本文關(guān)鍵詞：空腸彎曲菌cj0069蛋白的克隆表達及抗原性分析

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【摘要】：目的構(gòu)建空腸彎曲菌cj0069基因原核表達系統(tǒng),克隆表達cj0069蛋白,根據(jù)cj0069的氨基酸序列進行抗原性結(jié)構(gòu)預(yù)測分析,并驗證其抗原性特征。方法利用在線軟件對cj0069蛋白進行抗原性結(jié)構(gòu)預(yù)測分析;用PCR方法從中國分離菌株ICDCCJ07001的基因組DNA中擴增cj0069基因,連接入pMD18-T載體,將重組質(zhì)粒pMD18-T/cj0069和表達載體pGEX-4T-1雙酶切,回收cj0069和pGEX-4T-1酶切產(chǎn)物后連接,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入大腸埃希菌E.coli BL21(DE3),對重組質(zhì)粒pGEX-4T-1/cj0069進行測序及酶切鑒定,IPTG誘導(dǎo)其表達,表達產(chǎn)物進行SDS-PAGE分析及飛行質(zhì)譜鑒定;利用空腸彎曲菌兔免疫血清,采用Western blot分析cj0069蛋白的抗原反應(yīng)性。結(jié)果 PCR擴增、DNA測序及酶切鑒定證實重組質(zhì)粒pGEX-4T-1/cj0069構(gòu)建成功,重組表達蛋白rGST-cj0069經(jīng)飛行質(zhì)譜鑒定為保守空腸彎曲菌蛋白。結(jié)構(gòu)預(yù)測獲得cj0069蛋白的抗原性肽段及線性表位等抗原性結(jié)構(gòu)特征。Western blot檢測顯示該蛋白不能被空腸彎曲菌免疫兔血清識別。結(jié)論成功構(gòu)建cj0069基因重組表達載體pGEX-4T-1/cj0069,并在大腸埃希菌中高效表達,獲得的空腸彎曲菌cj0069蛋白具有抗原性結(jié)構(gòu)特征,但針對免疫血清不具有抗原反應(yīng)性。
【作者單位】： 中國疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所傳染病預(yù)防控制國家重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 空腸彎曲菌 克隆 表達 cj 抗原性
【基金】：國家自然科學基金項目(No.81071314)
【分類號】：R378
【正文快照】： 空腸彎曲菌(Campylobacter jejuni)為革蘭染色陰性,微需氧,螺旋狀彎曲桿菌�？漳c彎曲菌感染是導(dǎo)致人類胃腸炎的主要病原菌之一[1,2]�？漳c彎曲菌所致疾病的臨床表現(xiàn)因人而異,如水樣便、血便等[3]。此外,空腸彎曲菌感染可導(dǎo)致多種并發(fā)癥,如菌血癥、腦膜炎等,其中格林巴利綜合征

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 周益裝;張茂俊;肖迪;孟凡亮;張建中;;空腸彎曲菌CadF蛋白的原核表達與產(chǎn)物分析[J];中國病原生物學雜志;2010年05期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 童偉;張戰(zhàn)軍;賈天軍;;肺炎衣原體Cpn0147基因的克隆、表達與定位及其重組蛋白的生物信息學分析[J];中國病原生物學雜志;2009年08期

2 鄭麗舒;李武平;王剛;段招軍;侯云德;;重組李斯特菌細胞溶解素LLO蛋白表達純化及溶血活性鑒定[J];中國生物制品學雜志;2006年03期

3 劉敬,龔煒;HCV核心抗原基因的克隆和表達[J];生物學雜志;1999年01期

4 牛亞梅,王e，

本文編號：934891