發(fā)布時(shí)間：2016-10-22 16:16

  本文關(guān)鍵詞：胎肝干細(xì)胞治療不同類型F344大鼠急性肝衰竭的實(shí)驗(yàn)研究及大鼠門靜脈分支殘端置管模型構(gòu)建，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《第四軍醫(yī)大學(xué)》 2014年

胎肝干細(xì)胞治療不同類型F344大鼠急性肝衰竭的實(shí)驗(yàn)研究及大鼠門靜脈分支殘端置管模型構(gòu)建

劉廣欣  

【摘要】：急性肝衰竭（acute liver failure, ALF）是各種肝臟疾病主要的致死原因之一，以進(jìn)展迅速的肝性腦病以及嚴(yán)重的肝功能損害為特點(diǎn)。肝臟移植被認(rèn)為是對(duì)急性肝衰竭最佳最有效的治療方法，然而供肝的缺乏是嚴(yán)重阻礙著肝移植的廣泛開展和應(yīng)用的瓶頸。細(xì)胞移植因其優(yōu)點(diǎn)也成為替代肝移植手術(shù)治療急、慢性終末期肝病最有前景的方法[1,2]。胎肝干/祖細(xì)胞（FLSPCs）為干細(xì)胞治療各種肝病的最理想細(xì)胞之一。本實(shí)驗(yàn)利用課題組之前報(bào)道的三部分離法在F344胎鼠中有效富集、純化、體外擴(kuò)增胎肝干細(xì)胞，并用pAcGFP1-N1轉(zhuǎn)染干細(xì)胞，使其能表達(dá)GFP（green fluorescenceprotein, GFP）作為示蹤。以同種F344大鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，利用四氯化碳腹腔注射制造急性藥物性肝衰竭大鼠模型、外科手術(shù)方法切除85%大鼠肝臟，制作急性肝損傷肝衰竭大鼠模型。12小時(shí)后將轉(zhuǎn)染后的胎肝干細(xì)胞經(jīng)尾靜脈途徑分別注射入上述模型體內(nèi)，分選不同時(shí)間段觀察肝臟修復(fù)情況。于干細(xì)胞移植后12小時(shí)后，治療組與對(duì)照組肝功能即出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，72小時(shí)凝血檢查、病死率及肝臟病理切片檢查均顯示治療組優(yōu)于對(duì)照組。在驗(yàn)證胎肝干細(xì)胞治療急性肝衰竭的可能性和有效性的基礎(chǔ)上，構(gòu)建大鼠肝臟斷面門靜脈分支的殘端靜脈置管模型，利用胎肝干細(xì)胞經(jīng)過不同的移植途徑驗(yàn)證新模型的優(yōu)劣。肝功檢查結(jié)果表明經(jīng)新模型置管途徑移植細(xì)胞治療效果等同于經(jīng)門靜脈穿刺移植治療效果。以此得出結(jié)論：1．三步分離法提取的胎肝干細(xì)胞具有一定改善急性肝衰竭大鼠的肝功能、凝血及肝臟病理指標(biāo)的作用。2．經(jīng)門靜脈分支殘端置管途徑移植FLSPCs效果等同于經(jīng)門靜脈穿刺途徑。 目的 1．研究移植胎肝臟原始/干細(xì)胞對(duì)治療藥物性急性肝功能衰竭及急性損傷性肝衰竭大鼠的可能性與有效性。 2．構(gòu)建大鼠肝臟斷面門靜脈分支的殘端靜脈置管模型，并在實(shí)驗(yàn)一的基礎(chǔ)上進(jìn)行不同途徑的胎肝干細(xì)胞細(xì)胞移植實(shí)驗(yàn)，，以此來對(duì)比分析新模型的優(yōu)劣。方法 1．胎肝干細(xì)胞的富集、純化和轉(zhuǎn)染示蹤 于胎齡14d的F344孕鼠中提取胎肝，經(jīng)酶消化后，利用三步分離法進(jìn)行FLSPCs的提取、純化、體外擴(kuò)增。并用pAcGFP1-N1轉(zhuǎn)染干細(xì)胞，使其能表達(dá)GFP作為示蹤。 2．急性肝衰竭動(dòng)物模型的構(gòu)建、干細(xì)胞的植入以及測(cè)定移植修復(fù)的指標(biāo) 將80只F344大鼠分為四組。A、B組按3ml/kg予腹腔一次性注射四氯化碳(CCl4)溶液，C、D兩組行肝臟85%切除，12小時(shí)后予以B、D兩治療組尾靜脈注射1×106個(gè)胎肝干細(xì)胞，A、C兩對(duì)照組注射等劑量培養(yǎng)液，在不同時(shí)間段提取四組大鼠血清，測(cè)定肝功能ALT、AST、TBIL、ALB，及凝血指標(biāo)PT，統(tǒng)計(jì)死亡率、腹水生成量；取肝臟組織切片觀察其修復(fù)情況。 3．構(gòu)建大鼠肝斷面門靜脈分支殘端的靜脈置管模型，并進(jìn)行胎肝干細(xì)胞的細(xì)胞移植實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行肝臟修復(fù)指標(biāo)測(cè)試以對(duì)比分析新模型的優(yōu)劣。 60只F344大鼠分為三組。E、F組行行85%肝切除術(shù)；G組行85%肝切除術(shù)+肝斷面門靜脈分支殘端置管術(shù)。術(shù)中F組經(jīng)門靜脈注入4×105個(gè)表達(dá)GFP（greenfluorescence protein, GFP）的胎肝干細(xì)胞（fetal liver stem/progenitor cells, FLSPCs）。G組經(jīng)留置導(dǎo)管注射入同等量的FLSPCs，E組注射同等劑量的培養(yǎng)液。72小時(shí)取血清，測(cè)定肝功能ALT、AST，統(tǒng)計(jì)死亡率；取肝臟組織切片觀察其修復(fù)情況。統(tǒng)計(jì)學(xué)采用方差分析和LSD-t檢驗(yàn)。 結(jié)果 1．三步分離法能有效從14d胎齡的F344孕鼠胚胎肝臟中富集FLSCs。細(xì)胞增殖速度快、貼壁快，細(xì)胞長滿后呈鋪路石樣外觀。細(xì)胞體積小、大小、形態(tài)均勻一致，多呈三角形或多角形，核漿比例較大。 2．在移植胎肝干細(xì)胞后12小時(shí)后，兩模型組內(nèi)的肝功能指標(biāo)檢測(cè)（ALT、AST、TBIL、ALB)即開始出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。A組ALT、AST、TBIL、ALB均值分別為(5404.17±376.94)U/L、(6823±348.99)U/L、(98.43±5.21)umol/L、(24.12±1.21)g/；B組為：(4807±244.62)U/L、(5290.67±289.68)U/L、(83.67±3.501)umol/L、(26.33±1.21)g/L； C組分別為：(1946.3±106.87)U/L、(3834.5±230.05)U//L、(102.50±8.24)umol/L、(17.83±1.72)g/L； D組分別為：(1400.5±124.07)U/L、(2985±134.07)U/L、(83±7.61)umol/L、(21.33±1.86)g/L。在移植后36小時(shí)、60小時(shí)檢測(cè)肝功，隨時(shí)間推移B、D組肝功指標(biāo)恢復(fù)改善明顯優(yōu)于相應(yīng)對(duì)照組。60小時(shí)測(cè)PT值及腹水均分別優(yōu)于兩對(duì)照組（P0.01）；干細(xì)胞移植后60小時(shí)后取出肝臟行冰凍切片檢查： A組損傷重、結(jié)構(gòu)破壞明顯，大面積肝細(xì)胞壞死，肝小葉破壞；B組較對(duì)照組明顯減輕；C組肝細(xì)胞增生不明顯，伴有炎細(xì)胞浸潤；D組見肝細(xì)胞增生廣泛，肝小葉結(jié)構(gòu)恢復(fù)明顯。 3．表達(dá)GFP示蹤的胎肝干細(xì)胞經(jīng)模型留置管道移植及經(jīng)門靜脈穿刺移植后72小時(shí)檢測(cè)肝功能數(shù)據(jù)顯示F組ALT、 AST分別為(802.83±79.22)U/L、(1463.50±56.22)U/L; G組ALT、AST分別為(827.83±63.08)U/L、(1472.83±52.41)U/L；E組ALT （1275.67±329.59)U/L、(2806.83±157.0)U/L。F組G組兩者間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但均優(yōu)于對(duì)照組。兩者病理學(xué)檢查均提示肝臟體積較對(duì)照組有所增大，肝葉代償，鏡下見肝細(xì)胞增生明顯，肝索結(jié)構(gòu)較完整，肝小葉結(jié)構(gòu)較E組有較明顯恢復(fù)。E組病理學(xué)顯示剩余肝葉代償性腫大。鏡下可見肝竇及中央靜脈擴(kuò)張，伴有炎細(xì)胞浸潤，肝細(xì)胞增生不明顯。提示經(jīng)門靜脈分支殘端置管途徑移植FLSPCs治療急性肝損傷性肝衰竭效果等同于經(jīng)門靜脈穿刺途徑。 結(jié)論 1．三步分離法提取的胎肝干細(xì)胞具有一定改善急性肝衰竭大鼠的肝功能、凝血及肝臟病理指標(biāo)的作用。 2．經(jīng)門靜脈分支殘端置管途徑移植FLSPCs效果等同于經(jīng)門靜脈穿刺途徑，且該模型具有可反復(fù)、可選時(shí)、減少創(chuàng)傷等優(yōu)點(diǎn)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R575.3
【目錄】：

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中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 賀福初;;人胎肝蛋白質(zhì)組及其與轉(zhuǎn)錄組的對(duì)接[A];中國蛋白質(zhì)組學(xué)首屆學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2003年

2 姜穎;王京蘭;程剛;錢小紅;賀福初;;人胎肝磷酸化蛋白質(zhì)表達(dá)譜的構(gòu)建[A];中國蛋白質(zhì)組學(xué)首屆學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2003年

3 吳北燕;黃紹良;陳惠芹;張緒超;魏菁;;人胎肝造血期胎肝間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究[A];第10屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2005年

4 吳北燕;黃紹良;陳惠芹;張緒超;魏菁;;人胎肝造血期胎肝間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究[A];第10屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2005年

5 肖菲頡;姜樹晶;那曉東;;LY294002可抑制VEGF和PLGF對(duì)胎肝造血細(xì)胞的調(diào)控作用[A];中國病理生理學(xué)會(huì)第九屆全國代表大會(huì)及學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2010年

6 馬麗霞;黃艷紅;王綺如;;人卵黃囊造血的初步研究[A];湖南省生理科學(xué)會(huì)新世紀(jì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2002年

7 孫士鵬;劉貴建;;促紅細(xì)胞生成素的生物學(xué)研究進(jìn)展[A];第一次全國中西醫(yī)結(jié)合檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會(huì)成立大會(huì)論文匯編[C];2014年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 吳志軍;[N];科技日?qǐng)?bào);2006年

2 王雪飛 吳志軍;[N];健康報(bào);2006年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 陳廷貴;22周孕齡人胎肝轉(zhuǎn)錄組及SARS-CoV（BJ-01）基因組的生物信息學(xué)研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

2 張俊杰;胎肝中特異表達(dá)基因的克隆[D];第四軍醫(yī)大學(xué);1998年

3 瞿祥虎;人源重要功能新基因的克隆、表征與功能研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2001年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 白磊;胎肝血管的解剖學(xué)觀測(cè)[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2007年

2 黨立力;Tg737基因在胎肝干細(xì)胞分化過程中的作用及機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

3 張程;孕期母體接觸細(xì)菌脂多糖上調(diào)小鼠胎盤和胎肝血紅素氧化酶-1表達(dá)[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2008年

4 劉廣欣;胎肝干細(xì)胞治療不同類型F344大鼠急性肝衰竭的實(shí)驗(yàn)研究及大鼠門靜脈分支殘端置管模型構(gòu)建[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：胎肝干細(xì)胞治療不同類型F344大鼠急性肝衰竭的實(shí)驗(yàn)研究及大鼠門靜脈分支殘端置管模型構(gòu)建，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：149519