本文關(guān)鍵詞：急性肝衰竭小鼠腸黏膜通透性變化機制及微生態(tài)制劑的保護作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《河北醫(yī)科大學(xué)》 2014年

急性肝衰竭小鼠腸黏膜通透性變化機制及微生態(tài)制劑的保護作用

趙欣  

【摘要】：目的：肝衰竭是指由多種因素引起的嚴重肝臟損害，導(dǎo)致肝臟本身合成、解毒、排泄和生物轉(zhuǎn)化等功能發(fā)生嚴重障礙或失代償，臨床上出現(xiàn)以凝血機制障礙、黃疸、肝性腦病、腹水等為主要表現(xiàn)的一組癥候群[1]。關(guān)于肝衰竭的發(fā)病機理目前尚不十分清楚。近年來，多數(shù)學(xué)者認為本病的發(fā)生主要是免疫損傷，缺血缺氧，內(nèi)毒素血癥三重致死性打擊的結(jié)果[2]。肝衰竭時存在嚴重的內(nèi)毒素血癥，內(nèi)毒素及其下游產(chǎn)物腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白介素-6、NO等炎性細胞因子的異常升高，一方面可以導(dǎo)致大量肝細胞壞死或凋亡，亦能通過某種機制影響或是破壞了腸黏膜屏障功能，導(dǎo)致腸黏膜通透性增高，從而使得一些大分子物質(zhì)、細菌及其毒素均可以隨意通過腸黏膜屏障，并且與自發(fā)性細菌性腹膜炎、肝性腦病等嚴重并發(fā)癥的發(fā)生密切相關(guān)。因此本實驗擬通過對BALB/c小鼠腹腔注射D-氨基半乳糖建立急性肝衰竭小鼠（acute liverfailure，ALF）模型，并應(yīng)用微生態(tài)制劑—雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌（金雙歧）灌胃干預(yù)，研究急性肝衰竭小鼠回腸ZO-1蛋白表達情況及其與血清TNF-α、血漿內(nèi)毒素水平等的關(guān)系，以探討ALF腸黏膜通透性升高的可能機制以及微生態(tài)制劑的保護作用。 方法：選用健康清潔級6-8周齡雄性BALB/c小鼠30只，體重18-22g。30只小鼠采用隨機數(shù)字表法分成正常對照組、急性肝衰竭組和金雙歧干預(yù)組（簡稱干預(yù)組），每組各10只。所有小鼠均標準飼料喂養(yǎng)，飼養(yǎng)溫度18-22℃，相對濕度(60.0±10.0)％。正常對照組及急性肝衰竭組小鼠給予生理鹽水（9ml/kg/d）灌胃，干預(yù)組給予雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌（900mg/kg/d，生理鹽水配成100mg/ml混懸液）灌胃，每日一次，兩周后急性肝衰竭組和干預(yù)組一次性腹腔注射D-氨基半乳糖（3.0g/kg，以生理鹽水溶解，濃度為60mg/ml），正常對照組腹腔注射等體積生理鹽水。注射后9h以10%水合氯醛腹腔注射麻醉，摘眼球法處死小鼠，留取血清、血漿、肝組織及回腸組織。應(yīng)用日本OLYMPUS AU-2700全自動生化分析儀檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT），天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase，AST）；酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清TNF-α水平；應(yīng)用鱟試劑顯色基質(zhì)法測定血漿內(nèi)毒素水平；取部分肝組織固定于10%福爾馬林溶液，石蠟包埋，4μm連續(xù)切片并進行蘇木素-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色觀察肝組織的普通病理學(xué)改變；實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（real time quantitative polymerase chainreaction，RT-qPCR）檢測肝組織TNF-α mRNA及回腸組織ZO-1mRNA的表達；Western blot檢測回腸ZO-1蛋白的表達。采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析。實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（x±s）表示。數(shù)據(jù)分析前進行正態(tài)性及方差齊性檢驗。滿足正態(tài)且方差齊時，采用單因素方差分析，組間比較采用Student-Newman-Keuls法。非正態(tài)或方差不齊時，采用Kruskal-Wallis H秩和檢驗，組間比較采用Mann-Whitney U檢驗。相關(guān)性分析采用Pearson直線相關(guān)分析法。P 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： 1小鼠的一般情況 正常對照組小鼠毛發(fā)有光澤，精神狀態(tài)好，飲食量多，對外界刺激反應(yīng)靈敏；急性肝衰竭組小鼠毛發(fā)凌亂沒有光澤，飲食量明顯減少，活動減少，對外界刺激反應(yīng)遲鈍；干預(yù)組小鼠上述表現(xiàn)介于正常對照組與急性肝衰竭組之間。 2肝組織病理學(xué)變化 HE染色示：正常對照組：肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，以中央靜脈為軸，肝細胞索呈放射狀排列，肝細胞結(jié)構(gòu)完整，大小均勻，無變性及壞死，無炎細胞浸潤；急性肝衰竭組：肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝細胞索消失，，可見多處出血壞死灶，并有大量炎細胞浸潤；干預(yù)組：肝小葉結(jié)構(gòu)基本完整，細胞排列較整齊，僅見輕度細胞水腫，小葉中央?yún)^(qū)僅有少量點狀壞死，變性、壞死及炎性細胞浸潤的程度均較急性肝衰竭組顯著改善。 3各組小鼠血清ALT、AST、TNF-α及血漿內(nèi)毒素水平變化 急性肝衰竭組小鼠血清ALT （393.587±31.010）、 AST（475.751±41.536）、TNF-α（435.971±30.415）及血漿內(nèi)毒素（3.789±0.313）水平均高于正常對照組（38.994±9.628、55.279±7.500、51.602±8.540、0.577±0.120），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P值均0.01）；干預(yù)組上述各指標（158.271±23.637、259.216±22.492、256.289±26.221、2.716±0.214）均較急性肝衰竭組明顯下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P值均0.01）。 4肝組織TNF-α mRNA及回腸組織ZO-1mRNA表達變化 急性肝衰竭組小鼠肝組織TNF-α mRNA表達（3.355±0.274）明顯高于正常對照組（1.00），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01）；并且，干預(yù)組小鼠肝組織TNF-α mRNA表達（2.284±0.212）較急性肝衰竭組明顯下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01）。 急性肝衰竭組小鼠回腸ZO-1mRNA表達（0.441±0.046）明顯低于正常對照組（1.00），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01）；干預(yù)組小鼠回腸ZO-1mRNA表達（0.680±0.039）較急性肝衰竭組明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01）。 5回腸組織ZO-1蛋白水平 急性肝衰竭組小鼠回腸ZO-1蛋白表達（0.361±0.037）明顯低于正常對照組（0.808±0.069），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01）；干預(yù)組小鼠回腸ZO-1蛋白表達（0.552±0.055）較急性肝衰竭組明顯增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01）。 6ZO-1蛋白與血清TNF-α、血漿內(nèi)毒素水平的相關(guān)性分析 各組小鼠回腸ZO-1蛋白的表達與血清TNF-α、血漿內(nèi)毒素水平均呈負相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為r=-0.946，-0.919（P值均0.01）。 結(jié)論： 1腹腔注射D-氨基半乳糖能夠成功建立急性肝衰竭小鼠模型，血清TNF-α和血漿內(nèi)毒素在其發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮不可或缺的作用。 2急性肝衰竭小鼠回腸ZO-1mRNA/蛋白表達較正常對照組明顯下降，且ZO-1蛋白的表達量與血清TNF-α水平之間存在相關(guān)性，TNF-α通過抑制回腸ZO-1mRNA的表達進而下調(diào)ZO-1蛋白的表達，破壞腸黏膜上皮細胞間的緊密連接，可能是TNF-α導(dǎo)致腸黏膜通透性升高的原因之一。 3微生態(tài)制劑改善腸黏膜通透性的可能機制之一是通過降低循環(huán)中內(nèi)毒素含量、降低TNF-α水平從而上調(diào)回腸ZO-1蛋白的表達實現(xiàn)的。 4微生態(tài)制劑可以補充腸道的正常菌群，改善腸道菌群失調(diào)，減少內(nèi)毒素、TNF-α的合成與釋放，減輕內(nèi)毒素對肝臟的損害而發(fā)揮保肝作用。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R575.3
【目錄】：

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9 杜寧;莊永龍;胡瑾華;劉曉燕;岳小敬;王會;崔志飛;周渝霞;郝玉清;王慧芬;;慢性肝衰竭臨床數(shù)據(jù)庫的建立及其應(yīng)用價值初探[A];全國第2屆中西醫(yī)結(jié)合傳染病學(xué)術(shù)會議暨國家中醫(yī)藥管理局第1屆傳染病協(xié)作組會議論文匯編[C];2008年

10 張畔;楊榮蘭;;血漿置換治療急性肝衰竭的臨床觀察[A];2000年全國危重病急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2000年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蕭紅;[N];農(nóng)村醫(yī)藥報（漢）;2009年

2 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院急診科 教授 羅學(xué)宏;[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2010年

3 王麗;[N];農(nóng)村醫(yī)藥報（漢）;2009年

4 段鐘平;[N];健康報;2007年

5 南通大學(xué)附屬醫(yī)院肝膽外科主任 陳鐘;[N];健康報;2007年

6 黃顯斌　何巍;[N];健康報;2009年

7 特約記者 劉慧;[N];保健時報;2007年

8 莊慶平;[N];健康報;2006年

9 李艷新　任文靜;[N];哈爾濱日報;2010年

10 陳師�！∧吆檎洹∈Y銳　杜精銳　余鳳　馬莉;[N];家庭醫(yī)生報;2007年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉慧敏;解毒涼血法治療乙型肝炎慢加急性肝衰竭的療效評價及機制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

2 郝紹瑞;李氏人工肝系統(tǒng)治療乙肝慢加急性肝衰竭的療效和預(yù)后評價[D];浙江大學(xué);2013年

3 吳會玲;慢加急性肝衰竭內(nèi)毒素血癥對清道夫受體CD163作用的研究[D];華中科技大學(xué);2010年

4 閆濤;乙型慢加急性肝衰竭患者HBV基因突變的研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院;2010年

5 吳艷玲;刺五加酸、紅景天苷對小鼠急性肝衰竭的保護作用及干預(yù)機制研究[D];延邊大學(xué);2009年

6 李羽;永生化人胚胎肝細胞系的建立及肝細胞移植的實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

7 呂國良;以漏斗形流化床式反應(yīng)器為核心的新型生物人工肝系統(tǒng)組建及療效評價[D];浙江大學(xué);2011年

8 李濤;肝病患者谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶P1的研究[D];山東大學(xué);2013年

9 陳文;HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭患者表觀遺傳學(xué)變化研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

10 郝彥琴;骨髓間充質(zhì)干細胞移植對急性肝衰竭大鼠腸源性內(nèi)毒素血癥的治療作用及機制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張海鳴;甲狀腺激素對急性肝衰竭大鼠肝細胞的保護作用[D];江蘇大學(xué);2010年

2 郭朝陽;慢加急性肝衰竭患者外周血腫瘤壞死因子-α基因啟動子甲基化狀態(tài)的研究[D];山東大學(xué);2010年

3 張強;79例亞急性肝衰竭患者臨床特征分析及中西醫(yī)結(jié)合治療療效評價[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2011年

4 周鵬程;微囊懸浮型流化床式生物人工肝治療急性肝衰竭豬的血清代謝組學(xué)研究[D];浙江大學(xué);2012年

5 李曉爽;慢加急性肝衰竭預(yù)后的回顧性臨床研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

6 趙欣;急性肝衰竭小鼠腸黏膜通透性變化機制及微生態(tài)制劑的保護作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

7 黃建偉;四氯化碳構(gòu)建犬急性肝衰竭模型及血液凈化效果探索[D];暨南大學(xué);2010年

8 焦明靜;過氧化物酶體增殖物激活受體α對急性肝衰竭的保護作用與機制[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

9 李憲;血液灌流聯(lián)合血液濾過治療犬急性肝衰竭的實驗研究[D];暨南大學(xué);2010年

10 高嶺;慢加急性肝衰竭糖皮質(zhì)激素受體的表達[D];山東大學(xué);2010年

  本文關(guān)鍵詞：急性肝衰竭小鼠腸黏膜通透性變化機制及微生態(tài)制劑的保護作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：141670