本文選題：顱腦損傷 + 肝臟�。� 參考：《天津醫(yī)科大學》2013年碩士論文

【摘要】：目的：觀察顱腦損傷后經(jīng)腸系膜靜脈注射特定抗原免疫耐受建立的情況,初步探討肝臟非實質細胞誘導免疫耐受的機制。 方法：1.選取新西蘭兔32只,隨機分成4組,每組8只,依次命名為A-D組,A組為單純顱腦損傷組,B組為注射1ml生理鹽水組,C組為注射1mlMBP(2mg/ml)組,D組為注射1ml腦組織單細胞懸液組(細胞密度為106/ml)。1d四組均開顱造模,取0.8*0.4*0.5cm腦組織制備單細胞懸液；制備好腦組織單細胞懸液后在30min內開腹尋找腸系膜靜脈,B組注射lml生理鹽水。C、D組分別經(jīng)腸系膜靜脈分別注射1mlMBP和1ml單細胞懸液。7d全部處死,取損傷灶周圍腦組織做Fas/FasL的定量PCR。 2.選取20只SD大鼠,隨機分為3組,對照組5只、假手術組5只和損傷組10只,損傷組按傷后時間分為2、4、8、16h和24h5個采血點,在傷后不同時間點采用眼眶取血法,取靜脈血離心后得血清刺激原代培養(yǎng)的大鼠小膠質細胞,培養(yǎng)24h后流式細胞儀測定小膠質細胞MHC-Ⅱ的表達�！� 3.另選取新西蘭兔24只,隨機分成3組,每組8只,依次命名為E-G組,E組為注射1ml生理鹽水組,F組為注射1mlMBP(2mg/ml)組,G組為注射lml單細胞懸液組(細胞密度為106/ml)。手術腦損傷造模、注射抗原同第一部分。分別于術后1d、3d、5d、7d、14d和21d抽取靜脈血,做Elisa測血清中TGF-β,IL-2和IL-10的含量,21d處死,取肝臟組織做免疫熒光測定Foxp+3表達情況。 結果：1.實時定量PCR顯示：損傷后7d單純顱腦損傷組和各處理組Fas均高表達,各組之間未見明顯差異(p＞0.05)；A、B兩組FasL未見表達增高,C組FasL表達顯著升高,與A、B兩組比較有統(tǒng)計學差異(p0.05),D組表達略有升高,與A、B兩組比較未見統(tǒng)計學差異(p＞0.05)。 2.流式細胞結果顯示：空白對照組MHC-Ⅱ微量表達;假手術組有較低表達；損傷組各個時間點均有表達,且隨著時間的推移,MHC-Ⅱ表達增高。損傷組與對照組兩兩比較,差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。 3.Elisa實驗顯示：與E組相比,F組TGF-β、IL-10顯著升高,于14d左右到達高峰,隨后緩慢下降,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05),IL-2相應減低,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)；G組TGF-β、IL-10于10-14d可見略有升高,差異無統(tǒng)計學意義(p0.05),IL-2未見明顯減低,差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)。 4.免疫熒光化學顯示：在注射生理鹽水組和注射腦組織單細胞懸液組中,肝臟石蠟切片中T淋巴細胞未看到明顯橙紅色激發(fā)光。在注射MBP組中可看到靜脈竇中和血管周圍T淋巴細胞中可見橙紅色熒光,說明注射MBP可使肝臟T淋巴細胞表達Foxp+3,與其他兩組相比,有統(tǒng)計學差異(p0.05)。 結論：1.各處理組中,Fas在損傷后均高表達,說明損傷灶周圍有大量淋巴細胞聚集,炎癥反應強烈；經(jīng)腸系膜靜脈注射特定抗原并不能減少Fas的表達。腸系膜靜脈注射MBP可以誘導免疫耐受；注射腦組織單細胞懸液的抗原特異性不高,不能完全誘導免疫耐受。 2.大鼠腦損傷后24h內的血清可使小膠質細胞MHC-Ⅱ的表達增高,小膠質細胞MHC-Ⅱ表達隨著時間的推移不斷升高。從細胞水平支持了顱腦損傷早期炎癥反應的劇烈程度。 3.經(jīng)腸系膜靜脈注射MBP后,可見與E組相比,顯著下降；而注射腦組織單細胞懸液組僅在14d才有下降,表明注射MBP可以誘導免疫耐受,而后者抗原特異性較差。 4. TGF-β、IL-10均是強效免疫抑制因子,它們可以抑制細胞毒性T淋巴細胞的增殖和活化,抑制T,B淋巴細胞的增殖及免疫球蛋白的分泌。注射MBP比注射腦組織單細胞懸液更容易可以誘導免疫耐受。 5.經(jīng)腸系膜靜脈注射MBP后,21d后,在熒光顯微鏡下顯示,靜脈竇及周圍肝組織的T淋巴細胞呈橙紅色熒光,說明其表達了Foxp+3,,側面提示免疫耐受的成功建立。而在另外兩組中,并未發(fā)現(xiàn)T細胞有橙紅色熒光物質表達。說明腦細胞尚不能誘導Foxp+3的表達。
[Abstract]:Objective : To investigate the mechanism of immune tolerance induced by non - essential cells in liver by observing the establishment of immune tolerance of specific antigen in mesenteric vein after craniocerebral injury .

Methods : 1 . Thirty - two New Zealand rabbits were randomly divided into four groups : group A - D group , group A as group A - D , group A as group A - D , group B was injected with 1 ml of MBP ( 2 mg / ml ) group , group D was injected 1ml of brain tissue single cell suspension group ( cell density 106 / ml ) .
In group B , 1 ml of MBP and 1 ml of single cell suspension were injected respectively through mesentery vein in group B . All the rats were sacrificed at 7d , and the brain tissue around the lesion was taken as the quantitative PCR of Fas / FasL .

2 . Twenty SD rats were randomly divided into three groups : control group ( 5 ) , sham operation group ( 5 ) and injury group ( n = 10 ) . The injured group was divided into 2 , 4 , 8 , 16 h and 24 h after injury . After injury , the rats were divided into 2 , 4 , 8 , 16 h and 24 h5 blood sampling points . After injury , the rats were divided into 2 , 4 , 8 , 16 h and 24 h5 blood sampling points . After the injury , the rat microglial cells were cultured in primary culture . After 24 h , the expression of MHC - 鈪，

本文編號：1749422