本文關(guān)鍵詞：剛地弓形蟲肌動(dòng)蛋白基因的克隆與表達(dá)

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【摘要】：目的克隆和表達(dá)剛地弓形蟲肌動(dòng)蛋白(TgACT)基因,并分析其免疫反應(yīng)性。方法提取弓形蟲RH株速殖子的總RNA。根據(jù)TgACT基因編碼序列(登錄號(hào)為XM_002369622.1)設(shè)計(jì)合成引物,進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)雙酶切后連接入pET-30a(+)載體。將重組質(zhì)粒pET30a-TgACT轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌(E.coli)DH5α,陽性菌落經(jīng)PCR和雙酶切鑒定,并測序。pET30a-TgACT在E.coli BL21(DE3)中用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE鑒定。分別用抗多聚組氨酸標(biāo)簽(Anti-His)抗體和兔抗弓形蟲血清為一抗進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)分析。結(jié)果 RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物約為1 100 bp。菌落PCR、雙酶切及測序結(jié)果顯示,重組質(zhì)粒pET30a-TgACT構(gòu)建成功。SDS-PAGE結(jié)果表明,目的蛋白在E.coli BL21(DE3)中以包涵體形式表達(dá),相對(duì)分子質(zhì)量(M r)約為49 000。通過蛋白的變性和復(fù)性處理及純化,獲得可溶性純化蛋白。Western blotting結(jié)果顯示,重組TgACT蛋白能被Anti-His抗體和兔抗弓形蟲血清識(shí)別。結(jié)論成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pET30a-TgACT,獲得剛地弓形蟲重組肌動(dòng)蛋白,且具有免疫反應(yīng)性。
【作者單位】： 太原師范學(xué)院生物系;山西醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)寄生蟲學(xué)研究所;
【關(guān)鍵詞】： 剛地弓形蟲 肌動(dòng)蛋白 基因克隆 原核表達(dá) 免疫反應(yīng)性
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.81071374)~~
【分類號(hào)】：R382.5
【正文快照】： 剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)是一種呈世界性分布的專性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲,可引起人獸共患的弓形蟲病[1]。目前,對(duì)防治該病尚無理想的藥物和可用的疫苗,疫苗預(yù)防是首選策略,尋求有效的保護(hù)性抗原至關(guān)重要[6]。弓形蟲缺乏運(yùn)動(dòng)細(xì)胞器,以“滑行運(yùn)動(dòng)”的方式實(shí)現(xiàn)侵入宿主細(xì)胞的過程

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本文編號(hào)：791336