【摘要】：背景:現(xiàn)有的研究結(jié)果證明,內(nèi)皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化(End MT)在異位骨化病程中起主要作用。目的:基于SMAD7基因在阻止肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化等內(nèi)皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化進(jìn)展中的潛能,驗(yàn)證其是否是異位骨化潛在的治療靶點(diǎn)。方法:構(gòu)建了過(guò)表達(dá)SMAD7的慢病毒顆粒,并在大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞中測(cè)定了其最佳滴度和轉(zhuǎn)染效率。隨后,將該病毒顆粒注入構(gòu)建的大鼠跟腱損傷模型中,對(duì)照組注射生理鹽水。使用qPCR和蛋白印跡實(shí)驗(yàn)分析了損傷處內(nèi)皮和間質(zhì)標(biāo)志物的表達(dá),采用X射線和組織染色觀察異位骨化病程轉(zhuǎn)化。結(jié)果與結(jié)論:(1)局部注射轉(zhuǎn)染SMAD7基因的病毒載體可引起內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物(CD31,VE-cadherin)發(fā)生上調(diào),同時(shí)間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物(N-cadherin,vimentin)發(fā)生下調(diào),提示SMAD7的局部高表達(dá)阻斷了內(nèi)皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化改變。這種表達(dá)差異在造模后10周時(shí)比在造模后6周時(shí)更明顯;(2)X射線片和組織染色顯示,相比對(duì)照組,注入表達(dá)SMAD7的慢病毒后,肌腱組織中骨化結(jié)構(gòu)缺失;(3)因此認(rèn)為,促進(jìn)局部SMAD7的高表達(dá)可用來(lái)預(yù)防術(shù)后異位骨化形成,而不影響正常的傷口愈合過(guò)程。
[Abstract]:Background: current studies have demonstrated that endothelial cell to mesenchymal cell transformation (end MT) plays a major role in the course of ectopic ossification. Aim: to investigate whether SMAD7 gene is a potential therapeutic target for ectopic ossification based on the potential of SMAD7 gene in preventing the development of endothelium-mesenchymal transformation such as myofibroblast transformation. Methods: the lentivirus granules expressing SMAD7 were constructed and the optimal titer and transfection efficiency were determined in rat aortic endothelial cells. Then, the virus particles were injected into the model of Achilles tendon injury in rats, and the control group was injected with normal saline. The expression of endothelial and interstitial markers was analyzed by qPCR and Western blot. The course of ectopic ossification was observed by X-ray and tissue staining. Results and conclusion: (1) Local injection of SMAD7 gene vector could induce up-regulation of endothelial cell marker (CD31- VE-cadherin) and down-regulation of N-cadherin- vimentin, suggesting that local overexpression of SMAD7 blocked the change of endothelium-interstitial transformation. The difference in expression was more significant at 10 weeks than at 6 weeks after modeling. (2) X-ray and tissue staining showed that the ossification structure of tendon tissue was missing after injecting lentivirus expressing SMAD7 in the control group; (3) the results showed that the ossification structure of the tendon was absent after injection of the lentivirus expressing SMAD7. The high expression of SMAD7 can be used to prevent the formation of ectopic ossification without affecting the normal wound healing process.
【作者單位】： 解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)海醫(yī)院;上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院;
【基金】：上海市衛(wèi)生局青年基金(20134y110)~~
【分類號(hào)】：R686

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本文編號(hào)：2137030