本文選題：創(chuàng)傷性腦損傷　切入點(diǎn)：內(nèi)皮抑素　出處：《濱州醫(yī)學(xué)院》2013年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的 本研究采用改進(jìn)Feeney's自由落體打擊法制作創(chuàng)傷性腦損傷大鼠模型,檢測(cè)外傷后大鼠腦組織中內(nèi)皮抑素(ES)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)及其受體-2(FLK-1)的表達(dá)水平,探討它們與微血管面密度(MVD)以及腦組織含水量動(dòng)態(tài)改變之間的關(guān)系,從而進(jìn)一步闡明外傷后腦水腫的病理生理機(jī)制,并且為有效誘導(dǎo)缺血區(qū)血管再生,改善局部血液供應(yīng),促進(jìn)神經(jīng)血管結(jié)構(gòu)重塑和功能修復(fù)提供新的思路和方法。 方法 1.創(chuàng)傷性腦損傷動(dòng)物模型的制備與腦組織含水量的測(cè)定 將60只Wistar大鼠隨機(jī)分組為外傷組和對(duì)照組,各組分別按照6h、12h、1d、3d、7d、14d不同處死時(shí)間點(diǎn)再分為個(gè)6亞組,每亞組5只。參照改進(jìn)的Feeney's自由落體打擊法制作創(chuàng)傷性腦損傷的動(dòng)物模型,應(yīng)用改良的mNSS神經(jīng)功能損傷評(píng)分系統(tǒng),依據(jù)傷后大鼠的平衡能力、翻身、支頭、行走、逃避及四肢反應(yīng)等方面,對(duì)其行為進(jìn)行神經(jīng)功能損傷評(píng)分,并通過與對(duì)照組比較,評(píng)價(jià)自由落體打擊法制作的創(chuàng)傷性腦損傷模型的可靠性。采用干濕稱重法檢測(cè)受損腦組織的含水量變化,觀察外傷后腦水腫的進(jìn)展過程。 2.創(chuàng)傷性腦損傷后血管再生調(diào)節(jié)因子的表達(dá)與微血管動(dòng)態(tài)變化的相關(guān)性研究 在上述實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)大鼠損傷灶周圍皮層及海馬區(qū)腦組織中ES、VEGF及FLK-1的表達(dá),用CD34標(biāo)記損傷灶周圍血管內(nèi)皮細(xì)胞以計(jì)數(shù)MVD,并應(yīng)用Media Cyberretics Image ProPlus6.0圖像分析系統(tǒng)計(jì)算微血管面密度,并通過分析各項(xiàng)指標(biāo)表達(dá)的時(shí)相規(guī)律,探討它們?cè)趧?chuàng)傷性腦損傷過程中的相互關(guān)系。 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0軟件,計(jì)量資料以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),組內(nèi)比較采用單向方差分析,相關(guān)性分析采用雙變量相關(guān)性分析,P0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,所有檢驗(yàn)之前均行方差齊性檢驗(yàn)。 結(jié)果 1.成功制備創(chuàng)傷性腦損傷的動(dòng)物模型 腦外傷動(dòng)物模型采用改進(jìn)的Feeney's自由落體打擊法制作的創(chuàng)傷性腦損傷動(dòng)物模型,與對(duì)照組相比,其行為學(xué)發(fā)生的改變包括：大鼠呼吸較對(duì)照組深長,腦外傷對(duì)側(cè)肢體運(yùn)動(dòng)障礙,本體感覺及反射能力降低,平衡能力明顯下降。6h組各只動(dòng)物均不能保持平衡,至少有一只爪從橫梁上掉下,不能直線行走,逃避及四肢對(duì)疼痛反應(yīng)明顯遲鈍。根據(jù)改良的mNSS神經(jīng)功能損傷評(píng)分,動(dòng)物的總體評(píng)分較對(duì)照組升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。12h組動(dòng)物神經(jīng)功能損傷繼續(xù)加重,總體評(píng)分較6h組上升。1-3d組動(dòng)物總體評(píng)分達(dá)峰,平衡木試驗(yàn)中動(dòng)物試圖平衡但于20-40s之間跌落。7d組動(dòng)物對(duì)疼痛反應(yīng)較前逐漸敏感,但是仍存在運(yùn)動(dòng)功能障礙。14d組動(dòng)物各項(xiàng)指標(biāo)基本恢復(fù)正常,神經(jīng)功能損傷評(píng)分與對(duì)照組相比,差異仍具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 2.大鼠神經(jīng)功能損傷評(píng)分與腦組織含水量及微血管動(dòng)態(tài)變化的相關(guān)性 腦組織含水量外傷組動(dòng)物受損腦組織的含水量在外傷后6h開始升高,與對(duì)照組相比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。1d為水腫高峰期,持續(xù)至3d開始逐漸下降,14d恢復(fù)正常,與對(duì)照組比較無顯著性差異(P0.05)。 微血管面密度損傷灶周圍皮層及海馬區(qū)腦組織的MVD于傷后6h即刻下降,與對(duì)照組相比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。此后差異逐漸增大,3d組MVD開始增加,但仍低于對(duì)照組(P0.01)。升至7d達(dá)峰,14d組MVD降至基本正常。 統(tǒng)計(jì)分析顯示,創(chuàng)傷性腦損傷后大鼠神經(jīng)功能損傷評(píng)分與受損腦組織的含水量呈正相關(guān)(r=0.741,p0.01),后者的動(dòng)態(tài)變化與MVD及微血管的功能狀態(tài)改變密切相關(guān)。 3.創(chuàng)傷性腦損傷后血管再生調(diào)節(jié)因子的表達(dá)規(guī)律 血管再生由內(nèi)源性血管再生調(diào)節(jié)因子——血管再生因子和血管再生抑制因子共同參與調(diào)控。大鼠損傷灶周圍皮層及海馬區(qū)腦組織中腦外傷后1d內(nèi)未檢測(cè)到ES明顯的表達(dá)變化,傷后3-14d ES的表達(dá)水平持續(xù)升高(P0.01)。傷后各時(shí)間點(diǎn)VEGF陽性細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組相比均升高,1-3d陽性表達(dá)最強(qiáng),7d開始降低(P0.05)。創(chuàng)傷性腦損傷后1d內(nèi)VEGF的受體FLK-1的含量無明顯變化,傷后3d FLK-1表達(dá)明顯升高,第7d達(dá)最高峰,14d FLK-1雖高于正常水平,但較正常組差異無顯著性(P0.05)。 4.ES、VEGF、FLK-1表達(dá)與微血管動(dòng)態(tài)變化的相關(guān)性 數(shù)據(jù)表明：創(chuàng)傷性腦損傷后損傷灶周圍腦組織中MVD與ES、VEGF的表達(dá)無明顯相關(guān)性(P0.05),腦外傷1d后MVD與FLK-1的表達(dá)水平同步變化,且呈正相關(guān)(r=0.679,P0.05)。 結(jié)論 1.自由落體打擊法制作的創(chuàng)傷性腦損傷動(dòng)物模型,能夠成功模擬臨床上加速性暴力所致的外傷后腦水腫的病理生理過程,符合本研究的要求。 2.創(chuàng)傷性腦損傷后微血管的動(dòng)態(tài)改變直接影響著腦水腫的程度,繼而決定著相應(yīng) 時(shí)期的神經(jīng)功能狀態(tài)。 3.腦外傷后ES、VEGF、FLK-1的動(dòng)態(tài)平衡,共同調(diào)控微循環(huán)功能狀態(tài)的改變,影響著繼發(fā)性腦損傷的發(fā)生發(fā)展,是創(chuàng)傷性腦損傷過程的重要環(huán)節(jié)。
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【學(xué)位授予單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R651.15

【參考文獻(xiàn)】

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1 馬向陽;賈子善;槐雅萍;賈新風(fēng);張東;;豐富環(huán)境對(duì)大鼠局灶性腦梗死后微血管新生的影響[J];國際內(nèi)科學(xué)雜志;2008年11期

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本文編號(hào)：1650736