本文關(guān)鍵詞：用合成多肽為半抗原制備Bt Cry1Ab的單克隆抗體

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【摘要】：由于Bt Cry1Aa、Cry1Ab和Cry1Ac晶體蛋白之間具有很高的同源性(82%~90%),采用常規(guī)的單抗制備方法很難制取特異性強的Bt Cry1Ab單抗,為了制備抗Bt Cry1Ab蛋白的特異性單克隆抗體(MAB),本研究從NCBI獲得了Bt Cry1Ab蛋白的氨基酸序列,根據(jù)ANTHEPORT和DNAStar軟件對其抗原性、親水性和表位性分析結(jié)果選定BtCry1Ab特異性肽段進(jìn)行人工合成,并將其偶聯(lián)于匙孔血藍(lán)蛋白(KLH)免疫動物,應(yīng)用細(xì)胞融合技術(shù)制備了抗該肽段的雜交瘤細(xì)胞22株。通過ELISA試驗從中篩選出與Bt Cry1Ab天然蛋白產(chǎn)生特異性反應(yīng)的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株一株(3A10)。經(jīng)檢測,其分泌的抗體亞類為IgG1型;輕鏈屬κ型;雜交瘤細(xì)胞株染色體數(shù)目為89~108條;用其制作的腹水對Bt Cry1Ab合成肽的反應(yīng)效價為1∶1×107;對Bt Cry1Ab天然蛋白的反應(yīng)效價為1∶1×104;純化后的抗體對Bt Cry1Ab合成肽的效價為1∶1×108;對Bt Cry1Ab天然蛋白的效價為1∶2×104。抗體的相對親和力為0.5μg/mL,對Bt Cry1Ab蛋白的最低可檢測值為10ng/mL。ELISA結(jié)果顯示,3A10雜交瘤細(xì)胞株所分泌的MAB能特異性識別合成肽和Bt Cry1Ab蛋白,而對同源的Cry1Ac和Cry1Aa蛋白無交叉反應(yīng);本研究所制備的Bt Cry1Ab單克隆抗體能夠?qū)ΤＲ?guī)棉和抗蟲棉(Gossypium hirsutumL.)進(jìn)行有效的區(qū)分,并且能特異性的識別其中的Bt Cry1Ab蛋白。
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所;
【關(guān)鍵詞】： Bt CryAb 單克隆抗體 合成肽
【基金】：國家轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專項(No.2009ZX08012-017B) 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所基本科研業(yè)務(wù)費專項資金(NO.2011-13)
【分類號】：R392
【正文快照】： 存在于土壤中的蘇云金芽孢桿菌(Bacilusthuringiensis,簡稱Bt)是一種革蘭氏陽性細(xì)菌,在形成芽孢的過程中,能產(chǎn)生出殺蟲晶體蛋白(喻子牛,1990)。Bt的殺蟲晶體蛋白對磷翅目昆蟲有特異殺蟲性。由于Bt Cry1Aa、Cry1Ab和Cry1Ac三種蛋白具有高達(dá)82%~90%的同源性,因此,Bt Cry1Aa、Cry

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本文編號：800636