【摘要】：目的急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)是以進(jìn)行性呼吸窘迫和難治性低氧血癥為臨床特征的急性呼吸衰竭綜合征。膿毒癥是急性呼吸窘迫綜合征的常見病因。目前ARDS的主要治療方式為肺保護(hù)性通氣策略、ECCO及相關(guān)對癥治療,治療效果欠佳。炎癥是機(jī)體抵御病原微生物和組織損傷有效的宿主防御手段。在炎癥刺激的作用下,機(jī)體激活大量的炎癥細(xì)胞中和或清除致病因子,從而恢復(fù)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)。炎癥消退是從炎癥激活狀態(tài)恢復(fù)到穩(wěn)態(tài)的主動的程序化過程。有關(guān)炎癥消退的調(diào)控機(jī)制廣為接受的是巨噬細(xì)胞及其分泌的種類多樣的促炎癥消退介質(zhì)。近年來多項研究逐漸揭示,CD4+CD25+Treg也是促進(jìn)急性肺損傷炎癥消退的重要因素之一。CD4+CD25+Treg除了廣為熟悉的淋巴細(xì)胞的免疫抑制作用外,還通過非TCR依賴的方式促進(jìn)組織修復(fù)。淋巴細(xì)胞活化基因3分子(lymphocyte activation gene3,LAG3,CD223)是免疫球蛋白超家族的一員,已有研究表明LAG3分子與CTLA-4和PD-1相似,作為負(fù)性共刺激分子,其激活可負(fù)向調(diào)控淋巴細(xì)胞功能。同時也有研究表明,LAG3是CD4+CD25+Treg抑制性功能最大化的必要條件。LAG3分子在急性肺損傷炎癥消退中扮演何種作用,干預(yù)LAG3分子的表達(dá)水平能否影響急性肺損傷炎癥消退,目前尚未見報道。為此,本實(shí)驗(yàn)擬以LPS氣管內(nèi)注射誘導(dǎo)的急性肺損傷為動物模型,觀察病程全程小鼠肺內(nèi)不同免疫細(xì)胞的計數(shù)及LAG3分子在各種淋巴細(xì)胞上的表達(dá)變化;并探討LAG3基因敲除是否影響小鼠急性肺損傷炎癥消退進(jìn)程,并以此探索急性肺損傷中炎癥消退延遲的治療合理可靠的免疫靶點(diǎn)。方法1、采用LPS氣管內(nèi)注射誘導(dǎo)的急性肺損傷模型,建模前及建模后10d測量小鼠體重,評估急性肺損傷在建模后不同時間點(diǎn)炎癥消退的動態(tài)變化。2、采用LPS氣管內(nèi)注射致急性肺損傷模型,將28只C57BL/6小鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(n=4)、lps1d組(n=6)、lps4d組(n=6)、lps7d組(n=6)及l(fā)ps10d組(n=6),取肺組織,he染色檢測病理改變,并進(jìn)行肺損傷評分,評估急性肺損傷在建模后不同時間點(diǎn)炎癥消退的動態(tài)變化;取肺泡灌洗液和肺組織,流式細(xì)胞儀檢測急性肺損傷小鼠建模后不同時間點(diǎn)肺泡灌洗液和肺組織中cd4+t淋巴細(xì)胞、cd8+t淋巴細(xì)胞、cd19+b淋巴細(xì)胞、自然殺傷(naturalkiller,nk)細(xì)胞、cd4+cd25+調(diào)節(jié)性t淋巴細(xì)胞(regulatorytcells,treg)、樹突狀細(xì)胞(dendriticcell,dc)的計數(shù)動態(tài)變化,以及cd4+t淋巴細(xì)胞、cd8+t淋巴細(xì)胞、cd19+b淋巴細(xì)胞、dc細(xì)胞和cd4+cd25+調(diào)節(jié)性t淋巴細(xì)胞上的lag3表達(dá)水平。3、利用lag3基因敲除小鼠及野生型小鼠建立急性肺損傷模型,隨機(jī)分為假手術(shù)組(n=4)及l(fā)ps組(n=6),建模術(shù)前及術(shù)后10d每天記錄每只小鼠體重變化。4、利用lag3基因敲除小鼠及野生型小鼠建立急性肺損傷模型,各28只。組內(nèi)在隨機(jī)分為假手術(shù)組(n=4)、lps1d組(n=6)、lps4d組(n=6)、lps7d組(n=6)及l(fā)ps10d組(n=6)。56只小鼠分兩批同時建模,取肺組織行病理切片染色觀察及肺損傷病理評分;取肺泡灌洗液,檢測中性粒細(xì)胞計數(shù)及總蛋白含量;檢測cd4+cd25+treg的計數(shù)。結(jié)果1、假手術(shù)組10d內(nèi)體重略有增加,無統(tǒng)計學(xué)意義。lps組體重1d下降;4d降至最低,與1d相比有統(tǒng)計學(xué)意義;7d體重明顯下降,10d基本恢復(fù)正常。2、假手術(shù)組在各個時間點(diǎn)均無明顯肺組織病理學(xué)改變。lps組的肺組織病理損傷評分1d最高;4d稍有下降,與1d相比無統(tǒng)計學(xué)意義;7d評分明顯下降,10d基本恢復(fù)正常。3、急性肺損傷術(shù)后,小鼠肺泡灌洗液中cd11b+ly6g+中性粒細(xì)胞、cd11c+mhcⅡ+cd11b+dc、nk1.1+nk細(xì)胞的計數(shù)1d升高、4d達(dá)到高峰,7d下降(p值均小于0.05);小鼠肺泡灌洗液中cd4+t淋巴細(xì)胞、cd4+cd25+treg4d開始出現(xiàn)升高、7d達(dá)到高峰,,10d仍未見明顯下降(p值均小于0.05);小鼠肺泡灌洗液中cd8+t淋巴細(xì)胞、cd19+b細(xì)胞及dc細(xì)胞數(shù)量未見明顯變化。小鼠肺組織中各類免疫細(xì)胞的變化與肺泡灌洗液中的變化類似。4、急性肺損傷術(shù)后,小鼠肺泡灌洗液及肺組織中cd4+t細(xì)胞及cd4+cd25+treg細(xì)胞表面的lag3表達(dá)呈現(xiàn)出相似的變化趨勢,4d開始出現(xiàn)升高、7d達(dá)到高峰(p值均小于0.05)。cd8+t細(xì)胞及cd19+b細(xì)胞上的lag3表達(dá)水平未見明顯變化。5、利用lag3基因敲除小鼠(lag3ko)及野生型小鼠建立急性肺損傷模型,lag3基因敲除小鼠及野生型小鼠術(shù)后1d體重出現(xiàn)降低,4d降至最低,此后出現(xiàn)回升。與野生型小鼠相比,lag3ko小鼠術(shù)后7d體重回升小,10d仍未恢復(fù)至術(shù)前水平(p值均小于0.05)。lag3ko小鼠及野生型小鼠間比較,1d及4d的體重未見統(tǒng)計學(xué)差異;建模后1d和4d,lag3ko小鼠及野生型小鼠肺損傷病理評分無差異。建模后7d及10d,lag3基因敲除小鼠病理損傷評分均高于野生型小鼠(p值均小于0.01)。6、利用lag3基因敲除小鼠及野生型小鼠建立急性肺損傷模型,建模后1d和4d,lag3基因敲除小鼠及野生型小鼠肺泡灌洗液中性粒細(xì)胞計數(shù)無差異。建模后7d及10d,lag3基因敲除小鼠肺泡灌洗液中性粒細(xì)胞計數(shù)均高于野生型小鼠(p值均小于0.01)。7、利用lag3基因敲除小鼠及野生型小鼠建立急性肺損傷模型,建模后1d和4d,lag3基因敲除小鼠及野生型小鼠肺泡灌洗液總蛋白含量無差異。建模后7d及10d,lag3基因敲除小鼠肺泡灌洗液總蛋白含量均高于野生型小鼠(p值均小于0.01)。8、利用lag3基因敲除小鼠及野生型小鼠建立急性肺損傷模型,結(jié)果提示7d及10d這兩個時間點(diǎn),lag3基因敲除小鼠treg數(shù)量較野生型小鼠顯著下調(diào),有統(tǒng)計學(xué)意義(p值均小于0.01)。在1d和4d這兩個時間點(diǎn),兩種小鼠間比較無統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論本模型急性肺損傷在1d-4d為肺部炎癥的急性期,7d-10d為炎癥消退期。肺內(nèi)各類免疫細(xì)胞數(shù)量的動態(tài)改變提示中性粒細(xì)胞、dc細(xì)胞、nk細(xì)胞主要作用于肺損傷炎癥急性期,cd4+t細(xì)胞、cd4+cd25+treg細(xì)胞及巨噬細(xì)胞主要作用于肺損傷炎癥消退期。其中cd4+cd25+treg的數(shù)量在急性肺損傷炎癥消退期出現(xiàn)增多且lag3在cd4+cd25+treg上的表達(dá)在炎癥消退期也出現(xiàn)上調(diào)。lag3基因敲除小鼠急性肺損傷炎癥消退出現(xiàn)延遲,提示lag3參與調(diào)控急性肺損傷炎癥消退,可能與lag3對CD4+CD25+Treg的功能調(diào)控有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R563.8

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李洪霞;白介素-10對急性肺損傷的保護(hù)作用[J];國外醫(yī)學(xué).呼吸系統(tǒng)分冊;2000年02期

2 劉寶軍 ,趙藝亭 ,白桂云;急性肺損傷的診治進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2001年12期

3 ;全球首個急性肺損傷治療藥西維來司他在日本獲得許可[J];中國新藥雜志;2002年07期

4 ;急性肺損傷治療藥西維來司他在日本獲得許可[J];中國新藥雜志;2002年12期

5 鄭鵬,楊徑,申群喜;沐舒坦對急性肺損傷患者保護(hù)作用的研究[J];華夏醫(yī)學(xué);2002年03期

6 陳朝輝,趙文韜;角化細(xì)胞生長因子與急性肺損傷[J];廣西醫(yī)學(xué);2003年09期

7 馬曉薇,曹相原;肺表面活性物質(zhì)蛋白A與急性肺損傷[J];寧夏醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2004年03期

8 趙中江,孟新科,楊徑;沐舒坦對急性肺損傷肺保護(hù)作用的研究[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2004年22期

9 王殿華,劉旭,凌亦凌;中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶與急性肺損傷[J];國外醫(yī)學(xué).呼吸系統(tǒng)分冊;2004年06期

10 吳穗晶,杜欣,陸澤生,鐘立業(yè),龍怡;粒細(xì)胞集落刺激因子動員外周血造血干細(xì)胞致急性肺損傷1例[J];白血病.淋巴瘤;2004年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 武慶平;金勝威;劉東;桂平;尚游;馮丹;姚尚龍;;急性肺損傷研究新思路抗炎和促炎癥消退相結(jié)合[A];2010中華醫(yī)學(xué)會全國麻醉學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2010年

2 祝勝美;張紅剛;;輸血相關(guān)性急性肺損傷[A];2004年浙江省麻醉學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2004年

3 張寒鈺;謝苗榮;;輸血相關(guān)性急性肺損傷及其新進(jìn)展[A];第十一次全國急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中華醫(yī)學(xué)會急診醫(yī)學(xué)分會成立二十周年慶典論文匯編[C];2006年

4 蔣龍元;;抗凝、抗炎雙向調(diào)節(jié)治療在急性肺損傷的應(yīng)用前景[A];《中華急診醫(yī)學(xué)雜志》第八屆組稿會暨急診醫(yī)學(xué)首屆青年論壇論文匯編[C];2009年

5 高冬娜;張_g;;急性肺損傷研究進(jìn)展[A];2009年全國危重病急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

6 梁子敬;黃偉青;;表皮生長因子對內(nèi)毒素型急性肺損傷的作用實(shí)驗(yàn)研究[A];第五屆全國災(zāi)害醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨常州市醫(yī)學(xué)會急診危重病及災(zāi)害醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會首屆年會學(xué)術(shù)論文集[C];2009年

7 潘鵬飛;于湘友;;側(cè)臥位通氣對急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征患者肺復(fù)張容積的影響[A];第三屆重癥醫(yī)學(xué)大會論文匯編[C];2009年

8 伍峻松;王沈華;周文;陳金明;張茂;徐少文;干建新;趙小綱;;嚴(yán)重創(chuàng)傷合并急性肺損傷惡化進(jìn)展至急性呼吸窘迫綜合征的臨床危險因素分析[A];第七屆全國創(chuàng)傷學(xué)術(shù)會議暨2009海峽兩岸創(chuàng)傷醫(yī)學(xué)論壇論文匯編[C];2009年

9 高冬娜;張_g;;核因子-κB與急性肺損傷治療[A];2010全國中西醫(yī)結(jié)合危重病、急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

10 胡宗風(fēng);孫海晨;邵旦兵;李百強(qiáng);聶時南;;急性肺損傷血管內(nèi)皮保護(hù)作用的臨床研究[A];中華醫(yī)學(xué)會急診醫(yī)學(xué)分會第十三次全國急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會大會論文集[C];2010年

相關(guān)重要報紙文章 前9條

1 熊學(xué)莉邋通訊員 曾理;急性肺損傷早診早治降低病死率[N];健康報;2008年

2 郭姜寧 常亮 王曉靜;高海拔地區(qū)急性肺損傷防治難題攻克[N];科技日報;2003年

3 郭姜寧 常亮 王曉靜;急性肺損傷防治難題攻克[N];醫(yī)藥導(dǎo)報(中藥報);2003年

4 ;Ｃａｌｆａｃｔａｎｔ在兒科急性肺損傷中的療效[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2005年

5 張國民;首個治療“非典”新藥進(jìn)入臨床研究[N];中國醫(yī)藥報;2003年

6 記者 張曉松;治非典新藥首次獲批臨床試驗(yàn)[N];新華每日電訊;2003年

7 鄒爭春 記者 陳磊;我國學(xué)者發(fā)現(xiàn)新生兒急性肺損傷新病因[N];科技日報;2013年

8 李山;德發(fā)現(xiàn)致命性輸血并發(fā)癥致病機(jī)理[N];保健時報;2010年

9 李山;德找到致命性輸血并發(fā)癥致病機(jī)理[N];科技日報;2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 郭亮;ANGPTL4在LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷中的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 宮國華;三唑類化合物的合成及心房應(yīng)力調(diào)節(jié)和抗炎作用研究[D];延邊大學(xué);2015年

3 孫建斌;雙鏈核糖核酸（dsRNA）的產(chǎn)生及其調(diào)控的信號通路在急性肺損傷發(fā)生發(fā)展中的分子機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 蘇玉杰;保肺解窘合劑治療膿毒癥致急性肺損傷的臨床研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2015年

5 張勇;褪黑素通過抑制NLRP3炎性小體減輕小鼠急性肺損傷[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

6 祝華;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療急性肺損傷模型的機(jī)制探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

7 賈春娥;陰離子交換轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Pendrin在急性肺損傷小鼠模型中的作用和干預(yù)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

8 杜松林;α1-抗胰蛋白酶對體外循環(huán)術(shù)后急性肺損傷的保護(hù)作用研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

9 王勤;解偶聯(lián)蛋白2在脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷中的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

10 趙燕;雷帕霉素通過抑制Th17細(xì)胞分化減輕LPS誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 劉安;間充質(zhì)干細(xì)胞在急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征中的研究進(jìn)展[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2013年

2 何鑫敏;氦氧通氣對急性肺損傷病人的治療作用及機(jī)制[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

3 任鴻昌;MMP-9、AQP-1、AQP-5在胰蛋白酶導(dǎo)致的急性肺損傷中的表達(dá)及意義[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

4 宣國平;Ang2在急性肺損傷中的作用及其機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

5 侯林義;抗CD14單克隆抗體對膿毒癥急性肺損傷大鼠肺泡巨噬細(xì)胞內(nèi)NF-κB(p65)影響的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

6 馮迪;PPAR γ通路參與電針預(yù)處理對急性肺損傷的保護(hù)作用及相關(guān)機(jī)制[D];蘇州大學(xué);2015年

7 焦艷;PGC-1α在急性肺損傷中的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

8 莊佩佩;LPS誘導(dǎo)小鼠急性肺損傷及MgSO_4對其保護(hù)作用機(jī)制的研究[D];寧夏大學(xué);2015年

9 江偉哲;右美托咪定對大鼠急性肺損傷時肺組織NF-κB活性及細(xì)胞因子的影響[D];四川醫(yī)科大學(xué);2015年

10 李君;原兒茶酸對脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠的保護(hù)作用[D];濱州醫(yī)學(xué)院;2014年

，

本文編號：2392487