本文選題：重癥急性胰腺炎　切入點(diǎn)：膽管損傷　出處：《武漢大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分：重癥急性胰腺炎并發(fā)肝內(nèi)膽管細(xì)胞損傷的研究 目的：探討重癥急性胰腺炎(SAP)大鼠肝內(nèi)膽管組織病理學(xué)變化及膽管細(xì)胞凋亡情況,研究巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)在SAP大鼠肝內(nèi)膽管細(xì)胞損傷中的表達(dá)及作用。 方法：采用SPF級(jí)雄性Wistar大鼠,隨機(jī)分為4組(N=12)。假手術(shù)組(SO組),重癥急性胰腺炎組(SAP3h、6h、12h三個(gè)亞組),通過(guò)膽胰管逆行注射5%�；悄懰徕c溶液制備大鼠SAP模型。分別測(cè)定各組大鼠血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIPA)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、總膽紅素(TBiL)及總膽汁酸(TBA)水平,應(yīng)用HE染色法觀察各組大鼠胰腺、肝臟及肝內(nèi)膽管組織病理學(xué)改變,應(yīng)用免疫組化S-P法檢測(cè)肝內(nèi)膽管細(xì)胞MIF表達(dá)情況,TUNEL法檢測(cè)大鼠肝內(nèi)膽管細(xì)胞的凋亡率。 結(jié)果：SAP大鼠血清AMY、LIPA、ALT、ALP、TBA、TBIL水平明顯升高,肝功能指標(biāo)中ALP、TBA、TBIL增高明顯,表明膽管細(xì)胞有損傷存在,與SO組比較,差異有顯著意義(P0.05)。SAP組大鼠胰腺、肝臟及肝內(nèi)膽管細(xì)胞病理?yè)p傷明顯,病理評(píng)分伴隨胰腺炎病情進(jìn)展逐漸升高,與SO組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。免疫組化結(jié)果顯示SAP各組大鼠肝內(nèi)膽管細(xì)胞MIF表達(dá)較SO組表達(dá)明顯增高(P0.05),差異有顯著意義。TUNEL法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)SAP組大鼠肝內(nèi)膽管細(xì)胞凋亡率較SO組明顯增加(P0.05),差異有顯著意義。 結(jié)論：SAP時(shí),大鼠肝內(nèi)膽管細(xì)胞出現(xiàn)不同程度功能及病理?yè)p傷,肝內(nèi)膽管細(xì)胞中MIF表達(dá)水平隨SAP的病程進(jìn)展出現(xiàn)明顯升高趨勢(shì),肝內(nèi)膽管細(xì)胞的凋亡率亦逐漸增高,表明MIF可能在SAP并發(fā)肝內(nèi)膽管細(xì)胞損傷的發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮重要作用。 第二部分：巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)在重癥急性胰腺炎并發(fā)肝內(nèi)膽管細(xì)胞損傷中的作用機(jī)制探討 目的：研究SAP時(shí)大鼠肝內(nèi)膽管細(xì)胞中MIF基因表達(dá)變化,P38-MAPK信號(hào)通路相關(guān)炎性因子的蛋白表達(dá)水平,探討MIF在SAP大鼠肝內(nèi)膽管細(xì)胞損傷中的可能作用機(jī)制。 方法：SPF級(jí)雄性Wistar大鼠,隨機(jī)分為4組(N=12)。SO組、SAP組(3h、6h、12h三個(gè)亞組),造模方法同第一部分。免疫組化法檢測(cè)P38在肝內(nèi)膽管細(xì)胞的表達(dá),Real-time PCR法檢測(cè)大鼠肝內(nèi)膽管細(xì)胞MIF mRNA, TNF-a mRNA表達(dá)水平,Western-blot法檢測(cè)肝內(nèi)膽管組織P38、P-P38、NF-κB p65、TNF-a的蛋白表達(dá)水平,并應(yīng)用ELISA法檢測(cè)各組大鼠肝內(nèi)膽管組織中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量,分析SAP時(shí)MIF的表達(dá)與P38-MAPK信號(hào)通路相關(guān)炎癥蛋白表達(dá)變化的關(guān)系。 結(jié)果：免疫組化結(jié)果顯示SAP組大鼠肝內(nèi)膽管細(xì)胞P38明顯陽(yáng)性表達(dá),主要表達(dá)于肝內(nèi)膽管細(xì)胞核,其表達(dá)量較SO組明顯增高,差異有顯著意義(P0.05)。Real-time PCR結(jié)果顯示SAP組大鼠肝內(nèi)膽管細(xì)胞中MIF mRNA、TNF-a mRNA表達(dá)均較SO組明顯上升(P0.05)。Western-blot結(jié)果表明：SAP組肝內(nèi)膽管細(xì)胞中P-P38. NF-κB p65以及TNF-a的蛋白表達(dá)量均較SO組呈增強(qiáng)趨勢(shì),差異有顯著意義(P0.05)。ELISA法檢測(cè)TNF-a、IL-1β、IL-6含量,結(jié)果發(fā)現(xiàn)SAP組肝內(nèi)膽管組織中TNF-a、IL-1β、IL-6的含量較SO組均明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 結(jié)論：SAP時(shí),MIF可通過(guò)激活大鼠肝內(nèi)膽管細(xì)胞中P38-MAPK信號(hào)通路,使肝內(nèi)膽管細(xì)胞NF-κB活化,并進(jìn)而導(dǎo)致其下游炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-1β、IL-6的大量釋放,從而促進(jìn)肝內(nèi)膽管細(xì)胞的炎癥反應(yīng)及病理?yè)p傷,加重SAP病情進(jìn)展。 第三部分：MIF抑制劑ISO-1對(duì)重癥急性胰腺炎并發(fā)肝內(nèi)膽管細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究 目的：觀察MIF抑制劑ISO-1對(duì)SAP大鼠肝內(nèi)膽管細(xì)胞病理和超微結(jié)構(gòu)的影響,檢測(cè)ISO-1治療后肝內(nèi)膽管組織NF-κB活性及其下游炎癥因子的表達(dá)變化,探討ISO-1對(duì)SAP大鼠肝內(nèi)膽管細(xì)胞損傷的保護(hù)作用機(jī)制。 方法：48只SPF級(jí)雄性Wistar大鼠,隨機(jī)分為4組(N=12),SO組、SAP組、ISO-1治療組(ISO-1+SAP)和ISO-1藥物對(duì)照組(ISO-1+SO)。ISO-1治療組于SAP造模前30min經(jīng)腹腔注射MIF抑制劑ISO-1溶液(0.1ml/100g)。ISO-1藥物對(duì)照組在假手術(shù)前30min經(jīng)大鼠腹腔注射與ISO-1治療組等容量的ISO-1溶液(0.1m1/100g)。各組于造模后12h剖殺大鼠,測(cè)定各組大鼠血清AMY、肝功能指標(biāo),并觀察胰腺、肝臟及肝內(nèi)膽管組織病理學(xué)變化,電鏡觀察肝內(nèi)膽管細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化,ELISA法檢測(cè)TNF-β、IL-1β、IL-6在各組大鼠肝內(nèi)膽管組織中的含量,免疫組化法檢測(cè)MIF、P38在肝內(nèi)膽管細(xì)胞的表達(dá),Real-time PCR法檢測(cè)大鼠肝內(nèi)膽管細(xì)胞MIF mRNA、TNF-αmRNA表達(dá),Western-blot法檢測(cè)肝內(nèi)膽管組織P38、P-P38、NF-κB p65、TNF-α的蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果：SAP大鼠在給予ISO-1預(yù)處理后,大鼠血清中AMY、LIPA以及肝功能指標(biāo)均顯著降低,胰腺、肝臟及肝內(nèi)膽管病理?yè)p傷程度明顯減輕,電鏡下見大鼠肝內(nèi)膽管細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)損傷也明顯緩解。Real-time PCR檢測(cè)結(jié)果顯示：ISO-1治療組肝內(nèi)膽管細(xì)胞MIF mRNA、TNF-αmRNA表達(dá)水平較SAP組均有明顯下降(P0.05)。免疫組化結(jié)果：SAP組中P38表達(dá)活性較SO組增強(qiáng),且主要表達(dá)于肝內(nèi)膽管細(xì)胞核,而ISO-1干預(yù)后其表達(dá)IOD值較SAP組下降,活性降低,各組間比較差異有顯著意義(P0.05)。Western-blot結(jié)果顯示：與SAP組比較,ISO-1治療組肝內(nèi)膽管組織中P-P38、NF-κB p65、TNF-α的蛋白表達(dá)水平顯著降低(P0.05)。ELISA法檢測(cè)大鼠肝內(nèi)膽管組織中TNF-α、IL-1β、IL-6含量,結(jié)果顯示ISO-1治療組上述各炎癥相關(guān)因子含量較SAP組顯著下降(P0.05)。各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果顯示ISO-1藥物對(duì)照組與SO組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論：MIF抑制劑ISO-1可有效抑制SAP大鼠肝內(nèi)膽管細(xì)胞MIF的表達(dá),從而阻斷P38-MAPK信號(hào)通路,降低P38磷酸化的活性,抑制肝內(nèi)膽管細(xì)胞中NF-κB炎癥通路激活,下調(diào)其下游炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-1β、IL-6的表達(dá)及釋放,從而發(fā)揮對(duì)SAP并發(fā)肝內(nèi)膽管細(xì)胞損傷的保護(hù)作用,緩解SAP病情進(jìn)展。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R657.51

【參考文獻(xiàn)】

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1 吳麗;蔡寶昌;;重癥急性胰腺炎肝損傷機(jī)制及中醫(yī)藥治療的研究進(jìn)展[J];南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2013年04期

2 陳維亮;雷繼曉;李善杰;許偉;;肝臟體積和密度變化對(duì)急性胰腺炎肝臟損傷的診斷意義[J];實(shí)用醫(yī)藥雜志;2013年06期

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4 Juan Vaz;Hamid Akbarshahi;Roland Andersson;;Controversial role of toll-like receptors in acute pancreatitis[J];World Journal of Gastroenterology;2013年05期

5 吳麗;呂高虹;劉曉;蔡皓;李寰;郭輝;蔡寶昌;;大黃附子湯對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠腸黏膜屏障的影響[J];時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥;2012年11期

6 ;Chaiqin Chengqi Decoction decreases IL-6 levels in patients with acute pancreatitis[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2011年12期

7 Sabrina Gea-Sorlí;Daniel Closa;;Role of macrophages in the progression of acute pancreatitis[J];World Journal of Gastrointestinal Pharmacology and Therapeutics;2010年05期

8 梁堅(jiān);周宇;王壯;陳潔;;急性胰腺炎肝損害與血清IL-18、TNF-α、NO的關(guān)系[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年08期

9 Dahn L Clemens;Katrina J Mahan;;Alcoholic pancreatitis:Lessons from the liver[J];World Journal of Gastroenterology;2010年11期

10 屈健寧;蔡大川;;急性胰腺炎合并肝損害152例臨床分析[J];重慶醫(yī)學(xué);2010年05期

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本文編號(hào)：1576878