本文選題：內(nèi)皮祖細(xì)胞　切入點(diǎn)：外泌體　出處：《吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)》2017年04期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的:探討骨髓源內(nèi)皮祖細(xì)胞分泌的外泌體(EPCs-Exos)對血管新生和膠原沉積的作用,闡明其促進(jìn)皮膚傷口愈合的可能機(jī)制。方法:分離、培養(yǎng)并鑒定內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs),同時分離并鑒定EPCs-Exos。觀察分析EPCs攝取EPCs-Exos。16只大鼠隨機(jī)分為4組,建立皮膚缺損模型,分別將等量的PBS,50、100和150mg·L~(-1) EPCs-Exos分別注射至4組大鼠的皮膚缺損周圍區(qū)域。在0、3、7和14d測量各組大鼠傷口閉合區(qū)域的范圍;14d時取愈合區(qū)組織進(jìn)行Masson三色染色及CD31免疫熒光染色,評估EPCs-Exos的治療效果。在體外,將含有PBS,50、100和150mg·L~(-1) EPCs-Exos培養(yǎng)基和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)共培養(yǎng),利用劃痕實(shí)驗(yàn)和成管實(shí)驗(yàn)檢測HUVECs的遷移和毛細(xì)血管網(wǎng)的形成。應(yīng)用Western blotting法檢測HUVECs中促血管生成相關(guān)基因血管內(nèi)皮生長因子A(VEGFA)表達(dá)水平。結(jié)果:成功分離并鑒定原代EPCs,EPCs的CD31免疫熒光染色、DiL-ac-LDL和FITC-UEA-I雙染均呈陽性。電鏡觀察EPCs-Exos形態(tài)為近圓形,直徑為40~100nm。在注射EPCs-Exos的大鼠皮膚損傷模型中,隨著注射劑量增大,皮膚缺損疤痕直徑逐漸縮小,疤痕愈合度逐漸增加,組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。EPCs-Exos呈劑量依賴性促進(jìn)愈合皮膚組織膠原的成熟,14d時150mg·L~(-1) EPCs-Exos注射組最明顯。在體外實(shí)驗(yàn)中,EPCs-Exos呈劑量依賴性刺激內(nèi)皮祖細(xì)胞促進(jìn)其遷移和毛細(xì)血管網(wǎng)的形成及上調(diào)VEGFA表達(dá)水平,150mg·L~(-1) EPCs-Exos組的遷移速率、網(wǎng)分支數(shù)目和VEGFA表達(dá)水平均高于50mg·L~(-1) EPCs-Exos組和PBS組(P0.05)。結(jié)論:EPCs-Exos可以通過正向調(diào)控血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能而促進(jìn)大鼠創(chuàng)傷性皮膚缺損的修復(fù)。
[Abstract]:Objective: to investigate the effect of exocrine EPCs-Exoses secreted by endothelial progenitor cells from bone marrow on angiogenesis and collagen deposition, and to elucidate the possible mechanism of promoting skin wound healing. EPCs-Exos.EPCs-Exos.EPCs-Exos.EPCs-Exos.EPCs-Exos.EPCs-Exos.EPCs-Exos.EPCs-Exos.EPCs-Exos.EPCs-Exos.EPCs-Exos.EPCs-Ex@@. The same amount of PBS50 and 150mg 路L ~ (-1) EPCs-Exos were injected into the area around the skin defect of the 4 groups respectively. The wound closed area of the rats in each group was measured on the 7th and 14th day, and the tissue of the healing area was taken for Masson trichrome staining and CD31 immunofluorescence staining. To evaluate the therapeutic effect of EPCs-Exos, the EPCs-Exos medium containing PBS50 and 150 mg 路L ~ (-1) was co-cultured with human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) in vitro. The migration of HUVECs and the formation of capillary network were detected by scratch test and tube forming test. The expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) in HUVECs was detected by Western blotting method. Results: proto was isolated and identified successfully. The CD31 immunofluorescence staining of EPCs was positive for both DiL-ac-LDL and FITC-UEA-I. The morphology of EPCs-Exos was nearly round by electron microscope. In the skin injury model of rats injected with EPCs-Exos, the diameter of scar of skin defect gradually decreased and the degree of scar healing increased with the increase of injection dose. The difference between the two groups was statistically significant (P 0.05). EPCs-Exos promoted the healing of collagen in a dose-dependent manner. 150 mg 路L ~ (-1) EPCs-Exos injection group was the most obvious at 14 days after maturation. In vitro, EPCs-Exos stimulated endothelial progenitor cells in a dose-dependent manner to promote their migration and hair. The formation of fine vascular network and its up-regulation of migration rate of VEGFA expression level of 150 mg 路L ~ (-1) EPCs-Exos group. The number of reticulum branches and the expression of VEGFA were higher than those of 50 mg 路L ~ (-1) EPCs-Exos and PBS groups (P 0.05). Conclusion: EPCs-Exos can promote the repair of traumatic skin defects by positively regulating the function of vascular endothelial cells in rats.
【作者單位】： 錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院骨科;遼寧省撫順市第二醫(yī)院燒傷整形外科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助課題(81572140)
【分類號】：R641

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1592383