本文選題：A20　切入點(diǎn)：NF-κB　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2013年碩士論文

【摘要】：炎癥過度是臨床炎癥性疾病發(fā)生發(fā)展的基礎(chǔ)，包括膿毒癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腫瘤、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等，其共同的特點(diǎn)是體內(nèi)組織細(xì)胞NF-κB活性異常升高[1-4]，從而引發(fā)全身或局部組織器官炎癥反應(yīng)過度，造成全身或局部組織器官損傷。膿毒癥(sepsis)是由感染引起的SIRS，可進(jìn)一步發(fā)展導(dǎo)致膿毒癥休克及MODS[5]，甚至MOF，它是嚴(yán)重創(chuàng)傷后最常見的并發(fā)癥，也是臨床危重患者死亡的重要原因。血中細(xì)菌或病灶內(nèi)細(xì)菌釋放出的大量內(nèi)毒素LPS是導(dǎo)致膿毒癥的主要致病因子之一，LPS釋放至血液，可引起炎癥的激活及細(xì)胞因子的釋放，導(dǎo)致致炎和抗炎失衡。有學(xué)者對創(chuàng)傷后膿毒癥的基礎(chǔ)進(jìn)行了深入研究[6]，但至今仍然不能徹底解釋膿毒癥發(fā)生發(fā)展的機(jī)制。國內(nèi)外研究普遍認(rèn)為膿毒癥發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸有一定的遺傳背景[7,8]。 鋅指蛋白A20又名腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白3(tumor necrosis factor α inducedprotein3, TNFAIP3),其基因編碼一種雙重泛素化編輯蛋白，能通過泛素化或去泛素化多種信號分子從而抑制TNF-α誘導(dǎo)的NF-κB信號通路的活性[9]。多種炎癥刺激因素，如LPS，都能誘導(dǎo)體內(nèi)多種細(xì)胞表達(dá)A20，而A20表達(dá)又對TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、細(xì)胞間粘附分子等多種促炎因子的過度釋放以及細(xì)胞凋亡和壞死有明顯的抑制作用。這種A20蛋白的“NF-κB反饋依賴性表達(dá)”是炎癥內(nèi)源性保護(hù)的重要機(jī)制。因此，本研究從炎癥的內(nèi)源性保護(hù)蛋白A20出發(fā)，研究人群間其基因表達(dá)上的差異，探尋膿毒癥臨床表型差異性的物質(zhì)基礎(chǔ)。 為此，本研究課題用生物信息學(xué)方法篩選出A20基因啟動子區(qū)可能影響基因表達(dá)的重點(diǎn)區(qū)域及SNP位點(diǎn)，通過基因測序的方法分析中國四川地區(qū)漢族人群A20基因啟動子區(qū)這些SNPs分布頻率，并深入研究膿毒癥患者與正常人群間SNPs的分布差異，然后通過LPS刺激不同基因型個體，分別以RT-PCR和流式細(xì)胞學(xué)的方法檢測各組間外周血A20mRNA以及蛋白的表達(dá)差異、以EMSA的方法觀察不同基因型對NF-κB活性的影響，以ELISA的方法比較各細(xì)胞因子的水平。主要結(jié)果及結(jié)論如下： 1.生物信息學(xué)分析顯示，A20基因啟動子區(qū)-2000bp內(nèi)有15個SNP位點(diǎn)，其中有2個位點(diǎn)位于功能性重復(fù)序列、9個位點(diǎn)位于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合區(qū)域，這些位點(diǎn)的可能會影響此區(qū)域結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子發(fā)生種類、數(shù)量及活性的變化,藉此改變A20基因的轉(zhuǎn)錄活性，而其核心啟動子區(qū)及NF-κB結(jié)合位點(diǎn)未發(fā)現(xiàn)已知SNP位點(diǎn)； 2.通過對135例四川地區(qū)漢族健康人群及223例嚴(yán)重創(chuàng)傷病人(其中103例并發(fā)膿毒癥、120例未并發(fā)膿毒癥)的SNP調(diào)查分析顯示，中國人群A20基因啟動子區(qū)高度保守，-1083C/T(rs5029924)和-558T/G(rs139054966)變異發(fā)生頻率分別為12.2%、1.1%，未發(fā)現(xiàn)其它SNP位點(diǎn)。其中rs139054966為低頻SNP，無分析意義，而rs5029924的基因型分布頻率和等位基因頻率在創(chuàng)傷后膿毒癥患者與體檢健康人群及創(chuàng)傷后非膿毒癥患者之間均存在顯著差異，而創(chuàng)傷后非膿毒癥患者和健康對照間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義，提示此SNP位點(diǎn)可能與創(chuàng)傷后膿毒癥的發(fā)生相關(guān)； 3.以LPS刺激rs5029924位點(diǎn)不同基因型個體全血，刺激后，CC純合子A20mRNA及蛋白表達(dá)水平均顯著高于突變個體(CT/TT)，細(xì)胞因子TNF-α及IL-1β產(chǎn)生水平則顯著低于突變個體，，而NF-κB的DNA結(jié)合活性在CC基因型最低，CT型次之，TT型最高。這表明rs5029924位點(diǎn)的變異可能通過降低A20的表達(dá)，進(jìn)而改變NF-κB的活性，顯著增強(qiáng)個體的內(nèi)毒素反應(yīng)性，進(jìn)一步驗(yàn)證了第二部分“此SNP位點(diǎn)與膿毒癥的發(fā)生相關(guān)”的推斷，說明該SNP對于臨床膿毒癥易感性具有重要意義。
[Abstract]:Inflammation is an important factor in the development of inflammatory diseases , including sepsis , rheumatoid arthritis , tumor , systemic lupus erythematosus , etc .

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本文編號：1710202