發(fā)布時間：2018-02-04 22:38

  本文關(guān)鍵詞： 胍丁胺 膿毒癥 肺損傷 中性粒細胞　出處：《重慶醫(yī)科大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:建立盲腸結(jié)扎穿孔(cecal ligation puncture,CLP)模型,探討胍丁胺(agmatine,AGM)對膿毒癥小鼠肺組織的保護作用及其對中性粒細胞(polymorphonuclear leukocyte,PMN)功能的影響。方法:1、將6-8周齡、雄性C57BL/6小鼠,按完全隨機分組法分為三組,分別為:SHAM組(只開腹不做其他處理+生理鹽水)、CLP組(CLP手術(shù)+生理鹽水)、CLP+AGM組(CLP手術(shù)+200mg/kg AGM)。觀察各組小鼠生存狀態(tài),記錄72h內(nèi)死亡數(shù)目、時間。2、將6-8周齡、雄性C57BL/6小鼠,按完全隨機分組法分為三組,分別為:SHAM組、CLP組、CLP+AGM組。各組小鼠分別取建模后24h腹腔灌洗液、血液及肺組織,并對腹腔灌洗液、血液及肺組織進行菌落計數(shù);酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測肺組織勻漿中白細胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及髓過氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的含量;蘇木精-伊紅(Hematoxylin and Eosin,HE)染色觀察肺病理學改變;末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導的三磷酸脫氧鳥苷缺口末端標記法(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated d UTP Nick-End labeling,TUNEL)檢測肺組織凋亡情況;并測定肺組織濕干比。3、將6-8周齡、雄性C57BL/6小鼠,按完全隨機分組法分為三組,分別為:SHAM組、CLP組、CLP+AGM組。牛鮑計數(shù)板對建模后0h、6h、12h及24h各組小鼠腹腔灌洗液進行細胞計數(shù),并用流式檢測腹腔灌洗液PMN百分比及胞內(nèi)活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量;四甲基偶氮唑鹽(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法檢測AGM作用于小鼠PMN的安全濃度;Transwell試驗檢測建模后24h骨髓PMN趨化功能;分離并培養(yǎng)小鼠腹腔PMN,檢測AGM對其吞噬功能的影響。結(jié)果:1、SHAM組小鼠的生存率為100%,狀態(tài)較好,活動正常,可正常飲食;CLP組小鼠建模后6h即出現(xiàn)死亡,72h生存率僅為16.67%,與SHAM組比較p0.001,有統(tǒng)計學差異;AGM治療后小鼠生存率提高到40%,與CLP組比較p=0.027,有統(tǒng)計學差異。2、CLP+AGM組與CLP組比較發(fā)現(xiàn):AGM治療可明顯降低膿毒癥小鼠體內(nèi)細菌含量[腹腔灌洗液(log CFU/ml):5.28±0.98 vs.6.85±0.58,p=0.033;血液(log CFU/ml):3.63±0.45 vs.5.73±0.83,p=0.017;肺組織(log CFU/ml):2.31±0.25 vs.3.90±0.71,p=0.018]。CLP組與SHAM組相比,CLP術(shù)后24h肺組織炎癥因子及MPO水平明顯升高[IL-6(pg/mg):1789.67±263.41 vs.169.00±39.04;TNF-α(pg/mg):998.67±172.14 vs.255.33±30.55;MPO(pg/mg):94.33±8.62 vs.22.00±6.56,均p0.001],并出現(xiàn)明顯病理變化及肺水腫(肺濕干比:4.95±0.20 vs.3.60±1.45,p0.001)。CLP+AGM組與CLP組相比,炎癥因子及MPO水平顯著降低[IL-6(pg/mg):1226.27±123.31 vs.1789.67±263.41,p=0.007;TNF-α(pg/mg):668.00±90.60 vs.998.67±172.14,p=0.012;MPO(pg/mg):68.00±14.42 vs.94.33±8.62,p=0.021];肺損傷及水腫情況明顯減輕(肺濕干比:4.39±0.10 vs.4.95±0.20,p=0.001)。熒光顯微鏡下觀察小鼠肺組織發(fā)現(xiàn):CLP組小鼠肺組織出現(xiàn)明顯凋亡,而AGM治療后肺組織凋亡明顯減少。3、建模后24h,CLP+AGM組與CLP組相比小鼠腹腔PMN絕對數(shù)、百分比及其所產(chǎn)生的ROS均明顯增加[PMN絕對數(shù)(×107個/ml):1.92±0.13比0.76±0.70,p0.01;PMN百分比(%):92.50±1.41 vs.78.27±4.45,p=0.02;ROS(平均熒光強度×104):11.81±2.93 vs.7.01±1.51,p=0.02];Transwell試驗檢測PMN趨化功能后發(fā)現(xiàn):AGM治療可顯著增強CLP術(shù)后24h小鼠骨髓PMN趨化功能;小鼠腹腔PMN經(jīng)AGM處理后,吞噬功能顯著增強。結(jié)論:1、CLP可致小鼠膿毒癥,其72h存活率僅為20%左右;AGM治療后,膿毒癥小鼠存活率為40%,明顯提高。表明AGM對膿毒癥小鼠有生存保護作用。2、AGM治療可降低膿毒癥小鼠體內(nèi)細菌含量及肺組織炎癥因子、MPO水平;還可減輕肺臟損傷及水腫,抑制細胞凋亡。表明AGM對膿毒癥小鼠肺臟有明顯保護作用。3、AGM能增加膿毒癥小鼠感染部位PMN絕對數(shù)及百分比,同時又可增加PMN趨化、吞噬等功能。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R459.7

【參考文獻】

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本文編號：1491347