本文選題：重癥急性胰腺炎　切入點：膽管損傷　出處：《武漢大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分：重癥急性胰腺炎并發(fā)肝內(nèi)膽管細胞損傷的研究 目的：探討重癥急性胰腺炎(SAP)大鼠肝內(nèi)膽管組織病理學(xué)變化及膽管細胞凋亡情況,研究巨噬細胞移動抑制因子(MIF)在SAP大鼠肝內(nèi)膽管細胞損傷中的表達及作用。 方法：采用SPF級雄性Wistar大鼠,隨機分為4組(N=12)。假手術(shù)組(SO組),重癥急性胰腺炎組(SAP3h、6h、12h三個亞組),通過膽胰管逆行注射5%�；悄懰徕c溶液制備大鼠SAP模型。分別測定各組大鼠血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIPA)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、總膽紅素(TBiL)及總膽汁酸(TBA)水平,應(yīng)用HE染色法觀察各組大鼠胰腺、肝臟及肝內(nèi)膽管組織病理學(xué)改變,應(yīng)用免疫組化S-P法檢測肝內(nèi)膽管細胞MIF表達情況,TUNEL法檢測大鼠肝內(nèi)膽管細胞的凋亡率。 結(jié)果：SAP大鼠血清AMY、LIPA、ALT、ALP、TBA、TBIL水平明顯升高,肝功能指標中ALP、TBA、TBIL增高明顯,表明膽管細胞有損傷存在,與SO組比較,差異有顯著意義(P0.05)。SAP組大鼠胰腺、肝臟及肝內(nèi)膽管細胞病理損傷明顯,病理評分伴隨胰腺炎病情進展逐漸升高,與SO組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。免疫組化結(jié)果顯示SAP各組大鼠肝內(nèi)膽管細胞MIF表達較SO組表達明顯增高(P0.05),差異有顯著意義。TUNEL法檢測發(fā)現(xiàn)SAP組大鼠肝內(nèi)膽管細胞凋亡率較SO組明顯增加(P0.05),差異有顯著意義。 結(jié)論：SAP時,大鼠肝內(nèi)膽管細胞出現(xiàn)不同程度功能及病理損傷,肝內(nèi)膽管細胞中MIF表達水平隨SAP的病程進展出現(xiàn)明顯升高趨勢,肝內(nèi)膽管細胞的凋亡率亦逐漸增高,表明MIF可能在SAP并發(fā)肝內(nèi)膽管細胞損傷的發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用。 第二部分：巨噬細胞移動抑制因子(MIF)在重癥急性胰腺炎并發(fā)肝內(nèi)膽管細胞損傷中的作用機制探討 目的：研究SAP時大鼠肝內(nèi)膽管細胞中MIF基因表達變化,P38-MAPK信號通路相關(guān)炎性因子的蛋白表達水平,探討MIF在SAP大鼠肝內(nèi)膽管細胞損傷中的可能作用機制。 方法：SPF級雄性Wistar大鼠,隨機分為4組(N=12)。SO組、SAP組(3h、6h、12h三個亞組),造模方法同第一部分。免疫組化法檢測P38在肝內(nèi)膽管細胞的表達,Real-time PCR法檢測大鼠肝內(nèi)膽管細胞MIF mRNA, TNF-a mRNA表達水平,Western-blot法檢測肝內(nèi)膽管組織P38、P-P38、NF-κB p65、TNF-a的蛋白表達水平,并應(yīng)用ELISA法檢測各組大鼠肝內(nèi)膽管組織中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量,分析SAP時MIF的表達與P38-MAPK信號通路相關(guān)炎癥蛋白表達變化的關(guān)系。 結(jié)果：免疫組化結(jié)果顯示SAP組大鼠肝內(nèi)膽管細胞P38明顯陽性表達,主要表達于肝內(nèi)膽管細胞核,其表達量較SO組明顯增高,差異有顯著意義(P0.05)。Real-time PCR結(jié)果顯示SAP組大鼠肝內(nèi)膽管細胞中MIF mRNA、TNF-a mRNA表達均較SO組明顯上升(P0.05)。Western-blot結(jié)果表明：SAP組肝內(nèi)膽管細胞中P-P38. NF-κB p65以及TNF-a的蛋白表達量均較SO組呈增強趨勢,差異有顯著意義(P0.05)。ELISA法檢測TNF-a、IL-1β、IL-6含量,結(jié)果發(fā)現(xiàn)SAP組肝內(nèi)膽管組織中TNF-a、IL-1β、IL-6的含量較SO組均明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。 結(jié)論：SAP時,MIF可通過激活大鼠肝內(nèi)膽管細胞中P38-MAPK信號通路,使肝內(nèi)膽管細胞NF-κB活化,并進而導(dǎo)致其下游炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-1β、IL-6的大量釋放,從而促進肝內(nèi)膽管細胞的炎癥反應(yīng)及病理損傷,加重SAP病情進展。 第三部分：MIF抑制劑ISO-1對重癥急性胰腺炎并發(fā)肝內(nèi)膽管細胞損傷的保護作用研究 目的：觀察MIF抑制劑ISO-1對SAP大鼠肝內(nèi)膽管細胞病理和超微結(jié)構(gòu)的影響,檢測ISO-1治療后肝內(nèi)膽管組織NF-κB活性及其下游炎癥因子的表達變化,探討ISO-1對SAP大鼠肝內(nèi)膽管細胞損傷的保護作用機制。 方法：48只SPF級雄性Wistar大鼠,隨機分為4組(N=12),SO組、SAP組、ISO-1治療組(ISO-1+SAP)和ISO-1藥物對照組(ISO-1+SO)。ISO-1治療組于SAP造模前30min經(jīng)腹腔注射MIF抑制劑ISO-1溶液(0.1ml/100g)。ISO-1藥物對照組在假手術(shù)前30min經(jīng)大鼠腹腔注射與ISO-1治療組等容量的ISO-1溶液(0.1m1/100g)。各組于造模后12h剖殺大鼠,測定各組大鼠血清AMY、肝功能指標,并觀察胰腺、肝臟及肝內(nèi)膽管組織病理學(xué)變化,電鏡觀察肝內(nèi)膽管細胞超微結(jié)構(gòu)變化,ELISA法檢測TNF-β、IL-1β、IL-6在各組大鼠肝內(nèi)膽管組織中的含量,免疫組化法檢測MIF、P38在肝內(nèi)膽管細胞的表達,Real-time PCR法檢測大鼠肝內(nèi)膽管細胞MIF mRNA、TNF-αmRNA表達,Western-blot法檢測肝內(nèi)膽管組織P38、P-P38、NF-κB p65、TNF-α的蛋白表達水平。 結(jié)果：SAP大鼠在給予ISO-1預(yù)處理后,大鼠血清中AMY、LIPA以及肝功能指標均顯著降低,胰腺、肝臟及肝內(nèi)膽管病理損傷程度明顯減輕,電鏡下見大鼠肝內(nèi)膽管細胞超微結(jié)構(gòu)損傷也明顯緩解。Real-time PCR檢測結(jié)果顯示：ISO-1治療組肝內(nèi)膽管細胞MIF mRNA、TNF-αmRNA表達水平較SAP組均有明顯下降(P0.05)。免疫組化結(jié)果：SAP組中P38表達活性較SO組增強,且主要表達于肝內(nèi)膽管細胞核,而ISO-1干預(yù)后其表達IOD值較SAP組下降,活性降低,各組間比較差異有顯著意義(P0.05)。Western-blot結(jié)果顯示：與SAP組比較,ISO-1治療組肝內(nèi)膽管組織中P-P38、NF-κB p65、TNF-α的蛋白表達水平顯著降低(P0.05)。ELISA法檢測大鼠肝內(nèi)膽管組織中TNF-α、IL-1β、IL-6含量,結(jié)果顯示ISO-1治療組上述各炎癥相關(guān)因子含量較SAP組顯著下降(P0.05)。各項指標檢測結(jié)果顯示ISO-1藥物對照組與SO組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論：MIF抑制劑ISO-1可有效抑制SAP大鼠肝內(nèi)膽管細胞MIF的表達,從而阻斷P38-MAPK信號通路,降低P38磷酸化的活性,抑制肝內(nèi)膽管細胞中NF-κB炎癥通路激活,下調(diào)其下游炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-1β、IL-6的表達及釋放,從而發(fā)揮對SAP并發(fā)肝內(nèi)膽管細胞損傷的保護作用,緩解SAP病情進展。
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【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R657.51

【參考文獻】

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本文編號：1576878