾靜脈注射Tau (5mg/Kg), TBI組注射無菌生理鹽水(5mg/Kg)。給藥后12h、24h每組各處死8只,4%多聚甲醛灌注后冰凍連續(xù)切片,行HE染色、GFAP-DAPI、TauT熒光免疫組化染色。 結(jié)果： 1.活體成像：給藥后Tau在正常裸鼠體內(nèi)呈全身彌漫分布,主要通過腎臟代謝,12h大部分均可排出體外,僅剩膽囊存較高濃度Tau; sham組手術(shù)切口皮緣24h仍有較高濃度Tau富集；TBI-Tau組給藥后24h腦創(chuàng)傷區(qū)域、皮膚切口處有Tau特異富集,Tau在離體腦組織的分布范圍與腦創(chuàng)傷區(qū)域一致；Cy7在裸鼠體內(nèi)彌漫分布于皮下,無特定器官富集趨勢； 2.HE染色：sham組神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)正常,未見明顯腦創(chuàng)傷；TBI組腦組織充血、水腫,灰質(zhì)和白質(zhì)彌漫性出血灶,腦皮質(zhì)分層結(jié)構(gòu)消失,灰白質(zhì)分界不清,并伴有大量多形核炎性細(xì)胞聚集；Tau組腦組織輕度充血、水腫,實(shí)質(zhì)內(nèi)有局灶性出血,并伴有多形核炎性細(xì)胞聚集。 3. TauT熒光免疫組化結(jié)果：TBI后12h,各組均有TauT表達(dá)于傷側(cè)大腦皮質(zhì)和海馬的血管內(nèi)皮細(xì)胞,偶見個(gè)別神經(jīng)細(xì)胞,與Sham組比較,TBI組12h的皮質(zhì)和海馬中TauT顯著降低(p0.05),TAU組的TauT均顯著高于TBI組(p0.05),傷后24h,與sham組相比,TBI組腦皮質(zhì)無顯著變化,海馬顯著降低,TAU組TauT表達(dá)較sham組顯著增高,熒光位于血管內(nèi)皮細(xì)胞及少數(shù)神經(jīng)細(xì)胞,數(shù)量增多,熒光強(qiáng)度增強(qiáng)。 4. GFAP熒光免疫組化結(jié)果：TBI后12小時(shí),sham組中,星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)GFAP陽性反應(yīng)較低,細(xì)胞胞體較小,突起纖細(xì)。反應(yīng)性星形細(xì)胞主要局限于TBI組、TAU組腦創(chuàng)傷側(cè)胼胝體及海馬,表現(xiàn)為細(xì)胞GFAP陽性反應(yīng)增加,染色加深,突起增多。傷后24小時(shí),TBI組、TAU組星形細(xì)胞胞體肥大,GFAP陽性反應(yīng)細(xì)胞明顯增加,在海馬組織中尤其明顯。無論胼胝體還是海馬組織,TBI組的GFAP在12h、24h均顯著較sham組升高(p0.05),而Tau組與TBI組無顯著區(qū)別(p0.05)。 結(jié)論： 1.活體成像技術(shù)可實(shí)時(shí)監(jiān)測Tau在裸鼠體內(nèi)的分布、代謝,Tau主要通過腎臟代謝；TBI后Tau特異性富集于腦創(chuàng)傷區(qū)域、皮膚切口處,離體腦組織Tau的分布范圍與腦創(chuàng)傷區(qū)域一致； 2.重型顱腦創(chuàng)傷后小鼠腦組織形態(tài)學(xué)發(fā)生明顯改變,皮層、海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)受損嚴(yán)重,予�；撬嶂委熀�24h可見神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)損傷有所減輕,神經(jīng)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)趨于正常,受損輕微,從形態(tài)學(xué)方面表現(xiàn)出了較好的治療作用； 3.TBI后TauT表達(dá)于傷側(cè)大腦皮質(zhì)及海馬的血管內(nèi)皮細(xì)胞、個(gè)別神經(jīng)元,TBI對腦創(chuàng)傷后TauT的表達(dá)存在明顯抑制作用,外源性Tau可促進(jìn)TBI后12h、24h創(chuàng)傷側(cè)腦組織皮質(zhì)和海馬中TauT的表達(dá); 4.TBI后12h、24h內(nèi)胼胝體和海馬中GFAP表達(dá)顯著升高,反應(yīng)性星形細(xì)胞局限表達(dá)于腦創(chuàng)傷區(qū)及傷側(cè)海馬,Tau不能降低TBI后急性期的膠質(zhì)細(xì)胞增生。
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【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R651.15

【參考文獻(xiàn)】

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1 趙繼宗,肖新如;顱腦損傷實(shí)驗(yàn)研究的現(xiàn)狀與展望[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2002年01期

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本文編號：2410300