【摘要】：目的 利用變性梯度凝膠電泳(DGGE)及熒光定量PCR等方法對肝移植急性排斥及相關(guān)干預(yù)(抗生素、益生菌)大鼠腸道雙歧桿菌種群結(jié)構(gòu)變化及其多樣性特征進(jìn)行研究,以期發(fā)現(xiàn)與肝移植急性排斥反應(yīng)相關(guān)的雙歧桿菌菌種。 方法 將純系雄性Lewis大鼠24只和BN大鼠42只按如下分組： (1)假手術(shù)組(n=6)：正常BN大鼠,只打開腹腔便縫合； (2)同基因肝移植組(n=6)：供、受體各6只,均采用BN大鼠； (3)異基因肝移植組(n=6)：Lewis大鼠6只為供體,BN大鼠6只為受體； (4)抗生素組(n=6)：異基因肝移植(Lewis-BN)+2ml慶大霉素灌胃(4萬單位)； (5)益生菌組(n=6)：異基因肝移植(Lewis-BN)+2ml益生菌培菲康(長雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、糞鏈球菌三聯(lián)活菌膠囊,2.0×10(?)8CFU/ml)灌胃。 上述大鼠肝移植利用改良的Kamada二套袖法,從而構(gòu)建肝移植排斥反應(yīng)大鼠模型,分別于術(shù)前1天、術(shù)后1周和術(shù)后2周的采集糞便標(biāo)本,2周后處死大鼠采集肝臟組織及腔靜脈血用于分析肝臟病理改變、肝功能水平及血漿內(nèi)毒素水平,并利用巢式PCR-DGGE、RT-PCR等分子生物學(xué)實驗技術(shù)分析不同時間段腸道雙歧桿菌種群結(jié)構(gòu)變化。 結(jié)果 (1) DGGE圖譜顯示：術(shù)前1天,除益生菌組外,各組雙歧桿菌多樣性無顯著性差異；益生菌組多樣性相比異基因組多樣性下降(P0.05)。術(shù)后1周,和對照組、同基因組相比,異基因組雙歧桿菌多樣性下降(P0.05)；相比異基因組,抗生素組多樣性升高(P0.05),益生菌組多樣性下降(P0.05)。術(shù)后2周,對照組、同基因組和異基因組之間雙歧桿菌多樣性無差異；相比異基因組,抗生素組多樣性升高(P0.05),益生菌組多樣性下降(P0.05)。 (2)術(shù)前1天,對照組、同基因組、異基因組大鼠各種雙歧桿菌含量均無統(tǒng)計學(xué)差異；與異基因組相比,抗生素組總雙歧桿菌、長雙岐桿菌、小鏈雙歧桿菌、兩雙歧桿菌含量下降(P0.05)；而經(jīng)過培菲康灌胃后,益生菌組總雙歧桿菌、長雙歧桿菌、小鏈雙歧桿菌明顯增加(P0.05)。術(shù)后1周,與對照組相比,同基因組齒雙歧桿菌含量有所增加(P0.05),異基因組總雙歧桿菌、小鏈雙歧桿菌、動物雙歧桿菌含量減少(P0.05),齒雙歧桿菌增加(P0.05),同時,異基因組相比同基因組,小鏈雙歧桿菌有所下降；和異基因組相比,抗生素組總雙歧桿菌、長雙歧桿菌、小鏈雙歧桿菌及動物雙歧桿菌含量下降(P0.05),而益生菌組總雙歧桿菌、長雙歧桿菌、動物雙歧桿菌含量增加(P0.05)。術(shù)后2周,和對照組相比,同基因組齒雙歧桿菌含量上升(P0.05)；異基因組小鏈雙歧桿菌、動物雙歧桿菌含量下降(P0.05),齒雙歧桿菌含量上升(P0.05)。此外,異基因組相比同基因組小鏈雙歧桿菌有所下降(P0.05)。和異基因組相比,抗生素組總雙歧桿菌、長雙歧桿菌、小鏈雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌含量下降(P0.05)；益生菌組總雙歧桿菌、長雙歧桿菌、小鏈雙歧桿菌、動物雙歧桿菌上升(P0.05)。 結(jié)論 (1)肝移植急性排斥反應(yīng)可造成大鼠腸道雙岐桿菌結(jié)構(gòu)變化,主要表現(xiàn)為雙歧桿菌多樣性下降,總雙歧桿菌、長雙歧桿菌、小鏈雙歧桿菌等種類含量的下降及齒雙歧桿菌含量的上升。 (2)應(yīng)用抗生素和益生菌處理肝移植大鼠可減輕移植排斥反應(yīng),并在一定程度上恢復(fù)腸道雙歧桿菌的結(jié)構(gòu)�？股乜稍斐梢浦泊笫竽c道雙歧桿菌多樣性的上升,同時引起雙歧桿菌總量及長雙歧桿菌、動物雙歧桿菌、小鏈雙歧桿菌的含量下降。而益生菌可以降低雙歧桿菌的多樣性,同時造成雙歧桿菌總量及長雙岐桿菌、動物雙歧桿菌、小鏈雙岐桿菌等的上升。
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【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R657.3

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2354639