【摘要】：背景:大量研究證實(shí)無菌性炎性反應(yīng)在創(chuàng)傷性腦損傷(traumatic brain injury, TBI)后繼發(fā)性腦損傷中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用,但其具體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與調(diào)控機(jī)制目前尚不明確。我們前期臨床及基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)TBI后腦內(nèi)核因子-κB (nuclear factor kappa B,NF-κB)炎性反應(yīng)通路可被顯著激活至某一高峰,然后逐漸下降。提示腦內(nèi)可能存在某種重要介質(zhì)或通路在TBI后被激活,從而負(fù)向調(diào)控炎性反應(yīng)。因此,尋找此種可以下調(diào)TBI后腦內(nèi)炎性反應(yīng)的因子或因素顯得愈發(fā)重要。國際最新研究表明CD24可以通過下調(diào)NF-κB的活性,從而負(fù)向調(diào)控?zé)o菌性炎性反應(yīng)。TBI后腦內(nèi)的炎性反應(yīng)便是一種無菌性炎性反應(yīng),但關(guān)于CD24在TBI后腦內(nèi)無菌性炎性反應(yīng)中的作用機(jī)制至今未有報(bào)道。因此,本課題將針對TBI后腦內(nèi)CD24的表達(dá)時程及其在無菌性炎性反應(yīng)中的潛在作用機(jī)制進(jìn)行研究。方法:本課題首先從臨床研究出發(fā),選取并收集臨床TBI患者術(shù)中傷灶周圍腦組織標(biāo)本作為TBI組,同時收集顱底良性腫瘤手術(shù)入路上腦組織作為對照組,運(yùn)用實(shí)時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction, PCR)、Western blotting、免疫組織化學(xué)染色及免疫熒光技術(shù)檢測CD24及炎性反應(yīng)通路上關(guān)鍵因子髓樣分化蛋白88 (myeloid differentiation factor 88, MyD88)的表達(dá)及分布情況;使用實(shí)時定量PCR對NF-κB下游炎性因子腫瘤壞死因子-α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白介素-1β (interleukin-1β, IL-1β)的mRNA表達(dá)水平進(jìn)行檢測;同時對臨床患者預(yù)后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。隨后使用C57BL/6小鼠,運(yùn)用改良Feeney法建立體內(nèi)TBI模型,分別采用實(shí)時定量PCR、Western blotting及免疫熒光雙染方法檢測CD24的表達(dá)及細(xì)胞定位情況。根據(jù)動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果,采用重組高遷移率族蛋白 1 (recombinant high mobility group box 1,rHMGB1)處理的小鼠原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元及星形膠質(zhì)細(xì)胞建立體外神經(jīng)細(xì)胞炎性反應(yīng)模型,分別采用實(shí)時定量PCR、Western blotting及免疫熒光方法檢測CD24的表達(dá)及分布情況。根據(jù)體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)中CD24的表達(dá)情況,分別運(yùn)用RNA干擾技術(shù)針對CD24進(jìn)行下調(diào),系統(tǒng)評價NF-κB炎性反應(yīng)通路的活性變化。采用實(shí)時定量PCR及Western blotting技術(shù)檢測CD24的mRNA及蛋白表達(dá)水平變化;電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)檢測NF-κB的DNA結(jié)合活性;實(shí)時定量PCR檢測炎性因子TNF-α及IL-1β的mRNA表達(dá)水平,從而探討CD24在TBI后腦內(nèi)無菌性炎性反應(yīng)中的具體作用。結(jié)果:臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:TBI后腦內(nèi)CD24的mRNA及蛋白表達(dá)水平均較對照組明顯升高,且具有時間依賴性,隨致傷時間延長而不斷增高(至72h后);同時CD24的表達(dá)可見于神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞及小膠質(zhì)細(xì)胞中。動物實(shí)驗(yàn)中,小鼠TBI后傷灶周圍皮層內(nèi)CD24的mRNA及蛋白水平均較假手術(shù)組明顯增高,且表達(dá)高峰位于傷后7d。針對CD24予以RNA干擾后,CD24的表達(dá)水平得到顯著抑制,同時NF-1κB活性及其下游炎性因子TNF-α和IL-1β的mRNA水平明顯上調(diào)。體外實(shí)驗(yàn)中,小鼠原代皮層神經(jīng)元及星形膠質(zhì)細(xì)胞中施加rHMGB1后,可以顯著誘導(dǎo)NF-κB炎性反應(yīng)通路的激活,同時CD24的mRNA及蛋白水平也明顯升高,并且其激活高峰位于rHMGB1施加后36h;針對CD24進(jìn)行RNA干擾后,神經(jīng)元及星形膠質(zhì)細(xì)胞中的CD24表達(dá)水平可以顯著抑制,同時能夠明顯上調(diào)NF-κB炎性反應(yīng)通路的活性。結(jié)論:我們首先從臨床研究發(fā)現(xiàn)TBI后腦內(nèi)CD24表達(dá)水平明顯增高,然后分別從體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)兩方面驗(yàn)證此發(fā)現(xiàn),并且運(yùn)用RNA干擾技術(shù)發(fā)現(xiàn)CD24的針對性下調(diào)可以顯著上調(diào)NF-κB炎性反應(yīng)通路的活性。結(jié)果表明TBI后腦內(nèi)CD24的高表達(dá)可能在無菌性炎性反應(yīng)中發(fā)揮著至關(guān)重要的負(fù)向調(diào)控作用,高度提示CD24的靶向干預(yù)可能在TBI的臨床治療中具有潛在的應(yīng)用價值。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R651.15

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 鄒萌萌;吳誠義;;CD24在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中的表達(dá)及臨床意義[J];中國普通外科雜志;2008年11期

2 楊營利;曹潤福;;CD24與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J];實(shí)用臨床醫(yī)學(xué);2007年11期

3 周鑫;曹勇;羅杰;曾曉華;;CD24基因多態(tài)性與乳腺癌遺傳易感性的關(guān)系[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年11期

4 朱學(xué)偉;朱冬冬;孫克巍;孟粹達(dá);董震;;路易斯寡糖-X及CD24在鼻內(nèi)翻性乳頭狀瘤中的表達(dá)[J];中國耳鼻咽喉頭頸外科;2008年09期

5 王亞萍;孫雷;;CD24和PCNA在卵巢漿液性交界性腫瘤中的表達(dá)情況[J];中國誤診學(xué)雜志;2007年11期

6 李偉東;劉芳芳;徐新生;劉冰冰;崔力方;位嘉;郎榮剛;范宇;谷峰;付麗;;乳腺浸潤性微乳頭狀癌中CD44~+/CD24~(-/low)和CD24~+表型細(xì)胞的研究[J];中國肺癌雜志;2009年06期

7 牛建華;董曉剛;木拉提;袁明;趙瑾;;CD24在胃癌及癌前病變中的表達(dá)及意義[J];農(nóng)墾醫(yī)學(xué);2009年02期

8 李偉東;劉芳芳;徐新生;劉冰冰;崔力方;位嘉;郭曉靜;郎榮剛;范宇;谷峰;付麗;;乳腺浸潤性微乳頭狀癌中CD44~+/CD24~(-/low)和CD24~+表型細(xì)胞的研究[J];中華乳腺病雜志(電子版);2009年05期

9 陳金拳;王加林;趙亞萍;周瑋;;Sca-1,CD24和Muc1在雌性大鼠乳腺中的分布[J];生物醫(yī)學(xué)工程研究;2008年03期

10 鑒濤;代遠(yuǎn)斌;黃淑君;;CD24蛋白在胃癌中的表達(dá)及臨床意義[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年10期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 李偉;創(chuàng)傷性腦損傷后腦內(nèi)CD24在無菌性炎性反應(yīng)中的作用機(jī)制研究[D];南京大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前8條

1 金晨;小鼠肝臟CD24~+NKT細(xì)胞的來源鑒定[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2015年

2 鄒萌萌;CD24在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中表達(dá)的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2008年

3 周廣海;CD24在原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌細(xì)胞的表達(dá)及其臨床意義[D];南昌大學(xué);2008年

4 王亞萍;CD24和PCNA在卵巢漿液性交界性腫瘤中的表達(dá)及其相關(guān)性研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2006年

5 李偉東;乳腺浸潤性微乳頭狀癌中CD44~+/CD24~(-/low)和CD24~+的表達(dá)和意義[D];天津醫(yī)科大學(xué);2009年

6 石云;CD24分子對調(diào)節(jié)性T細(xì)胞發(fā)育及功能的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

7 董曉剛;CXCL5與CD24在胃癌中的表達(dá)與分布[D];石河子大學(xué);2009年

8 李明超;CD133和CD24在良性前列腺增生和前列腺癌干細(xì)胞中的表達(dá)及作用[D];南昌大學(xué);2009年

，

本文編號：2323092