本文關鍵詞：剛地弓形蟲肌動蛋白基因的克隆與表達

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【摘要】：目的克隆和表達剛地弓形蟲肌動蛋白(TgACT)基因,并分析其免疫反應性。方法提取弓形蟲RH株速殖子的總RNA。根據(jù)TgACT基因編碼序列(登錄號為XM_002369622.1)設計合成引物,進行逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)擴增,擴增產(chǎn)物經(jīng)雙酶切后連接入pET-30a(+)載體。將重組質(zhì)粒pET30a-TgACT轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌(E.coli)DH5α,陽性菌落經(jīng)PCR和雙酶切鑒定,并測序。pET30a-TgACT在E.coli BL21(DE3)中用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導表達,表達產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE鑒定。分別用抗多聚組氨酸標簽(Anti-His)抗體和兔抗弓形蟲血清為一抗進行蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)分析。結果 RT-PCR擴增產(chǎn)物約為1 100 bp。菌落PCR、雙酶切及測序結果顯示,重組質(zhì)粒pET30a-TgACT構建成功。SDS-PAGE結果表明,目的蛋白在E.coli BL21(DE3)中以包涵體形式表達,相對分子質(zhì)量(M r)約為49 000。通過蛋白的變性和復性處理及純化,獲得可溶性純化蛋白。Western blotting結果顯示,重組TgACT蛋白能被Anti-His抗體和兔抗弓形蟲血清識別。結論成功構建重組質(zhì)粒pET30a-TgACT,獲得剛地弓形蟲重組肌動蛋白,且具有免疫反應性。
【作者單位】： 太原師范學院生物系;山西醫(yī)科大學醫(yī)學寄生蟲學研究所;
【關鍵詞】： 剛地弓形蟲 肌動蛋白 基因克隆 原核表達 免疫反應性
【基金】：國家自然科學基金(No.81071374)~~
【分類號】：R382.5
【正文快照】： 剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)是一種呈世界性分布的專性細胞內(nèi)寄生原蟲,可引起人獸共患的弓形蟲病[1]。目前,對防治該病尚無理想的藥物和可用的疫苗,疫苗預防是首選策略,尋求有效的保護性抗原至關重要[6]。弓形蟲缺乏運動細胞器,以“滑行運動”的方式實現(xiàn)侵入宿主細胞的過程

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