本文關鍵詞：犬臍靜脈血管內(nèi)皮細胞的分離培養(yǎng)與鑒定

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【摘要】：目的建立一種簡便、高效的犬臍靜脈血管內(nèi)皮細胞分離方法,并進行培養(yǎng)和鑒定。方法無菌條件下取12只新生比格犬臍帶共12根,臍帶長(13.0±1.5)cm。PBS液沖洗后,各取4根臍帶注入1%Ⅰ型膠原酶分別消化臍靜脈5、7、10 min后,收集細胞并行錐蟲藍計數(shù);倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài),待細胞爬滿培養(yǎng)瓶后以1∶2比例傳代。�、裥湍z原酶消化7 min獲得的第3代細胞,通過免疫熒光染色和流式細胞儀檢測細胞中血管假性血友病因子(vonWillebrand factor,vWF)和血小板-內(nèi)皮細胞黏附分子CD31表達,進行細胞鑒定;MTT檢測細胞增殖。結果消化5、10 min后未收集到或偶爾收集到血管內(nèi)皮細胞;消化7 min可見大量血管內(nèi)皮細胞,培養(yǎng)24 h后細胞呈多角形,隨培養(yǎng)時間延長細胞逐漸呈"鋪路石"樣生長,細胞核較大,多為單核,少數(shù)細胞為雙核,傳代后細胞形態(tài)無明顯變化。熒光倒置顯微鏡下觀察,培養(yǎng)細胞vWF和CD31表達陽性;流式細胞儀檢測示培養(yǎng)細胞vWF陽性表達率為99.0%±0.7%,CD31陽性表達率為98.0%±1.2%,提示培養(yǎng)細胞為血管內(nèi)皮細胞。MTT檢測示,隨培養(yǎng)時間延長,血管內(nèi)皮細胞增殖速度明顯提高。結論采用酶消化法從犬臍靜脈中分離培養(yǎng)血管內(nèi)皮細胞操作簡便,且細胞數(shù)量多、純度高。
【作者單位】： 解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院燒傷研究所;
【關鍵詞】： 血管內(nèi)皮細胞 臍靜脈 細胞培養(yǎng) 細胞鑒定 犬
【基金】：全軍醫(yī)院重大高新技術項目(2010GXZS095) 首都醫(yī)學發(fā)展科研基金資助項目(2009-2040)~~
【分類號】：R329
【正文快照】： 在燒、創(chuàng)傷等多種疾病的病理生理改變中,血管內(nèi)皮細胞發(fā)揮了關鍵作用,如血管通透性改變、白細胞黏附、炎性細胞及血小板的黏附與聚集等[1-4],所以血管net/kcms/detail/51.1372.R.20130318.1726.016.html內(nèi)皮細胞一直是燒、創(chuàng)傷研究的重點內(nèi)容之一。臍靜脈是體外提取血管內(nèi)皮

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本文編號：960277