本文關(guān)鍵詞： 急性心肌梗死 肺纖維化 樹突狀細(xì)胞 炎癥反應(yīng)　出處：《復(fù)旦大學(xué)》2013年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景 急性心肌梗死是臨床上常見的急危重癥,可誘導(dǎo)機(jī)體的炎癥反應(yīng)。這不僅出現(xiàn)在心臟本身,也出現(xiàn)在肺部,其急性期主要表現(xiàn)為炎癥細(xì)胞和炎癥因子在肺部浸潤；然后逐漸出現(xiàn)膠原纖維的過量積聚。目前AMI對肺臟的影響研究較少。 樹突狀細(xì)胞是功能最強(qiáng)和唯一能誘導(dǎo)機(jī)體初始免疫應(yīng)答的抗原遞呈細(xì)胞,能夠啟動和維持組織器官的炎癥反應(yīng)。成熟DCs遞呈外來或自身抗原并激活T細(xì)胞,啟動或維持炎癥反應(yīng),但其在心肌梗死所致肺部炎癥和纖維化中的作用尚未明確。 本課題首先通過建立小鼠急性心肌梗死模型,探討急性心肌梗死對肺臟的影響。進(jìn)一步通過T細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測DCs的免疫調(diào)節(jié)功能,探討DCs在急性心肌梗死引起肺臟改變中可能的作用。 第一部分急性心肌梗死相關(guān)性肺部炎癥反應(yīng) 目的： 通過建立小鼠急性心肌梗死模型,探討急性心肌梗死對肺臟的影響。方法： (1)通過結(jié)扎左冠脈前降支建立小鼠急性心肌梗死模型,在1周及2周后行心超檢測及血清BNP水平。 (2)分組：對照組(Sham組),急性心梗后1周組(MW1組)；急性心梗后2周組(MW2組)。 (3)分別在1周及2周后檢測以下指標(biāo)：①肺泡灌洗液細(xì)胞分類計(jì)數(shù)和肺濕干重比；②肺組織HE染色、Masson染色及TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡；③肺組織中ACE、CD11c、CD68、α-SMA、TLR4、TLR9的免疫組化檢測；④采用CBA法,檢測血漿和BALF中IL-6、MCP-1、IL-12p70、TNF-α、IL-10水平；⑤采用流式細(xì)胞儀檢測肺組織單細(xì)胞懸液中CD45、CDllc及TLR9陽性的細(xì)胞比例。 結(jié)果： 在急性心肌梗死后1周時,血漿中IL-6、MCP-1、IL-12p70、TNF-α、IL-10水平較Sham組顯著增高(p0.05)。Sham組BALF中的細(xì)胞數(shù)量少,分類以巨噬細(xì)胞為主；MW1組的中性粒細(xì)胞明顯增加(p0.05)。IL-6、IL-12p70水平也顯著升高(p0.05)。肺組織也出現(xiàn)系列改變,其中HE染色顯示：MW1組小鼠肺組織充血、肺泡腔內(nèi)有滲出液、肺泡間隔明顯增厚、肺間質(zhì)水腫、炎癥細(xì)胞浸潤、毛細(xì)血管擴(kuò)張充血；肺內(nèi)凋亡細(xì)胞明顯增加(p0.05)。免疫組化結(jié)果顯示,ACE、CD11c、CD68、α-SMA、TLR4、TLR9表達(dá)較Sham組顯著增加(p0.05)。流式細(xì)胞儀檢測肺組織單細(xì)胞懸液中TLR9陽性細(xì)胞顯著增加(p0.05)。Masson染色顯示,肺內(nèi)已出現(xiàn)纖維組織增生,肺濕/干重比(W/D)下降(p0.05)。 在急性心肌梗死后2周時,血漿中IL-6、MCP-1、IL-12p70、TNF-α、IL-10水平仍持續(xù)顯著增高(p0.05). BALF中性粒細(xì)胞仍增加明顯(p0.05); IL-6、 MCP-1、IL-12p70、TNF-α、IL-10水平均顯著升高(p0.05)。肺組織HE染色示MW2組小鼠肺組織較MW1組充血水腫明顯減輕、炎癥細(xì)胞減少,但肺間質(zhì)明顯增厚。肺內(nèi)凋亡細(xì)胞增加明顯(p0.05)。免疫組化結(jié)果顯示,ACE、CDllc、 CD68、α-SMA仍有上升趨勢(p0.05)。TLR4、TLR9無明顯變化。流式細(xì)胞儀檢測肺組織單細(xì)胞懸液中CD45、CDllc及TLR9陽性的細(xì)胞顯著增多(p0.05)。Masson染色顯示,肺間質(zhì)、支氣管及肺血管周圍纖維化更顯著(p0.05)。肺濕/干重比(W/D)顯著下降(p0.05)。 結(jié)論： (1)急性心肌梗死后1周,肺組織出現(xiàn)了以炎性細(xì)胞浸潤和炎癥因子增加為主的急性炎癥反應(yīng)。 (2)急性心肌梗死后2周時,肺部炎癥反應(yīng)仍持續(xù)存在,但更為顯著的變化是肺間質(zhì)、支氣管及肺血管周圍的纖維化。 第二部分心肌壞死物激活樹突狀細(xì)胞的炎癥反應(yīng) 目的： 探討DCs在急性心肌梗死后肺部炎癥反應(yīng)中可能起到的作用。 方法： (1)分組：對照組(CONTR組);干預(yù)組(MEDIUM組) (2)將壞死心肌細(xì)胞的上清加入小鼠骨髓源性DCs中培養(yǎng),觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,流式細(xì)胞儀檢測MHC-Ⅱ、CD40、CD80、CD83、CD86, CBA法檢測培養(yǎng)上清中TNF-α、IFN-γ水平,Western Blot法檢測NF-κB蛋白表達(dá)。 (3)從小鼠脾臟獲取CD4+T細(xì)胞,并與干預(yù)后的DCs共培養(yǎng),流式細(xì)胞儀檢測T細(xì)胞的增殖水平。 結(jié)果： (1)將小鼠骨髓源性DCs加入GM-CSF和IL-4培養(yǎng)后,細(xì)胞呈半懸浮樣生長,突起明顯,胞體變大,形態(tài)不規(guī)則。加入壞死心肌細(xì)胞的上清培養(yǎng)后,DCs的突起明顯增多、變長。 (2)采用流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn)DCs加入壞死心肌細(xì)胞的上清培養(yǎng)后,對CD80和CD83分子具有明顯的上調(diào)作用(p0.05),而對CD40、CD86和MHC-Ⅱ并無上調(diào)作用,其中,對CD40有抑制趨勢。 (3)培養(yǎng)上清的細(xì)胞因子檢測發(fā)現(xiàn)TNF-α、IFN-γ水平較對照組顯著升高(p0.05)。 (4) Western Blot檢測NF-κB表達(dá)結(jié)果提示,MEDIUM組NF-κB表達(dá)明顯增加(p0.05)。 (5)將加入壞死心肌細(xì)胞上清培養(yǎng)后的DCs,與同種異體CD4+T細(xì)胞混合培養(yǎng),可激活T細(xì)胞增殖反應(yīng)(p0.05)。結(jié)論： (1)心肌壞死物可上調(diào)樹突狀細(xì)胞的共刺激分子CD80和CD83,導(dǎo)致TNF-α、IFN-γ的分泌增加。 (2)干預(yù)后的DCs與CD4+T細(xì)胞混合培養(yǎng),T細(xì)胞增殖明顯增加。 (3)心肌壞死物可激活樹突狀細(xì)胞,誘發(fā)炎癥反應(yīng)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R542.22;R563

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1551745