本文選題：創(chuàng)傷性腦損傷　切入點：內(nèi)皮抑素　出處：《濱州醫(yī)學(xué)院》2013年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的 本研究采用改進Feeney's自由落體打擊法制作創(chuàng)傷性腦損傷大鼠模型,檢測外傷后大鼠腦組織中內(nèi)皮抑素(ES)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)及其受體-2(FLK-1)的表達水平,探討它們與微血管面密度(MVD)以及腦組織含水量動態(tài)改變之間的關(guān)系,從而進一步闡明外傷后腦水腫的病理生理機制,并且為有效誘導(dǎo)缺血區(qū)血管再生,改善局部血液供應(yīng),促進神經(jīng)血管結(jié)構(gòu)重塑和功能修復(fù)提供新的思路和方法。 方法 1.創(chuàng)傷性腦損傷動物模型的制備與腦組織含水量的測定 將60只Wistar大鼠隨機分組為外傷組和對照組,各組分別按照6h、12h、1d、3d、7d、14d不同處死時間點再分為個6亞組,每亞組5只。參照改進的Feeney's自由落體打擊法制作創(chuàng)傷性腦損傷的動物模型,應(yīng)用改良的mNSS神經(jīng)功能損傷評分系統(tǒng),依據(jù)傷后大鼠的平衡能力、翻身、支頭、行走、逃避及四肢反應(yīng)等方面,對其行為進行神經(jīng)功能損傷評分,并通過與對照組比較,評價自由落體打擊法制作的創(chuàng)傷性腦損傷模型的可靠性。采用干濕稱重法檢測受損腦組織的含水量變化,觀察外傷后腦水腫的進展過程。 2.創(chuàng)傷性腦損傷后血管再生調(diào)節(jié)因子的表達與微血管動態(tài)變化的相關(guān)性研究 在上述實驗的基礎(chǔ)上,采用免疫組織化學(xué)法檢測大鼠損傷灶周圍皮層及海馬區(qū)腦組織中ES、VEGF及FLK-1的表達,用CD34標(biāo)記損傷灶周圍血管內(nèi)皮細胞以計數(shù)MVD,并應(yīng)用Media Cyberretics Image ProPlus6.0圖像分析系統(tǒng)計算微血管面密度,并通過分析各項指標(biāo)表達的時相規(guī)律,探討它們在創(chuàng)傷性腦損傷過程中的相互關(guān)系。 3.統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0軟件,計量資料以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,組間比較采用獨立樣本t檢驗,組內(nèi)比較采用單向方差分析,相關(guān)性分析采用雙變量相關(guān)性分析,P0.05為具有統(tǒng)計學(xué)意義,所有檢驗之前均行方差齊性檢驗。 結(jié)果 1.成功制備創(chuàng)傷性腦損傷的動物模型 腦外傷動物模型采用改進的Feeney's自由落體打擊法制作的創(chuàng)傷性腦損傷動物模型,與對照組相比,其行為學(xué)發(fā)生的改變包括：大鼠呼吸較對照組深長,腦外傷對側(cè)肢體運動障礙,本體感覺及反射能力降低,平衡能力明顯下降。6h組各只動物均不能保持平衡,至少有一只爪從橫梁上掉下,不能直線行走,逃避及四肢對疼痛反應(yīng)明顯遲鈍。根據(jù)改良的mNSS神經(jīng)功能損傷評分,動物的總體評分較對照組升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。12h組動物神經(jīng)功能損傷繼續(xù)加重,總體評分較6h組上升。1-3d組動物總體評分達峰,平衡木試驗中動物試圖平衡但于20-40s之間跌落。7d組動物對疼痛反應(yīng)較前逐漸敏感,但是仍存在運動功能障礙。14d組動物各項指標(biāo)基本恢復(fù)正常,神經(jīng)功能損傷評分與對照組相比,差異仍具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。 2.大鼠神經(jīng)功能損傷評分與腦組織含水量及微血管動態(tài)變化的相關(guān)性 腦組織含水量外傷組動物受損腦組織的含水量在外傷后6h開始升高,與對照組相比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。1d為水腫高峰期,持續(xù)至3d開始逐漸下降,14d恢復(fù)正常,與對照組比較無顯著性差異(P0.05)。 微血管面密度損傷灶周圍皮層及海馬區(qū)腦組織的MVD于傷后6h即刻下降,與對照組相比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。此后差異逐漸增大,3d組MVD開始增加,但仍低于對照組(P0.01)。升至7d達峰,14d組MVD降至基本正常。 統(tǒng)計分析顯示,創(chuàng)傷性腦損傷后大鼠神經(jīng)功能損傷評分與受損腦組織的含水量呈正相關(guān)(r=0.741,p0.01),后者的動態(tài)變化與MVD及微血管的功能狀態(tài)改變密切相關(guān)。 3.創(chuàng)傷性腦損傷后血管再生調(diào)節(jié)因子的表達規(guī)律 血管再生由內(nèi)源性血管再生調(diào)節(jié)因子——血管再生因子和血管再生抑制因子共同參與調(diào)控。大鼠損傷灶周圍皮層及海馬區(qū)腦組織中腦外傷后1d內(nèi)未檢測到ES明顯的表達變化,傷后3-14d ES的表達水平持續(xù)升高(P0.01)。傷后各時間點VEGF陽性細胞數(shù)與對照組相比均升高,1-3d陽性表達最強,7d開始降低(P0.05)。創(chuàng)傷性腦損傷后1d內(nèi)VEGF的受體FLK-1的含量無明顯變化,傷后3d FLK-1表達明顯升高,第7d達最高峰,14d FLK-1雖高于正常水平,但較正常組差異無顯著性(P0.05)。 4.ES、VEGF、FLK-1表達與微血管動態(tài)變化的相關(guān)性 數(shù)據(jù)表明：創(chuàng)傷性腦損傷后損傷灶周圍腦組織中MVD與ES、VEGF的表達無明顯相關(guān)性(P0.05),腦外傷1d后MVD與FLK-1的表達水平同步變化,且呈正相關(guān)(r=0.679,P0.05)。 結(jié)論 1.自由落體打擊法制作的創(chuàng)傷性腦損傷動物模型,能夠成功模擬臨床上加速性暴力所致的外傷后腦水腫的病理生理過程,符合本研究的要求。 2.創(chuàng)傷性腦損傷后微血管的動態(tài)改變直接影響著腦水腫的程度,繼而決定著相應(yīng) 時期的神經(jīng)功能狀態(tài)。 3.腦外傷后ES、VEGF、FLK-1的動態(tài)平衡,共同調(diào)控微循環(huán)功能狀態(tài)的改變,影響著繼發(fā)性腦損傷的發(fā)生發(fā)展,是創(chuàng)傷性腦損傷過程的重要環(huán)節(jié)。
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【學(xué)位授予單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R651.15

【參考文獻】

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1 馬向陽;賈子善;槐雅萍;賈新風(fēng);張東;;豐富環(huán)境對大鼠局灶性腦梗死后微血管新生的影響[J];國際內(nèi)科學(xué)雜志;2008年11期

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本文編號：1650736