本文選題：肺沖擊傷 + 肺表面活性相關(guān)蛋白A��； 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：1目的建立穩(wěn)定的成年和幼年SD大鼠肺重度沖擊傷動(dòng)物模型,通過(guò)觀察和比較成年與幼年大鼠的SP-A、SP-B在沖擊傷后不同時(shí)間點(diǎn)的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)的改變,揭示肺組織發(fā)育成熟差異與肺沖擊傷損傷的關(guān)系與特點(diǎn),探討SP-A和SP-B在肺沖擊傷后病理生理中的作用地位和機(jī)制,為肺沖擊傷損傷的臨床救治提供新的理論基礎(chǔ)和指導(dǎo)依據(jù)。2主要研究?jī)?nèi)容和方法2.1成年和幼年大鼠肺重度沖擊傷模型的建立分別選取20天齡的幼年健康SD雄性大鼠和(250±15)g成年健康SD雄性大鼠各40只,用BST-Ⅰ型生物激波管,采用不同的驅(qū)動(dòng)壓致沖擊傷。依據(jù)采用激波管驅(qū)動(dòng)壓的不同,成年大鼠隨機(jī)分為4組:4.5Mpa、4.8Mpa、5.0Mpa和5.5Mpa組,每組各10只;幼年大鼠隨機(jī)分為4.8Mpa、5.0Mpa、5.5Mpa和5.8Mpa組,每組各10只。致傷后觀察記錄各組大鼠的一般生理狀況和24h存活情況;于傷后24h麻醉后活殺存活的動(dòng)物,重點(diǎn)對(duì)肺臟行大體解剖觀察、肺損傷嚴(yán)重程度評(píng)分(肺臟損傷程度分級(jí)(OIS)和簡(jiǎn)明損傷評(píng)分(AIS)),取肺組織病理標(biāo)本行光鏡病理觀察。最終篩選出肺損傷傷情相似的成年和幼年大鼠肺重度沖擊傷模型以備下一步實(shí)驗(yàn)應(yīng)用。2.2成年和幼年大鼠肺重度沖擊傷后SP-A和SP-B的研究:分別選取成年和20天齡的幼年健康的雄性SD大鼠各48只,分別各自隨機(jī)分為6組,分別為正常對(duì)照組、沖擊傷后0h、2h、4h、6h、12h、24h、48h和72h組(每組8只)。成年大鼠的致傷驅(qū)動(dòng)壓力值為5.0Mpa,幼年大鼠的沖擊傷致傷驅(qū)動(dòng)壓力值為5.5Mpa。致傷后觀察各組動(dòng)物的一般情況,各組動(dòng)物分別于其相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)麻醉后放血活殺,行大體解剖觀察,各取左下葉肺組織兩小塊分別做肺組織光鏡病理觀察和組織勻漿;對(duì)余下的肺組織進(jìn)行肺泡灌洗,收集肺泡灌洗液。主要觀察指標(biāo)內(nèi)容如下:(1)動(dòng)物一般情況、肺損傷大體和光鏡病理觀察,以及肺損傷嚴(yán)重程度評(píng)估(OIS和AIS評(píng)分)等;(2)采用Real Time PCR方法檢測(cè)肺組織內(nèi)SP-A和SP-B m RNA的轉(zhuǎn)錄水平變化;(3)采用Western Bolt方法檢測(cè)肺組織中SP-A和SP-B的表達(dá)變化及半定量分析。(4)采用ELISA方法檢測(cè)肺泡灌洗液中SP-A和SP-B的蛋白濃度水平變化。3主要結(jié)果3.1成年和幼年大鼠肺臟重度沖擊傷模型的建立各組的成年和幼年大鼠沖擊傷后均發(fā)生明顯肺沖擊傷,表現(xiàn)為不同程度的肺出血、水腫、不張、肺組織破裂等,驅(qū)動(dòng)壓力值越高,傷情越重。在同樣的沖擊波致傷壓力條件下,成年大鼠的肺損傷明顯較幼年大鼠的嚴(yán)重。成年大鼠在驅(qū)動(dòng)壓力值為5.0Mpa時(shí),肺臟的損傷程度集中在Ⅳ級(jí)(60%),AIS評(píng)分為3.00±0.47,達(dá)到重度傷情;幼年大鼠在驅(qū)動(dòng)壓力值為5.5Mpa時(shí),肺臟損傷多集中在Ⅳ級(jí)(70%),AIS評(píng)分為3.10±0.56。兩者肺臟損傷程度大致相同,且無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05),均為肺臟損傷的重度傷情,符合下一步研究模型的需求。3.2成年和幼年大鼠肺重度沖擊傷后SP-A和SP-B的研究(1)傷情的特點(diǎn)和變化:幼年和成年大鼠均發(fā)生重度肺沖擊傷,兩組間傷情沒(méi)有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;但幼年大鼠的肺損傷程度最重的峰值出現(xiàn)在傷后4h,而成年大鼠的則后續(xù)到傷后6h。(2)肺組織的SP-A和SP-B的m RNA RT-PCR檢測(cè)結(jié)果:幼年大鼠SP-A的m RNA相對(duì)量在傷后即刻迅速顯著下降(P0.05),傷后4h又迅速上升達(dá)到峰值,為正常的398%(P0.05),隨后又逐漸回落,24h后又低于正常;而SP-B的m RNA在傷后迅速逐漸升高(P0.05),6h達(dá)峰值,為正常10.6倍(p0.01),傷后12h回落到正常范圍,24h~72h又緩慢升高(P0.05)。成年大鼠SP-A的m RNA在傷后即刻先顯著上升(P0.05),隨后降低,傷后4h達(dá)到最低,為正常組的76%,隨后逐漸回升,在傷后48h和72h達(dá)正常組的418%和415%(p0.01);而成年SP-B的m RNA量于致傷后逐漸下降,在傷后12h達(dá)到谷底,為正常組的25%(p0.01),隨后緩慢有所回升,傷后72h時(shí)為正常組的86%(P0.05)。(3)肺組織中SP-A和SP-B的Western Bolt檢測(cè)結(jié)果:沖擊傷后幼年大鼠肺組織中SP-A蛋白含量首先迅速下降,傷后4h達(dá)到谷底,為正常74.7%(P0.05);隨后逐漸回升,并在傷后24h~72h顯著高于正常,72h時(shí)達(dá)正常的188.9%(p0.05)。而幼年大鼠肺組織中SP-B蛋白含量則出現(xiàn)先升高后回落的趨勢(shì),在傷后4h達(dá)到峰值,為正常的137.2%(P0.05);隨后逐漸回落,傷后24h~72h與正常組無(wú)顯著差異(p0.05)。成年大鼠肺組織中SP-A、SP-B含量的變化趨勢(shì)和幼年大鼠相似。(4)肺泡灌洗液中SP-A和SP-B ELISA檢測(cè)結(jié)果:幼年大鼠肺泡灌洗液中SP-A的量在傷后迅速減少,傷后4h達(dá)到最低,為正常的43.4%(P0.05);隨后逐漸回升,傷后24h回到正常水平,48h和72h時(shí)高于正常值(P0.05),分別為正常組的123.7%和132.8%。幼年大鼠肺泡灌洗液中SP-B的達(dá)量則是在傷后先逐漸升高,傷后4h達(dá)到峰值,顯著高于正常(P0.05),為正常的170.6%;隨后逐漸回落,傷后24h后接近正常水平(P0.05)。在成年大鼠沖擊傷后,肺泡灌洗液中SP-A或SP-B含量的變化趨勢(shì)與幼年組相似(p0.05),但成年大鼠組別的SP-A和SP-B的含量值水平比幼年組各時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)量高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。4結(jié)論(1)成年和幼年大鼠的肺沖擊傷均表現(xiàn)為不同程度的肺出血、水腫、不張、肺組織破裂等,致傷的壓力值越高,傷情越重。在同樣的沖擊波致傷壓力條件下,成年大鼠的肺損傷明顯重于幼年大鼠。(2)通過(guò)BST-Ⅰ型生物激波管,采用5.0Mpa驅(qū)動(dòng)壓可以建立成年大鼠肺重度沖擊傷模型,以及采用5.5Mpa驅(qū)動(dòng)壓建立的幼年大鼠肺重度沖擊傷模型,這兩個(gè)模型的傷情具一致性且穩(wěn)定,且具有可比性和可重復(fù)性,適用于研究未成年肺和成年肺沖擊傷的發(fā)生發(fā)展和救治機(jī)制的對(duì)比研究。(3)在本實(shí)驗(yàn)相同的肺重度損傷模型下,成年和幼年各自的SP-A和SP-B的m RNA轉(zhuǎn)錄變化趨勢(shì)明顯不同:(1)幼年大鼠SP-A的m RNA相對(duì)量,傷后即刻先迅速顯著下降,隨后傷后4h又迅速上升達(dá)到峰值(正常的398%,P0.05),然后又逐漸回落,24h后又低于正常;成年大鼠SP-A的m RNA則在傷后即刻先顯著上升(P0.05),隨后降低,傷后4h達(dá)到最低(正常組的76%,P0.05),隨后逐漸回升,在傷后48h到72h達(dá)正常組的418%和415%(p0.01)。(2)幼年大鼠SP-B的m RNA在傷后是迅速逐漸升高(P0.05),6h達(dá)峰值(正常的10.6倍,p0.01),傷后12h回落到正常范圍,24h到72h又緩慢升高(P0.05);而成年SP-B的m RNA量于致傷后逐漸下降,在傷后12h達(dá)到谷底(正常的25%,p0.01),隨后緩慢有所回升,傷后72h時(shí)為正常組的86%(P0.05)。(4)而在成年和幼年大鼠,無(wú)論是在肺泡灌洗液或是肺臟實(shí)質(zhì)中,其SP-A和SP-B的蛋白含量的變化趨勢(shì)是相似的。其SP-A的表達(dá)量是先降后回升的趨勢(shì),于傷后4h達(dá)最低值。而SP-B的表達(dá)量從傷后2h逐步增多,傷后4h達(dá)到最高值,隨后緩慢下降直到傷后12h,隨后不再受時(shí)間的影響,其表達(dá)量基本維持在正常對(duì)照組的分泌水平。(5)在同樣的重度肺沖擊傷的條件下,幼年大鼠肺損傷的峰時(shí)略早于成年大鼠;幼年和成年大鼠沖擊傷后肺組織和肺泡灌洗液中SP-A和SP-B蛋白量的變化趨勢(shì)相似,均為SP-A先減少再回升、SP-B先增加后回調(diào),因此會(huì)出現(xiàn)明顯的SP-A和SP-B比例的失衡;同時(shí)是其m RNA轉(zhuǎn)錄的變化差異極大(幼年大鼠后期的SP降低等更顯著,p0.05),其機(jī)制與意義非常值得深入的研究和分析。
[Abstract]:The effects of SP - A and SP - B on acute lung injury in adult and juvenile rats were studied . ( 3 ) The changes of SP - A and SP - B expression in lung tissues were detected by Western Bolt method . ( 4 ) The levels of SP - A and SP - B in BALF were detected by ELISA . (2)鑲虹粍緇囩殑SP-A鍜孲P-B鐨刴 RNA RT-PCR媯，

本文編號(hào)：1737672