本文關(guān)鍵詞：VEGF基因修飾后人脂肪干細(xì)胞上清對成纖維細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞的影響

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【摘要】：研究背景:慢性創(chuàng)面患者人數(shù)的增加已成為一個重要的社會和經(jīng)濟(jì)問題,人脂肪干細(xì)胞(HADSCs)可以分泌多種生長因子并可用于創(chuàng)面治療,現(xiàn)我們試圖通過慢病毒攜帶血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)基因轉(zhuǎn)染于HADSCs,獲得VEGF的穩(wěn)定分泌。目的:為探索一種有效的創(chuàng)面治療方法,我們使用慢病毒攜帶VEGF基因修飾HADSCs,檢測其上清液中VEGF的表達(dá),并用其上清液作用于創(chuàng)面愈合關(guān)鍵細(xì)胞,觀察其對人皮膚成纖維細(xì)胞(HDFs)及人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)增殖、遷移的影響。材料及方法:1、通過膠原酶消化法從人脂肪中提取HADSCs,經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測其表面標(biāo)志物,并進(jìn)行成脂、成骨、成軟骨多向誘導(dǎo);2、將攜帶VEGF基因的慢病毒轉(zhuǎn)染于HADSCs,以GFP作為報告基因分析轉(zhuǎn)染效率,并定時收集上清液,通過ELISA法檢測上清中蛋白分泌情況。3、將不同組HADSCs-CM作用于HDFs及HUVECs,通過CCK-8法檢測細(xì)胞增殖,劃痕法檢測細(xì)胞遷移能力。結(jié)果:1、經(jīng)過0.1%的Ⅰ型膠原酶消化法可方便、有效地提取出HADSCs,經(jīng)流式鑒定顯示CD90、CD29、CD44、CD105為(+),CD45、CD106為(-),并可成功多向誘導(dǎo)。2、通過GFP熒光可觀察,發(fā)現(xiàn)VEGF可穩(wěn)定轉(zhuǎn)染于HADSCs,ELISA結(jié)果顯示其VEGF及b FGF分泌提高并維持在較高水平。3、當(dāng)完全培養(yǎng)基混合與VEGF-HADSCs-CM以1:2的比例混合時對成纖維細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞的增殖及遷移有明顯的促進(jìn)作用。結(jié)論:HADSCs容易獲取,含量豐富,是組織工程理想的種子細(xì)胞。慢病毒攜帶VEGF基因可成功轉(zhuǎn)染于HADSCs,通過蛋白質(zhì)相互作用使HADSCs-CM中的VEGF及b FGF表達(dá)明顯提高,提取轉(zhuǎn)染后VEGF-CM作用于體外創(chuàng)面愈合相關(guān)的成纖維細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞有明顯促增殖、遷移能力,提示應(yīng)用其治療慢性創(chuàng)面的潛能。
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R641
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本文編號：1283545