發(fā)布時間：2017-12-26 19:03

  本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對急性肺損傷早期炎性因子的影響　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：機體在嚴(yán)重?zé)齻�、�?chuàng)傷、休克、感染等因素的影響下,導(dǎo)致全身性的過度的炎癥反應(yīng),稱為全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory response syndrome, SIRS)。肺是SIRS的靶器官,大量的炎癥因子聚集在肺部,損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞,導(dǎo)致肺間質(zhì)水腫,而廣泛的肺間質(zhì)水腫影響肺的通氣與換氣功能,導(dǎo)致急性肺損傷(acute lung injury, ALI)甚至急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS),引起機體持續(xù)性的頑固的低氧血癥,使全身各臟器缺氧,出現(xiàn)功能障礙,導(dǎo)致患者的救治失敗。 ALI是以肺容積減少、順應(yīng)性降低、嚴(yán)重的通氣/血流(VA/Q)比例失調(diào)為病理生理特征的滲出性病變,臨床表現(xiàn)為進行性低氧血癥和呼吸窘迫。肺泡結(jié)構(gòu)破壞后,中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞(Macrophage, Mφ)聚集,局部釋放炎性因子,引發(fā)肺部炎癥反應(yīng)。AL1過程中的主要參與細(xì)胞有：中性粒細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞、肺血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。目前研究認(rèn)為,Mφ在AL1的整個過程中不是一般參與者,而是啟動和調(diào)控者。Mφ被認(rèn)為是一種具有多功能的細(xì)胞,其除參與非特異性的清除、殺傷以及建立特異性的免疫應(yīng)答的功能外,更重要的是產(chǎn)生和分泌上百種免疫因子,如腫瘤壞死因子a (tumor necrosis factor-a, TNF-α)、白介素10(interleukin10, IL-10)、白介素6(interleukin6,IL-6)、白介素1(interleukin1, IL-1)等。其中TNF-a是最早被釋放的炎性因子之一,它是一種多功能細(xì)胞因子,在炎癥反應(yīng)調(diào)控中起著關(guān)鍵作用；IL-10是一種細(xì)胞因子合成抑制因子,通過抑制促炎因子IL-1、IL-12、TNF-α和IL-2來發(fā)揮作用�？刂圃l(fā)病,遏制其誘導(dǎo)的全身失控性炎癥反應(yīng),是預(yù)防和治療ALI/ARDS的必要措施。 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BMSCs)是近年來研究較為成熟的成體干細(xì)胞。有文獻表明,BMSCs是通過分泌合成或者誘導(dǎo)M(p分泌合成具有炎癥調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子來實現(xiàn)其免疫調(diào)節(jié)作用的,能夠抑制過度的炎癥反應(yīng),但具體機制有待進一步研究。 本實驗研究擬將BMSCs應(yīng)用于急性肺損傷早期的動物模型,通過離體實驗和在體實驗以探討以下問題：1. BMSCs能否調(diào)節(jié)Mφ釋放炎性因子；2.BMSCs能否通過作用于Mφ,從而減輕機體炎癥反應(yīng)的強度；3.BMSCs能否減輕ALI動物模型炎癥反應(yīng)強度,減輕肺部損傷,改善肺部通氣功能。為BMSCs應(yīng)用于大面積燒傷、嚴(yán)重創(chuàng)傷以及復(fù)合傷所引起的機體SIRS、免疫功能紊亂的臨床治療提供理論依據(jù)。 第一部分BMSCs對巨噬細(xì)胞分泌TNF-α、IL-10的影響目的： 探討B(tài)MSCs對脂多糖(lipopolysacharide, LPS)刺激巨噬細(xì)胞分泌TNF-α、IL-10的影響。方法： (1)貼壁培養(yǎng)法獲取巨噬細(xì)胞,添加1μg/ml LPS,分別在1、3、5、7、12、24h時收集培養(yǎng)基上清液,ELISA試劑盒檢測TNF-α的含量。(2)全骨髓培養(yǎng)法獲取BMSCs,貼壁培養(yǎng)法獲取巨噬細(xì)胞,上述兩種細(xì)胞共培養(yǎng),添加1μg/ml LPS,分別在1、3、5、7、12、24h時收集培養(yǎng)基上清液,ELISA試劑盒檢測(?)TNF-α、IL-10的含量。 結(jié)果： (1) Mφ+LPS組TNF-α的含量明顯高于PBS組與Mφ組,P0.001,結(jié)果有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。Mφ組與PBS組TNF-a的含量無顯著性差異。(2)Mcp+BMSCs+LPS組TNF-a的含量低于MΨ+LPS組,P0.001,結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異；MΨ+BMSCs+LPS組IL-10的含量顯著高于Mcp+LPS組與BMSCs+LPS組,P0.001,結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異。 結(jié)論： (1)LPS促進巨噬細(xì)胞分泌TNF-α、IL-10;(2) LPS刺激巨噬細(xì)胞時,BMSCs可以減少TNF-a分泌,增加IL-10的分泌。 第二部分BMSCs對ALI早期TNF-α、IL-10的影響 目的： 研究尾靜脈注射BMSCs對大鼠ALI早期TNF-a、IL-10的影響,探討B(tài)MSCs對急性肺損傷早期的治療作用。 方法： (1)分離培養(yǎng)BMSCs,P2細(xì)胞達對數(shù)生長期時進行Brdu標(biāo)記,48小時后進行實驗。(2)SPF級雄性SD大鼠,建立氣管內(nèi)滴注LPS誘導(dǎo)大鼠急性肺損傷模型。(3)實驗動物隨機分為空白對照組(NS+PBS)、對照組(LPS+PBS)、實驗組(①LPS+BMSCs、②LPS+BMSCs(提前1h))。實驗組①尾靜脈注射含有Brdu標(biāo)記的BMSCs100萬的PBSSOOul;實驗組②提前1h注射BMSCs組。對照組尾靜脈注射PBS液。分別在造模成功后1h、7h、12h、24h不同時間點留取大鼠肺組織標(biāo)本(每個時間點n=5)。左上葉進行肺組織濕干比重(W/D)檢測；右中葉制作肺組織勻漿,ELISA方法檢測勻漿中炎癥因子TNF-α、IL-10的含量：右下葉進行HE染色。 結(jié)果： (1)氣管內(nèi)滴注5mg/kg濃度的LPS時,大鼠肺組織結(jié)構(gòu)破壞、嚴(yán)重充血、水腫,肺間質(zhì)增寬。(2)經(jīng)尾靜脈注射BMSCs后,大鼠肺組織濕干比下降(P0.001),水腫、充血程度明顯減輕,勻漿液中TNF-α的含量下降(P0.001),IL-10的含量身高(P0.001)。(3)實驗組免疫組織化學(xué)染色可發(fā)現(xiàn)Brdu標(biāo)記的BMSCs,在肺部有歸巢現(xiàn)象。 結(jié)論： (1) BMSCs可減輕SD大鼠急性肺損傷早期肺水腫程度,調(diào)節(jié)炎性因子TNF-α、IL-10的釋放。(2)SD大鼠尾靜脈注射BMSCs可以通過歸巢現(xiàn)象聚集在急性肺損傷的肺組織中發(fā)揮作用。
[Abstract]:Under the influence of severe burns, trauma, shock, infection and other factors, the body leads to systemic over inflammatory reaction. It is called systemic inflammatory response syndrome (SIRS). The lung is the target organ of SIRS, a large number of inflammatory factors accumulation in the lung vascular endothelial cell injury, leading to pulmonary interstitial edema, and extensive pulmonary interstitial edema of pulmonary ventilation and ventilation function, leading to acute lung injury (acute lung, injury, ALI) and acute respiratory distress syndrome (acute respiratory distress syndrome. ARDS), caused by persistent stubborn hypoxemia, make the body organs hypoxia, dysfunction, leading to failure treatment.
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R644

【參考文獻】

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本文編號：1338450