本文選題：A20　切入點：NF-κB　出處：《第三軍醫(yī)大學》2013年碩士論文

【摘要】：炎癥過度是臨床炎癥性疾病發(fā)生發(fā)展的基礎，包括膿毒癥、類風濕性關節(jié)炎、腫瘤、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等，其共同的特點是體內組織細胞NF-κB活性異常升高[1-4]，從而引發(fā)全身或局部組織器官炎癥反應過度，造成全身或局部組織器官損傷。膿毒癥(sepsis)是由感染引起的SIRS，可進一步發(fā)展導致膿毒癥休克及MODS[5]，甚至MOF，它是嚴重創(chuàng)傷后最常見的并發(fā)癥，也是臨床危重患者死亡的重要原因。血中細菌或病灶內細菌釋放出的大量內毒素LPS是導致膿毒癥的主要致病因子之一，LPS釋放至血液，可引起炎癥的激活及細胞因子的釋放，導致致炎和抗炎失衡。有學者對創(chuàng)傷后膿毒癥的基礎進行了深入研究[6]，但至今仍然不能徹底解釋膿毒癥發(fā)生發(fā)展的機制。國內外研究普遍認為膿毒癥發(fā)生、發(fā)展、轉歸有一定的遺傳背景[7,8]。 鋅指蛋白A20又名腫瘤壞死因子α誘導蛋白3(tumor necrosis factor α inducedprotein3, TNFAIP3),其基因編碼一種雙重泛素化編輯蛋白，能通過泛素化或去泛素化多種信號分子從而抑制TNF-α誘導的NF-κB信號通路的活性[9]。多種炎癥刺激因素，如LPS，都能誘導體內多種細胞表達A20，而A20表達又對TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、細胞間粘附分子等多種促炎因子的過度釋放以及細胞凋亡和壞死有明顯的抑制作用。這種A20蛋白的“NF-κB反饋依賴性表達”是炎癥內源性保護的重要機制。因此，本研究從炎癥的內源性保護蛋白A20出發(fā)，研究人群間其基因表達上的差異，探尋膿毒癥臨床表型差異性的物質基礎。 為此，本研究課題用生物信息學方法篩選出A20基因啟動子區(qū)可能影響基因表達的重點區(qū)域及SNP位點，通過基因測序的方法分析中國四川地區(qū)漢族人群A20基因啟動子區(qū)這些SNPs分布頻率，并深入研究膿毒癥患者與正常人群間SNPs的分布差異，然后通過LPS刺激不同基因型個體，分別以RT-PCR和流式細胞學的方法檢測各組間外周血A20mRNA以及蛋白的表達差異、以EMSA的方法觀察不同基因型對NF-κB活性的影響，以ELISA的方法比較各細胞因子的水平。主要結果及結論如下： 1.生物信息學分析顯示，A20基因啟動子區(qū)-2000bp內有15個SNP位點，其中有2個位點位于功能性重復序列、9個位點位于轉錄因子結合區(qū)域，這些位點的可能會影響此區(qū)域結合的轉錄因子發(fā)生種類、數量及活性的變化,藉此改變A20基因的轉錄活性，而其核心啟動子區(qū)及NF-κB結合位點未發(fā)現已知SNP位點； 2.通過對135例四川地區(qū)漢族健康人群及223例嚴重創(chuàng)傷病人(其中103例并發(fā)膿毒癥、120例未并發(fā)膿毒癥)的SNP調查分析顯示，中國人群A20基因啟動子區(qū)高度保守，-1083C/T(rs5029924)和-558T/G(rs139054966)變異發(fā)生頻率分別為12.2%、1.1%，未發(fā)現其它SNP位點。其中rs139054966為低頻SNP，無分析意義，而rs5029924的基因型分布頻率和等位基因頻率在創(chuàng)傷后膿毒癥患者與體檢健康人群及創(chuàng)傷后非膿毒癥患者之間均存在顯著差異，而創(chuàng)傷后非膿毒癥患者和健康對照間差異沒有統(tǒng)計學意義，提示此SNP位點可能與創(chuàng)傷后膿毒癥的發(fā)生相關； 3.以LPS刺激rs5029924位點不同基因型個體全血，刺激后，CC純合子A20mRNA及蛋白表達水平均顯著高于突變個體(CT/TT)，細胞因子TNF-α及IL-1β產生水平則顯著低于突變個體，，而NF-κB的DNA結合活性在CC基因型最低，CT型次之，TT型最高。這表明rs5029924位點的變異可能通過降低A20的表達，進而改變NF-κB的活性，顯著增強個體的內毒素反應性，進一步驗證了第二部分“此SNP位點與膿毒癥的發(fā)生相關”的推斷，說明該SNP對于臨床膿毒癥易感性具有重要意義。
[Abstract]:Inflammation is an important factor in the development of inflammatory diseases , including sepsis , rheumatoid arthritis , tumor , systemic lupus erythematosus , etc .

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本文編號：1710202