本文選題：誘導(dǎo)多能性干細(xì)胞 + 腦出血��； 參考：《鄭州大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：出血性腦卒中（ICH）是一種嚴(yán)重的腦卒中亞型，它具有高發(fā)病率、死亡率、致殘率和復(fù)發(fā)率的特點(diǎn)，且目前尚缺乏有效的治療措施。由腦出血引發(fā)的大腦損傷的機(jī)制較復(fù)雜，而其最初的傷害（原發(fā)性損害）主要體現(xiàn)在血腫在腦實(shí)質(zhì)內(nèi)的形成和擴(kuò)張；其次繼發(fā)性的損害是由三種相互交織的級(jí)聯(lián)反應(yīng)引起的，包括顱內(nèi)炎癥反應(yīng)，紅細(xì)胞裂解和凝血酶的產(chǎn)生等，繼發(fā)性損害可通過腦水腫、神經(jīng)細(xì)胞凋亡和退化引起嚴(yán)重的神經(jīng)功能障礙，甚至死亡。越來越多的證據(jù)表明，炎癥在腦出血引起的繼發(fā)性腦損害中起到極其關(guān)鍵的作用，并提示炎癥通路是具有應(yīng)用前景的腦出血治療靶點(diǎn)。 干細(xì)胞治療在實(shí)驗(yàn)性ICH模型的神經(jīng)修復(fù)等研究中得到廣泛應(yīng)用。誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞/iPSCs）是一種新的干細(xì)胞群，該干細(xì)胞群的獲得是通過導(dǎo)入特定的轉(zhuǎn)錄因子將終末分化的體細(xì)胞重編程為多能干細(xì)胞，并且因?yàn)楸苊饬藗惱硇曰蛎庖咴缘膯栴}被視為有應(yīng)用前景的臨床細(xì)胞治療候選。最近的研究表明，，它可減少在缺血性腦卒中和人類疾病的其他動(dòng)物模型中的炎癥性損害。不過，目前還不清楚iPSCs的治療是否有可能在出血性腦卒中后的急性先天性炎癥反應(yīng)中發(fā)揮抗炎作用。在本項(xiàng)研究中，我們?cè)谀z原酶誘發(fā)的大鼠腦出血性卒中模型中移植iPS細(xì)胞，并探討其對(duì)腦急性炎癥、神經(jīng)損傷和恢復(fù)的治療效果。 目的: 在膠原酶誘發(fā)的大鼠腦出血性卒中模型中，探討誘導(dǎo)多能干細(xì)胞移植對(duì)腦急性炎癥、神經(jīng)損傷和恢復(fù)的治療效果。 方法: 1.選取80只SD大鼠，20只立體注射無菌生理鹽水為假手術(shù)組（Sham組）；60只立體定位注射Ⅶ型膠原酶于左側(cè)紋狀體，建立腦出血模型；造模后6小時(shí)后隨機(jī)分成兩組分別原位注射誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(5μl PBS中懸浮1×106個(gè)iPSCs細(xì)胞)和磷酸緩沖液(5μl PBS），即移植組（iPSCs組）與模型組（PBS組）； 2.建模后第48小時(shí)，腦血腫周圍組織熒光定量PCR檢測(cè)兩組大鼠血腫周圍炎癥因子水平；第3天，免疫熒光染色檢測(cè)血腫周圍的炎癥細(xì)胞與神經(jīng)凋亡細(xì)胞，并且采用干濕重法與磁共振成像分析來測(cè)量?jī)山M大鼠腦含水量；采用改良肢體平衡試驗(yàn)MLPT在建模后第0,1,3,7,14,28以及42天分別對(duì)兩組大鼠進(jìn)行行為學(xué)功能評(píng)價(jià)； 3.第42天，尼氏染色觀察腦出血后神經(jīng)元損傷修復(fù)效果以及免疫熒光染色觀察膠質(zhì)疤痕厚度和探測(cè)移植的干細(xì)胞。 結(jié)果: 1.與模型組相比，移植組促進(jìn)大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)，MLPT評(píng)分從第14天起至42天均高于模型組（P0.01）； 2.移植組腦血腫旁組織中促炎性因子白介素1β（IL-1β）、IL-6和腫瘤壞死因子α（TNF-α）顯著下降，而抗炎性因子IL-10升高了2倍。出血半球的腦含水量較模型組低（P0.05），非出血半球無差別；中性粒細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞較模型組均有不同程度的下降（P0.05），以TUNEL和活化的半胱天冬蛋白酶3（active caspase-3）為標(biāo)記的壞死與凋亡的神經(jīng)細(xì)胞在移植組中細(xì)胞數(shù)低于模型組（P0.05）。 3.移植的干細(xì)胞存活于血腫周圍；與模型組相比，移植組的神經(jīng)細(xì)胞恢復(fù)較好（P0.05），膠質(zhì)疤痕的厚度較低（P0.01）。 結(jié)論: 移植誘導(dǎo)多能性干細(xì)胞可能通過減輕實(shí)驗(yàn)性腦出血急性炎癥反應(yīng)和損傷促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)。
[Abstract]:Hemorrhagic stroke (ICH) is a serious subtype of cerebral apoplexy. It has the characteristics of high incidence, mortality, disability and recurrence rate, and it is still lack of effective treatment. The mechanism of brain injury caused by cerebral hemorrhage is complex, and its initial injury (primary damage) is mainly reflected in the formation and formation of hematoma in the brain parenchyma. The secondary damage is caused by three interlaced cascade reactions, including intracranial inflammation, erythrocyte lysis, and the production of thrombin. Secondary damage can be caused by brain edema, nerve cell apoptosis and degeneration, causing severe neurological dysfunction and death. More and more evidence suggests that inflammation is in the brain. It plays an important role in secondary brain damage caused by blood. It also suggests that inflammatory pathway is a promising therapeutic target for intracerebral hemorrhage.
Stem cell therapy is widely used in the research of neural repair of experimental ICH models. Induced pluripotent stem cells (iPS cell /iPSCs) is a new stem cell group. The stem cell group is obtained by reprogramming the end differentiated somatic cells by introducing specific transcription factors into pluripotent stem cells, and because it avoids ethical or exemption. The problem of Phytophthora is considered as a promising candidate for clinical cell therapy. Recent studies have shown that it can reduce inflammatory damage in ischemic stroke and other animal models of human disease. However, it is not clear whether the treatment of iPSCs is likely to occur in acute congenital inflammatory responses after hemorrhagic stroke. In this study, we transplanted iPS cells in the rat model of cerebral hemorrhagic stroke induced by collagenase, and discussed the therapeutic effects on acute brain inflammation, nerve injury and recovery.
Objective:
In the rat model of intracerebral hemorrhagic stroke induced by collagenase, the therapeutic effects of induced pluripotent stem cell transplantation on acute inflammation, nerve injury and recovery were explored.
Method:
1. 80 SD rats were selected and 20 sterile saline were injected into the sham group (group Sham); 60 stereotaxic collagenase was injected into the left striatum, and the cerebral hemorrhage model was established. After 6 hours, the model was randomly divided into two groups to induce the pluripotent stem cells (5 mu L PBS suspended in 1 * 106 iPSCs cells) and the phosphate buffer solution. 5 L PBS), namely the transplant group (group iPSCs) and the model group (group PBS).
2. after forty-eighth hours of modeling, fluorescence quantitative PCR around hematoma was used to detect the level of inflammatory factors around hematoma in two groups of rats; third days, immunofluorescence staining was used to detect the inflammatory cells and apoptotic cells around hematoma, and the water content of the two groups of rats was measured by dry wet weight method and magnetic resonance imaging (MRI), and the improved limb balance was improved. Experiment MLPT evaluated behavioral function of two groups of rats on 0,1,3,7,14,28 and 42 days after modeling respectively.
3. on forty-second days, Nissl staining was used to observe the repair effect of neuron damage after intracerebral hemorrhage, and the thickness of glial scar and the detection of transplanted stem cells were observed by immunofluorescence staining.
Result:
1. compared with the model group, the transplantation group promoted the recovery of neurological function in rats, and the MLPT score increased from fourteenth days to 42 days, which was higher than that of the model group (P0.01).
In 2. transplantation group, the proinflammatory factor (IL-1 beta), IL-6 and tumor necrosis factor alpha (TNF- alpha) in the Para Para tissue were significantly decreased, while the anti inflammatory factor IL-10 increased by 2 times. The water content of the cerebral hemorrhage hemisphere was lower than that of the model group (P0.05), and the non hemorrhagic hemisphere was not different. The neutrophils and microglia were different to the model group. The number of cells with necrosis and apoptosis marked by TUNEL and activated caspase 3 (active caspase-3) was lower in the transplanted group than in the model group (P0.05).
3. the transplanted stem cells survived around the hematoma. Compared with the model group, the nerve cells recovered well in the transplantation group (P0.05), and the thickness of the glial scar was low (P0.01).
Conclusion:
Transplantation induced pluripotent stem cells may promote neurological function recovery by alleviating acute inflammation and injury in experimental intracerebral hemorrhage.

【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R743.3

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本文編號(hào)：1820089