本文關(guān)鍵詞：雌性乳鼠顱骨來源的成骨細胞培養(yǎng)方法的建立及其評價

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【摘要】：目的:探討建立乳鼠成骨細胞體外培養(yǎng)的最佳方案,為骨組織工程的研究提供穩(wěn)定可靠的種子細胞來源。方法:用新出生(48h內(nèi))乳鼠顱骨,采用改良的胰蛋白酶及膠原酶兩步消化法進行細胞體外培養(yǎng),倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài),對其堿性磷酸酶(ALP)活性及礦化能力進行鑒定,并繪制細胞生長曲線,觀察成骨細胞的表型特征。結(jié)果:原代細胞接種24h后可見部分圓形細胞以散在的方式貼壁,48～72h完全貼壁伸展成飽滿多角狀,成多個集落;7～8d時,集落迅速增多;至10～15d約進入快速生長期,集落中心細胞密集,周圍細胞呈放射狀或旋渦狀排列,細胞之間無接觸抑制現(xiàn)象,集落間出現(xiàn)重疊;15～20d融合細胞重疊復(fù)層生長。傳代培養(yǎng)的成骨細胞其形態(tài)呈現(xiàn)出不規(guī)則多角形,多為不規(guī)則三角形或四邊形,表面有短而薄的突起。經(jīng)蘇木精染色觀察、堿性磷酸酶染色及礦化結(jié)節(jié)的茜素紅染色鑒定其具有完全的成骨細胞表型,確實為成骨細胞。結(jié)論:改良膠原酶及胰蛋白酶聯(lián)合消化法能夠在較短時間內(nèi)獲得高純度的成骨細胞,有望成為骨組織工程種子細胞培養(yǎng)的常規(guī)方法。
【作者單位】： 江蘇省徐州市中心醫(yī)院骨關(guān)節(jié)科;吉林大學(xué)第一醫(yī)院骨關(guān)節(jié)科;
【關(guān)鍵詞】： 膠原酶 胰蛋白酶 成骨細胞 細胞培養(yǎng)
【基金】：中央保健局專項基金資助課題(2006年)
【分類號】：R329
【正文快照】： 成骨細胞體外培養(yǎng)技術(shù)是研究骨代謝的重要切入點,但成骨細胞比較脆弱,在實際培養(yǎng)中表現(xiàn)出細胞純度差、細胞功能缺失、細胞數(shù)量少及培養(yǎng)難度較高等諸多問題。顱骨來源成骨細胞培養(yǎng)的優(yōu)點是可以獲得高純度的保持正常功能的細胞,對其進行研究則符合正常生理狀態(tài),也最具代表性和

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本文編號：900425