本文關(guān)鍵詞：犬臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定

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【摘要】：目的建立一種簡便、高效的犬臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞分離方法,并進(jìn)行培養(yǎng)和鑒定。方法無菌條件下取12只新生比格犬臍帶共12根,臍帶長(13.0±1.5)cm。PBS液沖洗后,各取4根臍帶注入1%Ⅰ型膠原酶分別消化臍靜脈5、7、10 min后,收集細(xì)胞并行錐蟲藍(lán)計(jì)數(shù);倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),待細(xì)胞爬滿培養(yǎng)瓶后以1∶2比例傳代。�、裥湍z原酶消化7 min獲得的第3代細(xì)胞,通過免疫熒光染色和流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞中血管假性血友病因子(vonWillebrand factor,vWF)和血小板-內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子CD31表達(dá),進(jìn)行細(xì)胞鑒定;MTT檢測細(xì)胞增殖。結(jié)果消化5、10 min后未收集到或偶爾收集到血管內(nèi)皮細(xì)胞;消化7 min可見大量血管內(nèi)皮細(xì)胞,培養(yǎng)24 h后細(xì)胞呈多角形,隨培養(yǎng)時(shí)間延長細(xì)胞逐漸呈"鋪路石"樣生長,細(xì)胞核較大,多為單核,少數(shù)細(xì)胞為雙核,傳代后細(xì)胞形態(tài)無明顯變化。熒光倒置顯微鏡下觀察,培養(yǎng)細(xì)胞vWF和CD31表達(dá)陽性;流式細(xì)胞儀檢測示培養(yǎng)細(xì)胞vWF陽性表達(dá)率為99.0%±0.7%,CD31陽性表達(dá)率為98.0%±1.2%,提示培養(yǎng)細(xì)胞為血管內(nèi)皮細(xì)胞。MTT檢測示,隨培養(yǎng)時(shí)間延長,血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖速度明顯提高。結(jié)論采用酶消化法從犬臍靜脈中分離培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞操作簡便,且細(xì)胞數(shù)量多、純度高。
【作者單位】： 解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院燒傷研究所;
【關(guān)鍵詞】： 血管內(nèi)皮細(xì)胞 臍靜脈 細(xì)胞培養(yǎng) 細(xì)胞鑒定 犬
【基金】：全軍醫(yī)院重大高新技術(shù)項(xiàng)目(2010GXZS095) 首都醫(yī)學(xué)發(fā)展科研基金資助項(xiàng)目(2009-2040)~~
【分類號(hào)】：R329
【正文快照】： 在燒、創(chuàng)傷等多種疾病的病理生理改變中,血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)揮了關(guān)鍵作用,如血管通透性改變、白細(xì)胞黏附、炎性細(xì)胞及血小板的黏附與聚集等[1-4],所以血管net/kcms/detail/51.1372.R.20130318.1726.016.html內(nèi)皮細(xì)胞一直是燒、創(chuàng)傷研究的重點(diǎn)內(nèi)容之一。臍靜脈是體外提取血管內(nèi)皮

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 黃起壬,戴育成,李劍,李潔,吳瓊;三種人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分離方法的比較[J];江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2005年05期

2 劉長樂;鄭心田;李廣平;孟恒星;邱錄貴;;體外人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)鑒定及抗原表達(dá)分析[J];山東醫(yī)藥;2011年36期

3 張臣;李彤;侯躍龍;嚴(yán)曉曄;高英堂;;人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的高效分離與培養(yǎng)[J];天津醫(yī)藥;2010年07期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 孫慧琳;湛奕;劉珍珍;李筠;蔡德鴻;;人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)及鑒定[J];廣東醫(yī)學(xué);2012年06期

2 姜俊芬;韓偉;;動(dòng)物組織細(xì)胞分離純化方法學(xué)[J];解剖學(xué)雜志;2006年06期

3 施國祥;李賓公;鄭澤琪;康婷;肖堅(jiān);;血管緊張素Ⅱ?qū)π募∥⒀軆?nèi)皮細(xì)胞神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-1表達(dá)的影響[J];山東醫(yī)藥;2012年15期

4 薛俊麗;馮波;;人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)方法[J];同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年05期

5 白燕慧;張明昌;邊芳;;胰蛋白酶消化法體外培養(yǎng)和鑒定人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞[J];中國組織工程研究;2012年15期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張曉軍;微環(huán)境影響血管內(nèi)皮細(xì)胞形成新生血管的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 衛(wèi)任;成纖維細(xì)胞生長因子-18上調(diào)動(dòng)脈壁彈力纖維表達(dá)的體外試驗(yàn)研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2012年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王琪;吳中立;鄭尊;張淑英;;肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;1991年01期

2 林少芬,唐仕波,胡潔,鄭健j,鄭湖鈴,羅燕;人血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)及鑒定[J];眼科學(xué)報(bào);2000年02期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李穎川;江偉;周明;薛瑛;李亞春;;大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞原代培養(yǎng)方法的改進(jìn)及細(xì)胞鑒定[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2010年11期

2 周逢海;王養(yǎng)民;宋波;金錫御;喬夠梅;董永超;常德輝;;膀胱逼尿肌細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定[J];西北國防醫(yī)學(xué)雜志;2006年01期

3 陳曉嵐;黃仁彬;莫艷秀;湯銀娟;劉科峰;張建湘;;恒磁場對人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的影響[J];中國臨床康復(fù);2006年25期

4 張英杰;李玉云;;MSCs分離培養(yǎng)及定向分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞的研究[J];中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用;2008年13期

5 陳春燁;易龍;金鑫;于斌;舒芙蓉;糜漫天;;人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)方法的改進(jìn)[J];重慶醫(yī)學(xué);2008年17期

6 張磊;萬偉偉;梁慧芳;陳孝平;張萬廣;張偉;;成體小鼠肝臟卵圓細(xì)胞的分離及培養(yǎng)[J];中國普通外科雜志;2008年11期

7 劉洪付;李京敏;李宇s，

本文編號(hào)：960277