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尼古丁對大鼠髕腱肌腱干細胞生物學特性影響的實驗研究

發(fā)布時間:2017-11-26 16:25

  本文關鍵詞:尼古丁對大鼠髕腱肌腱干細胞生物學特性影響的實驗研究


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【摘要】:目的:探討體外尼古丁對大鼠髕腱肌腱干細胞(tendon-derived stem cells,TDSCs)的細胞活力、細胞早期凋亡以及肌腱相關基因表達的影響,揭示吸煙導致肌腱病變以及損傷肌腱延遲愈合的潛在細胞學發(fā)病機制。方法:無菌條件下取8周齡SD大鼠的髕腱,I型膠原酶消化分離獲得單個有核細胞,以最適密度(50個/cm2)進行接種,細胞呈克隆樣生長,獲得原代TDSCs。基礎培養(yǎng)細胞至第3代,將其分為兩組,實驗組用不同濃度的尼古丁培養(yǎng)基(10-7 M,10-6 M,10-5 M,10-4 M和10-2 M)干預,對照組繼續(xù)采用基礎培養(yǎng)基(0M)培養(yǎng)。處理6 h、24 h、48 h和72 h后分別應用四唑鹽(MTT)比色法檢測尼古丁對TDSCs體外存活的影響,72h后應用Annexin V-FITC/PI雙染法檢測尼古丁對TDSCs體外早期凋亡的影響,實時熒光定量PCR(Realtime PCR)檢測肌腱相關基因Col1a1和Scx的表達。結果:與對照組相比,實驗組不同濃度的尼古丁干預下,TDSCs的細胞活力呈下降趨勢,呈時間依賴性和濃度依賴性,濃度高于10-4 M時作用顯著,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。流式細胞儀檢測TDSCs早期凋亡(Annexin V+/PI-)的數(shù)量隨著尼古丁濃度的增加而增加,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。同時,Realtime PCR檢測結果顯示:與對照組相比,實驗組中Col1a1和Scx的m RNA表達水平均降低,濃度高于10-5 M時作用顯著,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:體外尼古丁可抑制大鼠髕腱TDSCs的細胞活力,導致TDSCs早期凋亡,同時抑制TDSCs中成肌腱分化轉錄、細胞外基質合成相關基因的表達。這可能是吸煙導致肌腱病變以及損傷肌腱延遲愈合的潛在細胞學發(fā)病機制。
【作者單位】: 東南大學附屬中大醫(yī)院骨科;
【基金】:國家自然科學基金青年基金項目(81201422) 江蘇省自然科學基金青年基金項目(BK2012334) 東南大學基本科研業(yè)務費“創(chuàng)新基金”項目(3290002401) 國家大學生創(chuàng)新訓練計劃(1210286090) 中國博士后基金資助(2012M520983) 江蘇省“六大人才高峰”資助項目(2013-WSW-054)
【分類號】:R965
【正文快照】: 吸煙可導致骨質疏松[1]、骨折延遲愈合或不愈合[2]、骨骼肌肌力下降[3]等骨骼肌肉系統(tǒng)疾患。有研究報道,吸煙會導致肌腱病變和損傷肌腱的延遲愈合[4,5]。然而,其潛在的細胞學發(fā)病機制尚未闡明。肌腱組織中的肌腱干細胞在維持肌腱穩(wěn)態(tài)與修復中發(fā)揮重要作用。吸煙是否對肌腱干細

【共引文獻】

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 朱玉德;膠質瘤干細胞的生物學特性及其與膠質瘤血管發(fā)生的關系[D];蘇州大學;2013年

2 杜兆杰;牽張成骨中交感神經調控骨髓間充質干細胞動員與遷移的研究[D];第四軍醫(yī)大學;2013年

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中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 劉鵬;失交感神經支配對骨牽張中成骨趨化因子PDGF影響的研究[D];第四軍醫(yī)大學;2013年

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4 吳麗云;大腸癌變過程中microRNA、DNA甲基轉移酶的相互調控及中藥干預[D];廣州中醫(yī)藥大學;2014年

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【相似文獻】

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2 倪明;骨髓間充質干細胞的成肌腱分化促進肌腱愈合的實驗研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2012年

3 倪明;骨髓間充質干細胞的成肌腱分化促進肌腱愈合的實驗研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2011年

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本文編號:1230425

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