本文關(guān)鍵詞：優(yōu)化重組人C-反應(yīng)蛋白在酵母中的分泌表達(dá)

  更多相關(guān)文章： C-反應(yīng)蛋白 畢赤酵母 信號(hào)肽 分泌表達(dá)

【摘要】：目的:通過優(yōu)化引導(dǎo)蛋白分泌的信號(hào)肽(signal peptide,SP),構(gòu)建高效分泌表達(dá)具有免疫活性的重組人C-反應(yīng)蛋白(recombinant human C-reactive protein,rhCRP)的畢赤酵母菌株。方法:通過重疊PCR和DNA重組技術(shù),分別將信號(hào)肽MFαSP、CRN SP、SUC2 SP和MFα-op SP的基因重組到rhCRP基因的5′端后克隆到畢赤酵母表達(dá)載體上,獲得的4種重組質(zhì)粒分別重組到畢赤酵母菌X-33中進(jìn)行甲醇誘導(dǎo)分泌表達(dá),Western blot法鑒定蛋白分泌情況;利用HisTrap HP柱純化rhCRP后用間接ELISA法鑒定其免疫反應(yīng)性。結(jié)果:成功構(gòu)建了4種重組質(zhì)粒。4種SP能引導(dǎo)表達(dá)出大小約為23 kD的rhCRP,其中MFαSP引導(dǎo)rhCRP分泌的量約為另外3種信號(hào)肽的3~12倍。間接ELISA檢測(cè)表明,純化的rhCRP具有特異的免疫反應(yīng)性。結(jié)論:成功篩選出了高效分泌表達(dá)rhCRP的重組畢赤酵母菌株并表達(dá)、純化得到具有免疫反應(yīng)性的rhCRP,為rhCRP相關(guān)的進(jìn)一步臨床及基礎(chǔ)研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 大連大學(xué)醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： C-反應(yīng)蛋白 畢赤酵母 信號(hào)肽 分泌表達(dá)
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號(hào):31070822) 遼寧省教育廳高�？蒲杏�(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào):L2010015)
【分類號(hào)】：R392.1
【正文快照】： C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP)是1930年由美國(guó)的Tillett和Francis博士首先發(fā)現(xiàn)的能與肺炎球菌的C多糖發(fā)生沉淀反應(yīng)的一種急性時(shí)相蛋白[1]。正常人群的CRP濃度很低,但在感染等病理過程中,血漿CRP濃度變化顯著而迅速[1]。CRP的檢測(cè)對(duì)許多炎癥疾病的診治及心血管疾病發(fā)病

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