本文關鍵詞：猿猴病毒40T抗原轉(zhuǎn)化的人臍靜脈內(nèi)皮細胞系PUMC-HUVEC-T1的建立

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【摘要】：目的建立猿猴病毒40(SV40)T抗原轉(zhuǎn)化的人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HVUEC)模型,為內(nèi)皮研究提供可利用資源。方法分離人臍靜脈內(nèi)皮細胞,原代培養(yǎng)。感染含有SV40大T、小T抗原的慢病毒,連續(xù)傳代培養(yǎng)。對感染后的HUVEC,RT-PCR檢測大T的表達,免疫細胞化學檢測vWF、CD31、CD34的表達及結(jié)合凝集素能力,透射電鏡觀察內(nèi)皮細胞的超微結(jié)構,Matrigel檢測管狀成型,進行染色體核型分析,皮下接種BABL/c-nu裸鼠檢測致瘤性,PCR法進行種屬鑒定及支原體檢測,短串聯(lián)重復序列(STR)檢測鑒定細胞身份。結(jié)果轉(zhuǎn)化后的人臍靜脈內(nèi)皮細胞命名為PUMC-HUVEC-T1,扁平多角狀,匯合時典型鋪路石排列,體外傳代40代以上(1∶3～4);細胞中有SV40LT mRNA的表達;vWF、CD31、CD34表達均陽性,可結(jié)合荊豆凝集素-1(UEA-1);電鏡可見WP小體;不同代數(shù)細胞核型正常穩(wěn)定,裸鼠體內(nèi)接種不成瘤。PUMC-HUVEC-T1種屬鑒定為人源性,STR結(jié)果與原代HUVEC一致,無支原體的污染,國家實驗細胞資源共享平臺收藏。結(jié)論建立了易獲得、背景清楚、質(zhì)量可靠的SV40 T抗原轉(zhuǎn)化的HUVEC細胞系PUMC-HUVEC-T1。
【作者單位】： 中國醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所細胞資源中心;
【關鍵詞】： 人臍靜脈內(nèi)皮 SV 反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應 免疫組織化學 透射電鏡
【基金】：國家實驗細胞資源共享平臺資助項目
【分類號】：R363
【正文快照】： 人臍靜脈內(nèi)皮(human umbilical vein endothelialcells,HUVEC)是研究內(nèi)皮細胞生物學特性及內(nèi)皮細胞相關疾病的理想模型,原代HUVEC來源受限,分離復雜,且體外培養(yǎng)代數(shù)有限。猿猴病毒40(SV40)的大T(SV40LT)抗原可有效誘導哺乳動物細胞繞過衰老期(M1期),繼續(xù)體外傳代[1～3]。本實

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本文編號：791270