本文選題：MSCs　切入點：胎盤　出處：《中國修復(fù)重建外科雜志》2016年05期

【摘要】：目的探討人胎盤蛻膜基層來源MSCs(placental decidua basalis derived MSCs,PDB-MSCs)參與裸鼠全層皮膚缺損修復(fù)的效果。方法取自愿捐贈人胎盤組織,采用酶消化法結(jié)合密度梯度離心法分離培養(yǎng)PDBMSCs并傳代,取第4代細(xì)胞進(jìn)行實驗。倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),行成骨與成脂誘導(dǎo)鑒定,檢測細(xì)胞表面特異性抗原表達(dá)以鑒定細(xì)胞。取42只4~5周齡雌性BALB/c裸鼠,隨機(jī)分為兩組(n=21);分別將200μL濃度為5×106個/m L的第4代PDB-MSCs及等體積PBS經(jīng)尾靜脈注射入實驗組及對照組裸鼠體內(nèi);注射后3 d實驗動物于背部制備大小為1.5 cm×1.5 cm全層皮膚缺損模型。術(shù)后1、2、4、7、14、18、21、25、30 d大體觀察創(chuàng)面愈合情況,待創(chuàng)面開始脫痂后測量創(chuàng)面愈合率。術(shù)后1、7、14、21、30 d取材行HE染色,觀察創(chuàng)面修復(fù)情況;7、14、30 d實驗組采用免疫熒光染色法行細(xì)胞定位分析。結(jié)果經(jīng)鑒定胎盤蛻膜組織所分離的細(xì)胞為MSCs,具有多向分化能力和MSCs免疫組織表型。術(shù)后兩組裸鼠存活至實驗完成。大體觀察示,實驗組創(chuàng)面愈合較對照組快,其中實驗組于術(shù)后12~14 d、對照組于14~17 d開始脫痂。實驗組術(shù)后14、18、21 d創(chuàng)面愈合率均顯著高于對照組(t=4.001,P=0.016;t=3.380,P=0.028;t=3.888,P=0.018);25、30 d兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.565,P=0.193;t=1.000,P=0.423)。組織學(xué)觀察示,與對照組比較,實驗組皮膚創(chuàng)面組織炎性反應(yīng)低,并且隨時間延長皮膚各層組織及腺體等再生良好。免疫熒光染色示,術(shù)后各時間點實驗組皮膚創(chuàng)面區(qū)域均可見人線粒體抗原染色陽性,提示存在人源細(xì)胞。結(jié)論通過酶消化法結(jié)合密度梯度離心法可穩(wěn)定獲得PDB-MSCs,預(yù)先注射入裸鼠體內(nèi)后,在皮膚損傷條件下細(xì)胞可向皮膚損傷部位遷移,并促進(jìn)創(chuàng)面修復(fù)。
[Abstract]:Objective to investigate the placenta derived MSCs (placental decidua basalis base derived MSCs, PDB-MSCs) in the effect of full-thickness skin defects repair. Methods from voluntary donors of placental tissue by enzyme digestion combined with density gradient centrifugation method and PDBMSCs passage, take the fourth generation cells were used for experiments. Cell morphology was observed under inverted microscope. For osteogenic and adipogenic identification, detection of cell surface antigen expression to identify the cell. 42 4~5 week old female BALB/c nude mice were randomly divided into two groups (n=21); the 200 L concentration is 5 * 106 /m L fourth generation PDB-MSCs and volume PBS via intravenous injection in the experimental group and control group of nude mice; 3 d after injection of the experimental animal preparation on the back of a size of 1.5 cm * 1.5 cm full-thickness skin defect model. Postoperative 1,2,4,7,14,18,21,25,30 D gross observation of wound healing, the wound Start exuvial after measuring the rate of wound healing after surgery. 1,7,14,21,30 D were performed HE staining, observe the wound healing; 7,14,30 D experimental group by immunofluorescence staining. Results the cell positioning analysis decidua placenta identification of isolated cells was MSCs, multilineage differentiation ability and MSCs immunohistochemical phenotype. After two the mice survived to the end of the experiment. The general observation showed that the wound healing in experimental group compared with the control group, the experimental group after 12~14 D, the control group in 14~17 D began exuvial. Rates were significantly higher than those in control group 14,18,21 D wound healing after surgery in the experimental group (t=4.001, P=0.016; t=3.380, P=0.028; t=3.888, P=0.018 25,30 d); the two groups had no statistically significant difference (t=1.565, P=0.193; t=1.000, P=0.423). Histological observation showed that compared with the control group, the inflammatory reaction of skin wound tissue in experimental group is low, and the lapse of time and each layer of the skin tissue Gland regeneration. Immunofluorescence staining showed that, after each time point in the experimental group wound area can see mitochondrial antigen positive staining, suggesting the presence of human cells. Conclusion through enzyme digestion combined with density gradient centrifugation method can stably obtain PDB-MSCs, pre injected in nude mice, under the conditions of the skin injury to cells skin lesions and migration, promote healing of wound.

【作者單位】： 四川大學(xué)華西醫(yī)院生物治療國家重點實驗室·干細(xì)胞與組織工程研究室;四川大學(xué)華西醫(yī)院公共技術(shù)實驗中心;四川大學(xué)華西醫(yī)院燒傷整形科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(31570970,31271049)~~
【分類號】：R641

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本文編號：1714593