本文關(guān)鍵詞：猿猴病毒40T抗原轉(zhuǎn)化的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系PUMC-HUVEC-T1的建立

  更多相關(guān)文章： 人臍靜脈內(nèi)皮 SV 反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng) 免疫組織化學(xué) 透射電鏡

【摘要】：目的建立猿猴病毒40(SV40)T抗原轉(zhuǎn)化的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HVUEC)模型,為內(nèi)皮研究提供可利用資源。方法分離人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,原代培養(yǎng)。感染含有SV40大T、小T抗原的慢病毒,連續(xù)傳代培養(yǎng)。對(duì)感染后的HUVEC,RT-PCR檢測(cè)大T的表達(dá),免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)vWF、CD31、CD34的表達(dá)及結(jié)合凝集素能力,透射電鏡觀察內(nèi)皮細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu),Matrigel檢測(cè)管狀成型,進(jìn)行染色體核型分析,皮下接種BABL/c-nu裸鼠檢測(cè)致瘤性,PCR法進(jìn)行種屬鑒定及支原體檢測(cè),短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)檢測(cè)鑒定細(xì)胞身份。結(jié)果轉(zhuǎn)化后的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞命名為PUMC-HUVEC-T1,扁平多角狀,匯合時(shí)典型鋪路石排列,體外傳代40代以上(1∶3～4);細(xì)胞中有SV40LT mRNA的表達(dá);vWF、CD31、CD34表達(dá)均陽性,可結(jié)合荊豆凝集素-1(UEA-1);電鏡可見WP小體;不同代數(shù)細(xì)胞核型正常穩(wěn)定,裸鼠體內(nèi)接種不成瘤。PUMC-HUVEC-T1種屬鑒定為人源性,STR結(jié)果與原代HUVEC一致,無支原體的污染,國家實(shí)驗(yàn)細(xì)胞資源共享平臺(tái)收藏。結(jié)論建立了易獲得、背景清楚、質(zhì)量可靠的SV40 T抗原轉(zhuǎn)化的HUVEC細(xì)胞系PUMC-HUVEC-T1。
【作者單位】： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞資源中心;
【關(guān)鍵詞】： 人臍靜脈內(nèi)皮 SV 反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng) 免疫組織化學(xué) 透射電鏡
【基金】：國家實(shí)驗(yàn)細(xì)胞資源共享平臺(tái)資助項(xiàng)目
【分類號(hào)】：R363
【正文快照】： 人臍靜脈內(nèi)皮(human umbilical vein endothelialcells,HUVEC)是研究?jī)?nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)特性及內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)疾病的理想模型,原代HUVEC來源受限,分離復(fù)雜,且體外培養(yǎng)代數(shù)有限。猿猴病毒40(SV40)的大T(SV40LT)抗原可有效誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物細(xì)胞繞過衰老期(M1期),繼續(xù)體外傳代[1～3]。本實(shí)

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 楊振麗;卞曉翠;劉玉琴;王春景;蘇小玲;顧蓓;張宏;;CCC-HPF-2細(xì)胞基因組DNA可作為STR分型標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2011年12期

2 梁淑麗;薛增福;呂艷香;劉洋;梁樹輝;殷繼鵬;竇維佳;趙曉迪;趙宏喜;聶勇戰(zhàn);吳開春;;慢病毒載體介導(dǎo)SV40LT致人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化[J];科學(xué)技術(shù)與工程;2011年11期

3 卞曉翠;劉玉琴;王春景;蘇小玲;趙曉梅;顧蓓;張宏;;應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)鑒定實(shí)驗(yàn)細(xì)胞的來源種屬[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2009年04期

4 邊昶,趙葵,童國新,朱永良,陳鵬;Immortalization of human umbilical vein endothelial cells with telomerase reverse transcriptase and simian virus 40 large T antigen[J];Journal of Zhejiang University Science;2005年07期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李雯霞;黃業(yè)恩;張耀忠;林佩欣;朱海麗;鄒振寧;申洪;;Beta-TC-6細(xì)胞的免疫組化及分子生物學(xué)屬性分析[J];中國體視學(xué)與圖像分析;2015年02期

2 納濤;袁寶珠;;基于細(xì)胞色素b序列差異的細(xì)胞種屬鑒別及種屬間細(xì)胞交叉污染的快速檢測(cè)方法[J];藥物分析雜志;2014年11期

3 孫昊;劉玉琴;卞曉翠;楊振麗;趙曉梅;;應(yīng)用組織特異性分子的保守序列鑒定人源細(xì)胞的組織來源[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2014年06期

4 馮春梅;王冬梅;孫志剛;;應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)對(duì)動(dòng)物性食品進(jìn)行種屬鑒定[J];微量元素與健康研究;2013年04期

5 馮海涼;王春景;顧蓓;楊振麗;劉玉琴;;猿猴病毒40T抗原轉(zhuǎn)化的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系PUMC-HUVEC-T1的建立[J];解剖學(xué)報(bào);2013年02期

6 馮海涼;楊振麗;張宏;劉玉琴;;可利用小鼠誘導(dǎo)多能性干細(xì)胞的建立及鑒定[J];解剖學(xué)報(bào);2013年01期

7 王珊珊;王偉;于瑩瑩;李輝;王寧;;人乳頭瘤病毒癌基因誘導(dǎo)細(xì)胞永生化的研究進(jìn)展[J];生命科學(xué);2012年10期

8 楊振麗;卞曉翠;劉玉琴;王春景;蘇小玲;顧蓓;張宏;;CCC-HPF-2細(xì)胞基因組DNA可作為STR分型標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2011年12期

9 陳輝;馬慧潔;張艷;樂曉萍;張欽憲;;SV40T抗原真核表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年02期

10 劉玉琴;;科學(xué)研究對(duì)所用培養(yǎng)細(xì)胞的質(zhì)量要求[J];中華病理學(xué)雜志;2010年10期

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 卞曉翠;劉玉琴;王春景;蘇小玲;趙曉梅;顧蓓;張宏;;應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)鑒定實(shí)驗(yàn)細(xì)胞的來源種屬[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2009年04期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳仁聲;和京國;劉艷莉;楊艾榮;;由猩紅熱病例分離的乙型溶血性鏈球菌T抗原分型[J];中國公共衛(wèi)生;1987年06期

2 徐克群;張維;關(guān)乃富;鮑永儀;;T抗原在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2007年12期

3 徐克群;張維;關(guān)乃富;鮑永儀;;T抗原在胃癌組織中的表達(dá)及預(yù)后價(jià)值[J];臨床薈萃;2008年04期

4 徐克群;張維;關(guān)乃富;鮑永儀;;T抗原在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J];江蘇醫(yī)藥;2008年06期

5 馮福才;張亞歷;周殿元;賴卓勝;黃文;;腫瘤標(biāo)記物T抗原診斷大腸癌和癌前病變的價(jià)值及臨床篩檢的應(yīng)用[J];中國實(shí)用內(nèi)科雜志;1994年10期

6 常海;鄧軍;郝飛;楊希川;鐘白玉;葉慶佾;;猿猴病毒40T抗原介導(dǎo)永生化黑素細(xì)胞對(duì)其核型、HLA-DR和hTERT表達(dá)的影響[J];臨床皮膚科雜志;2008年06期

7 周殿元,張亞歷,馮福才,賴卓勝,潘德壽;SPA免疫便潛血試驗(yàn)和直腸粘液T抗原試驗(yàn)互補(bǔ)普查大腸癌及其隨訪[J];胃腸病學(xué);1997年02期

8 金順吉,金永德,崔哲洙;猴病毒40T抗原和P53蛋白在毛絲鼠中耳上皮細(xì)胞系的表達(dá)及其意義[J];中華耳鼻咽喉科雜志;2000年05期

9 羅定存,戴洪進(jìn),倪耀忠,池偉;T抗原單克隆抗體法在大腸癌篩檢中的應(yīng)用初探[J];中國癌癥雜志;1998年04期

10 徐福忠;;上泌尿道腫瘤T抗原和ABH血型抗原免疫組織學(xué)檢測(cè)[J];國外醫(yī)學(xué).泌尿系統(tǒng)分冊(cè);1986年04期

，

本文編號(hào)：791270