本文選題：失血性休克復(fù)蘇延遲 + 動物模型　； 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：研究背景： 失血性休克的復(fù)蘇延遲會導(dǎo)致嚴重的全身系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)、多臟器功能衰竭，死亡率高。休克誘導(dǎo)的腸粘膜屏障損傷被認為是多臟器功能衰竭的“始動因素”。因此，及早、準確的評估腸粘膜屏障損傷程度具有重要的臨床意義。然而，目前還沒有相關(guān)血清學(xué)指標能夠準確評估失血性休克復(fù)蘇延遲導(dǎo)致的腸粘膜屏障損傷。 對于復(fù)蘇延遲的失血性休克，常規(guī)液體復(fù)蘇效果不佳，且不能有效減輕腸粘膜屏障損傷。體外膜肺氧合（ECMO）作為一種生命支持技術(shù)，在過去的四十年里，被用于救治新生兒嚴重的心、肺功能衰竭，難復(fù)性心臟驟停和移植心臟的早期功能衰竭等。對于復(fù)蘇延遲的失血性休克，在ECMO的支持下能否改善失血性休克的復(fù)蘇效果從而減輕腸粘膜屏障損傷，，尚需進一步的實驗研究。 目的： 構(gòu)建復(fù)蘇延遲的失血性休克兔模型，探討不同嚴重程度的失血性休克對腸粘膜屏障損傷的影響，以及血清DAO能否反映失血性休克復(fù)蘇延遲后的腸粘膜屏障損傷程度；比較采用ECMO和常規(guī)液體復(fù)蘇失血性休克的復(fù)蘇效果，探討ECMO減輕失血性休克復(fù)蘇延遲致兔腸粘膜屏障損傷的作用。 方法： 1.復(fù)蘇延遲的失血性休克兔模型的建立及腸粘膜屏障損傷的評估 實驗以新西蘭大白兔為實驗動物，采用血壓控制、放血法，通過使平均動脈壓（MAP）達到不同水平的休克血壓、維持休克狀態(tài)180min，再行常規(guī)液體復(fù)蘇。30只新西蘭大白兔隨機分為三組：對照組、中度休克組（放血至休克血壓50-41mmHg）和重度休克組（放血至休克血壓40-31mmHg）。實驗采用持續(xù)有創(chuàng)動脈血壓監(jiān)測儀記錄MAP變化，便攜式動脈血氣分析儀檢測乳酸水平的動態(tài)變化，ELISA法檢測血清TNF-α和腸組織髓過氧化物酶（MPO）的表達水平，HE染色進行腸粘膜病理損傷Chiu氏評分，以及免疫熒光染色法檢測腸組織的緊密連接蛋白（Claudin）-1和細胞間粘附分子（ICAM-1）的表達水平，使用Image-Pro Plus7.0software分析各組的熒光強度。 2. ECMO減輕復(fù)蘇延遲的失血性休克兔腸粘膜屏障損傷 實驗以復(fù)蘇延遲的失血性休克兔模型中的重度休克組為基礎(chǔ)，將30只新西蘭大白兔隨機分為對照組、常規(guī)液體復(fù)蘇組和ECMO復(fù)蘇組。另取10只新西蘭大白兔放血用于預(yù)充體外循環(huán)機。采用血壓控制性放血，休克維持期的MAP設(shè)定在40-31mmHg，維持180min，而后分別采用ECMO和常規(guī)液體復(fù)蘇失血性休克。比較復(fù)蘇延遲的失血性休克在復(fù)蘇后的MAP，腸粘膜損傷Chiu氏評分，動脈血乳酸和血清TNF-α含量水平，以及腸組織的MPO、ICAM-1和Claudin-1表達水平。 結(jié)果： 1．復(fù)蘇延遲的失血性休克兔模型。成功采用血壓控制性放血法構(gòu)建了復(fù)蘇延遲的失血性休克兔模型，休克維持時間為180min，休克維持期的MAP在30mmHg以上。在休克前，對照組、中度休克組和重度休克組的MAP無顯著差異。對照組的MAP相對穩(wěn)定，波動10896mmHg。中度休克組和重度休克組的MAP分別維持在設(shè)定的MAP50-41mmHg和40-31mmHg范圍內(nèi)。在休克維持期，重度休克組的MAP為35.8±5.6mmHg，中度休克組的MAP為42.8±4.7mmHg。在采用常規(guī)液體復(fù)蘇失血性休克后，中度休克組的MAP顯著低于正常對照組的MAP（70.0±4.8mmHg vs.101.1±3.3mmHg，P0.01）。重度休克組的MAP不僅顯著地低于正常對照組的MAP（41.7±5.1mmHg vs.101.1±3.3mmHg，P0.01），而且，顯著低于中度休克組的MAP（41.7±5.1mmHg vs.70.0±4.8mmHg, P0.01）。復(fù)蘇延遲的失血性休克在常規(guī)液體復(fù)蘇后，MAP恢復(fù)最差。 2.復(fù)蘇延遲的失血性休克兔的休克嚴重程度評估。在休克前，中度休克組和重度休克組的血清TNF-α和乳酸含量水平無顯著差異。在休克復(fù)蘇前和復(fù)蘇后，相對于中度休克組，重度休克組的血清TNF-α含量水平顯著升高（0.319±0.016ng/ml vs.0.215±0.009ng/ml,P0.01；0.626±0.0429ng/ml vs.0.362±0.020ng/ml，P0.01）；動脈血乳酸水平顯著升高（18.97±1.52mmol/L vs.14.25±0.80mmol/L，P0.01；13.58±1.27mmol/L vs.10.29±1.02mmol/L，P0.01），均具有統(tǒng)計學(xué)差異。 3．復(fù)蘇延遲的失血性休克兔腸粘膜屏障損傷程度的評估。相對于中度休克組，重度休克組的腸粘膜病理損傷Chiu氏評分顯著升高(3.5±0.53vs.2.3±0.67, p0.05)，腸組織Claudin-1表達水平的免疫熒光強度明顯降低（87.39±8.78vs.142.61±10.43，p0.05），ICAM-1表達水平的免疫熒光強度顯著升高（297.17±6.15vs.191.34±11.02，p0.05），以及MPO活性水平顯著升高(0.911±0.068IU/g vs.0.615±0.047IU/g, P0.01)，具有統(tǒng)計學(xué)差異。 4．復(fù)蘇延遲的失血性休克兔血清DAO含量變化。在休克維持期結(jié)束時，中度休克組和重度休克組的血清DAO含量水平均高于對照組(0.153±0.020IU/L、0.252±0.026IU/L vs.0.107±0.008IU/L，P0.01）；在休克復(fù)蘇后，中度休克組、重度休克組的血清DAO含量水平也顯著高于對照組（0.337±0.037IU/L、0.670±0.085IU/L vs.0.110±0.009IU/L，P0.01），具有統(tǒng)計學(xué)差異。進一步比較中度休克組和重度休克組的血清DAO含量水平，結(jié)果顯示在休克復(fù)蘇前和復(fù)蘇后，中度休克組的血清DAO含量水平均低于重度休克組（0.153±0.020IU/L vs.0.252±0.026IU/L，P0.01；0.337±0.037IU/L vs.0.670±0.085IU/L，P0.01）。數(shù)據(jù)結(jié)果統(tǒng)計分析顯示休克復(fù)蘇后的血清DAO含量與血清TNF-α的含量呈正相關(guān)關(guān)系（R=0.970，P0.01），且與腸損傷Chiu氏評分呈正相關(guān)關(guān)系（R=0.601，P0.01）。 5.復(fù)蘇延遲的失血性休克在ECMO支持下的復(fù)蘇效果。在失血性休克前和失血性休克復(fù)蘇前，常規(guī)液體復(fù)蘇組和ECMO復(fù)蘇組的MAP、動脈血乳酸含量水平和血清TNF-α含量水平均無統(tǒng)計學(xué)差異。在休克復(fù)蘇后，相對常規(guī)液體復(fù)蘇組，ECMO復(fù)蘇組的休克復(fù)蘇后MAP顯著升高（63.3±5.6mmHg vs.42.0±5.1mmHg，P0.05），動脈血乳酸含量水平顯著降低（10.53±0.85mmol/L vs.13.63±1.22mmol/L，P0.05）和血清TNF-α含量水平也顯著降低（0.584±0.045ng/ml vs.0.622±0.047ng/ml，P0.05）。 6．ECMO對失血性休克復(fù)蘇延遲兔腸粘膜屏障損傷的作用。相對于常規(guī)液體復(fù)蘇組，ECMO復(fù)蘇組的腸粘膜病理損傷Chiu氏評分顯著降低（2.0±0.67vs.3.6±0.52，p0.01），腸組織的MPO活性水平明顯降低（0.922±0.064IU/g vs.0.685±0.067IU/g，P0.01），Claudin-1表達水平的免疫熒光強度明顯升高（149.07±8.30vs.97.62±9.80，P0.05），而ICAM-1表達水平的免疫熒光強度顯著降低（160.04±9.56vs.236.72±14.12，P0.05）。 結(jié)論： 1.成功構(gòu)建了失血性休克持續(xù)3小時的失血性休克復(fù)蘇延遲兔模型，采用血壓控制性放血構(gòu)建模型的方法可靠高，重復(fù)性好。我們的體會是休克維持期的MAP應(yīng)維持在30mmHg以上。 2.復(fù)蘇延遲的失血性休克兔產(chǎn)生了嚴重的全身性系統(tǒng)炎癥反應(yīng)和腸粘膜屏障損傷。無論在中度休克組、還是在重度休克組，在常規(guī)液體復(fù)蘇后，血清TNF-α含量水平和動脈血乳酸含量水平均顯著升高，腸粘膜病理損傷均明顯加重，腸組織Claudin-1表達水平顯著降低，而腸組織MPO活性水平和ICMA-1表達水平均顯著升高。與此同時，在兩個不同休克血壓（50-41mmHg和40-31mmHg）水平，失血性休克維持期MAP越低，休克嚴重程度和白細胞組織浸潤程度越重，全身系統(tǒng)性炎癥程度和腸粘膜屏障損傷程度越嚴重。 3.血清DAO能夠反映復(fù)蘇延遲的失血性休克兔腸粘膜屏障損傷程度，同時可以反映失血性休克的嚴重程度。血清DAO含量水平在中度休克組和重度休克組均有顯著升高，重度休克組的血清DAO含量水平顯著高于中度休克組；數(shù)據(jù)相關(guān)性統(tǒng)計分析顯示血清DAO和Chiu氏評分、TNF-α均呈正相關(guān)關(guān)系。 4.對于復(fù)蘇延遲失血性休克兔，在ECMO支持下的休克復(fù)蘇效果優(yōu)于常規(guī)液體復(fù)蘇。在ECMO支持下的失血性休克復(fù)蘇，MAP顯著升高，動脈血乳酸含量水平顯著降低，血清TNF-α水平也顯著降低。ECMO復(fù)蘇改善了組織灌注，降低了全身系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)。 5.對于復(fù)蘇延遲的失血性休克兔，ECMO支持下的休克復(fù)蘇明顯減輕了腸粘膜屏障損傷。相對于常規(guī)液體復(fù)蘇組，ECMO復(fù)蘇后的腸粘膜病理損傷程度顯著降低，腸組織的Claudin-1表達水平顯著升高，ICAM-1表達水平和MPO活性水平均顯著降低。 6. ECMO減輕失血性休克復(fù)蘇延遲致兔腸粘膜屏障損傷的可能機制是在ECMO支持下的休克復(fù)蘇，改善了組織灌注和氧供、降低了全身系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)，從而減輕了腸粘膜組織的白細胞浸潤損傷。
[Abstract]:Background of Study :

The delayed resuscitation of hemorrhagic shock can lead to severe systemic inflammatory reaction , multi - organ failure , and high mortality . Shock - induced intestinal mucosal barrier damage is considered as the " starting factor " of multi - organ failure . Therefore , it is important to assess the degree of intestinal mucosal barrier damage early and accurately . However , there is no relevant serological index to accurately assess the intestinal mucosal barrier damage caused by hemorrhagic shock resuscitation delay .

In the past 40 years , ECMO has been used as a kind of life support technique . In the past 40 years , it has been used to treat neonatal severe heart , lung function failure , refractory heart arrest and early functional failure of transplanted heart .

Purpose :

To establish a model of hemorrhagic shock rabbits with delayed resuscitation delay , to investigate the effects of different severity of hemorrhagic shock on intestinal mucosal barrier injury , and whether serum DAO could reflect the degree of intestinal mucosal barrier injury after hemorrhagic shock resuscitation .
To investigate the effect of ECMO on the recovery of hemorrhagic shock induced by ECMO and conventional liquid resuscitation ( ECMO ) in rabbits .

Method :

1 . establishment of resuscitation delayed hemorrhagic shock rabbit model and assessment of intestinal mucosal barrier damage

Thirty New Zealand rabbits were randomly divided into three groups : control group , moderate shock group ( bleeding to shock blood pressure 50 - 41 mmHg ) and severe shock group ( bleeding to shock blood pressure 40 - 31mmHg ) .

2 . ECMO alleviated delayed resuscitation delayed hemorrhagic shock rabbit intestinal mucosal barrier injury

In this study , 30 New Zealand rabbits were randomly divided into control group , normal liquid resuscitation group and ECMO resuscitation group .

Results :

MAP of moderate shock group was 35.8 鹵 5.6 mmHg and MAP of moderate shock group was 42.8 鹵 4.7 mmHg . MAP of moderate shock group was significantly lower than that of normal control group ( 71.0 鹵 4.8 mmHg vs . 101.1 鹵 3.3 mmHg , P0.01 ) . MAP of the severe shock group was not only significantly lower than that of the normal control group ( 41.7 鹵 5.1 mmHg vs . 101.1 鹵 3.3 mmHg , P0.01 ) , but also significantly lower than that in the moderate shock group ( 41.7 鹵 5.1 mmHg vs . 70.0 鹵 4.8 mmHg , P0.01 ) . After resuscitation with delayed resuscitation , MAP recovered worst after conventional liquid resuscitation .

2 . The shock severity of hemorrhagic shock rabbits with delayed resuscitation was assessed . There was no significant difference in serum TNF - 偽 and lactate levels in moderate shock group and severe shock group before and after shock . Compared with moderate shock group , the levels of serum TNF - 偽 in severe shock group were significantly higher than those in moderate shock group ( 0.319 鹵 0.016ng / ml vs . 0.215 鹵 0.009ng / ml , P0.01 ) .
0.626鹵0.0429ng/ml vs.0.362鹵0.020ng/ml,P0.01)錛

本文編號：1994540