本文選題：MSCs　切入點(diǎn)：胎盤　出處：《中國(guó)修復(fù)重建外科雜志》2016年05期

【摘要】：目的探討人胎盤蛻膜基層來(lái)源MSCs(placental decidua basalis derived MSCs,PDB-MSCs)參與裸鼠全層皮膚缺損修復(fù)的效果。方法取自愿捐贈(zèng)人胎盤組織,采用酶消化法結(jié)合密度梯度離心法分離培養(yǎng)PDBMSCs并傳代,取第4代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),行成骨與成脂誘導(dǎo)鑒定,檢測(cè)細(xì)胞表面特異性抗原表達(dá)以鑒定細(xì)胞。取42只4~5周齡雌性BALB/c裸鼠,隨機(jī)分為兩組(n=21);分別將200μL濃度為5×106個(gè)/m L的第4代PDB-MSCs及等體積PBS經(jīng)尾靜脈注射入實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組裸鼠體內(nèi);注射后3 d實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于背部制備大小為1.5 cm×1.5 cm全層皮膚缺損模型。術(shù)后1、2、4、7、14、18、21、25、30 d大體觀察創(chuàng)面愈合情況,待創(chuàng)面開始脫痂后測(cè)量創(chuàng)面愈合率。術(shù)后1、7、14、21、30 d取材行HE染色,觀察創(chuàng)面修復(fù)情況;7、14、30 d實(shí)驗(yàn)組采用免疫熒光染色法行細(xì)胞定位分析。結(jié)果經(jīng)鑒定胎盤蛻膜組織所分離的細(xì)胞為MSCs,具有多向分化能力和MSCs免疫組織表型。術(shù)后兩組裸鼠存活至實(shí)驗(yàn)完成。大體觀察示,實(shí)驗(yàn)組創(chuàng)面愈合較對(duì)照組快,其中實(shí)驗(yàn)組于術(shù)后12~14 d、對(duì)照組于14~17 d開始脫痂。實(shí)驗(yàn)組術(shù)后14、18、21 d創(chuàng)面愈合率均顯著高于對(duì)照組(t=4.001,P=0.016;t=3.380,P=0.028;t=3.888,P=0.018);25、30 d兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.565,P=0.193;t=1.000,P=0.423)。組織學(xué)觀察示,與對(duì)照組比較,實(shí)驗(yàn)組皮膚創(chuàng)面組織炎性反應(yīng)低,并且隨時(shí)間延長(zhǎng)皮膚各層組織及腺體等再生良好。免疫熒光染色示,術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組皮膚創(chuàng)面區(qū)域均可見人線粒體抗原染色陽(yáng)性,提示存在人源細(xì)胞。結(jié)論通過酶消化法結(jié)合密度梯度離心法可穩(wěn)定獲得PDB-MSCs,預(yù)先注射入裸鼠體內(nèi)后,在皮膚損傷條件下細(xì)胞可向皮膚損傷部位遷移,并促進(jìn)創(chuàng)面修復(fù)。
[Abstract]:Objective to investigate the placenta derived MSCs (placental decidua basalis base derived MSCs, PDB-MSCs) in the effect of full-thickness skin defects repair. Methods from voluntary donors of placental tissue by enzyme digestion combined with density gradient centrifugation method and PDBMSCs passage, take the fourth generation cells were used for experiments. Cell morphology was observed under inverted microscope. For osteogenic and adipogenic identification, detection of cell surface antigen expression to identify the cell. 42 4~5 week old female BALB/c nude mice were randomly divided into two groups (n=21); the 200 L concentration is 5 * 106 /m L fourth generation PDB-MSCs and volume PBS via intravenous injection in the experimental group and control group of nude mice; 3 d after injection of the experimental animal preparation on the back of a size of 1.5 cm * 1.5 cm full-thickness skin defect model. Postoperative 1,2,4,7,14,18,21,25,30 D gross observation of wound healing, the wound Start exuvial after measuring the rate of wound healing after surgery. 1,7,14,21,30 D were performed HE staining, observe the wound healing; 7,14,30 D experimental group by immunofluorescence staining. Results the cell positioning analysis decidua placenta identification of isolated cells was MSCs, multilineage differentiation ability and MSCs immunohistochemical phenotype. After two the mice survived to the end of the experiment. The general observation showed that the wound healing in experimental group compared with the control group, the experimental group after 12~14 D, the control group in 14~17 D began exuvial. Rates were significantly higher than those in control group 14,18,21 D wound healing after surgery in the experimental group (t=4.001, P=0.016; t=3.380, P=0.028; t=3.888, P=0.018 25,30 d); the two groups had no statistically significant difference (t=1.565, P=0.193; t=1.000, P=0.423). Histological observation showed that compared with the control group, the inflammatory reaction of skin wound tissue in experimental group is low, and the lapse of time and each layer of the skin tissue Gland regeneration. Immunofluorescence staining showed that, after each time point in the experimental group wound area can see mitochondrial antigen positive staining, suggesting the presence of human cells. Conclusion through enzyme digestion combined with density gradient centrifugation method can stably obtain PDB-MSCs, pre injected in nude mice, under the conditions of the skin injury to cells skin lesions and migration, promote healing of wound.

【作者單位】： 四川大學(xué)華西醫(yī)院生物治療國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室·干細(xì)胞與組織工程研究室;四川大學(xué)華西醫(yī)院公共技術(shù)實(shí)驗(yàn)中心;四川大學(xué)華西醫(yī)院燒傷整形科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31570970,31271049)~~
【分類號(hào)】：R641

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;人胎盤膠原及其制備方法[J];藥物生物技術(shù);1999年03期

2 趙中石;;人胎盤中甲狀腺激素的脫碘反應(yīng)[J];地方病譯叢;1984年04期

3 趙君庸;;人胎盤多胺的自動(dòng)層析分析[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)分冊(cè));1979年01期

4 江定強(qiáng);;人胎盤的藥用成分研制的工藝 國(guó)外藥學(xué)專利資料介紹[J];廣醫(yī)通訊;1980年02期

5 袁其曉;;離體條件下,人胎盤能合成1,25-二羥維生素D_3[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).婦產(chǎn)科學(xué)分冊(cè);1983年01期

6 李紹洲;張黎霞;王忠東;楊振玉;;人胎盤中機(jī)體營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的研究及其在食品工業(yè)中的應(yīng)用[J];氨基酸雜志;1986年04期

7 張建華 ,黃之杰;人胎盤粒-巨噬系集落刺激因子的分離純化[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1990年06期

8 李春海,張凱,譚子興,陳毓蘭;人胎盤谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的純化和性質(zhì)[J];生物化學(xué)雜志;1991年02期

9 柳明洙;車文一;金泰日;趙小妹;尹宗柱;;人胎盤谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的純化及其部分性質(zhì)的研究[J];延邊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1992年04期

10 小林隆彥;本家孝一;金泰日;賀佐伸省;TamotsuMiyazaki;牧田章;;人胎盤芳香族硫酯酶B的分子組成和水解加工部位[J];延邊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1993年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 尹格平;陳銘;陳誦芬;李云飛;袁瑋;楊樹君;趙曉莉;;人胎盤血管三維筑型的建立[A];面向二十一世紀(jì)的生物醫(yī)學(xué)體視學(xué)和軍事病理學(xué)論文摘要匯編[C];2000年

2 張崇理;石佳;焦麗紅;;γ-氨基丁酸在人早期胎盤中的分布及功能[A];中國(guó)動(dòng)物科學(xué)研究——中國(guó)動(dòng)物學(xué)會(huì)第十四屆會(huì)員代表大會(huì)及中國(guó)動(dòng)物學(xué)會(huì)65周年年會(huì)論文集[C];1999年

3 張翔;王小青;王愛玲;陳靜琴;;皮下包埋人胎盤對(duì)去卵巢大鼠雌二醇水平和腦膽堿酯酶活性的影響[A];第八次全國(guó)婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

4 尹格平;朱彤宇;陳銘;李云飛;陳誦芬;張康莉;;建立人胎盤血管三維鑄型作為優(yōu)生教學(xué)模型和臨床意義[A];中國(guó)優(yōu)生優(yōu)育協(xié)會(huì)第三屆學(xué)術(shù)研討會(huì)專輯[C];2003年

5 呂秋軍;郭紹明;溫利青;李元敏;陳媛媛;;人胎盤肝細(xì)胞生長(zhǎng)素對(duì)大鼠肝纖維化的治療作用[A];海峽兩岸三地藥理學(xué)學(xué)術(shù)報(bào)告會(huì)論文匯編[C];2001年

6 張久聰;聶青和;;人胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞原代的體外培養(yǎng)與改進(jìn)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第四次全國(guó)艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全國(guó)熱帶病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

7 李強(qiáng);李豐益;廖清奎;羅春華;;人胎盤微絨毛膜的制備及其轉(zhuǎn)鐵蛋白受體放射分析法建立[A];第五屆全國(guó)優(yōu)生科學(xué)大會(huì)論文匯編[C];2000年

8 古彥錚;薛群;王泳;於葛華;沈宇;張學(xué)光;;人胎盤與骨髓源間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫學(xué)特性的比較[A];第六屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

9 周祖平;張崇理;;細(xì)胞色素P450scc在人胎盤中的免疫組織化學(xué)定位和發(fā)育表達(dá)[A];中國(guó)動(dòng)物科學(xué)研究——中國(guó)動(dòng)物學(xué)會(huì)第十四屆會(huì)員代表大會(huì)及中國(guó)動(dòng)物學(xué)會(huì)65周年年會(huì)論文集[C];1999年

10 吳英;張毅;江小霞;張雙喜;唐佩弦;毛寧;;增強(qiáng)型綠色熒光蛋白基因在人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞中的表達(dá)[A];第九屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2003年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前2條

1 本報(bào)記者 朱堯利;人胎素針劑悄然登陸羊城[N];廣東科技報(bào);2004年

2 本報(bào)記者 白毅;我國(guó)干細(xì)胞研究和應(yīng)用須發(fā)展與監(jiān)管并重[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 劉大順;人胎盤來(lái)源干細(xì)胞的生物學(xué)性狀檢測(cè)及用于構(gòu)建組織工程軟骨的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

2 王博;PDX1聯(lián)合多種細(xì)胞因子調(diào)控微環(huán)境誘導(dǎo)人胎盤MSCs向胰島β樣細(xì)胞分化的研究[D];華中科技大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 白玉;人胎盤多肽的分離純化及其活性的初步研究[D];沈陽(yáng)藥科大學(xué);2003年

2 井緒東;體外誘導(dǎo)大鼠骨髓及人胎盤間質(zhì)干細(xì)胞向膽堿能樣神經(jīng)元分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];暨南大學(xué);2008年

3 黃東萍;人胎盤抗凝蛋白的分離純化及其體外抗凝作用研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2003年

，

本文編號(hào)：1714593