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  本文關(guān)鍵詞：小鼠抗人CD52功能性抗體的制備與鑒定

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【摘要】：目的鼠抗人CD52抗血清的制備與功能鑒定。方法由人Hut-78細(xì)胞提取細(xì)胞總RNA,運(yùn)用RT-PCR方法擴(kuò)增CD52基因,定向克隆入真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+),用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞,建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞系,用RT-PCR、FACS、免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)。用CD52合成肽免疫小鼠,通過間接ELISA和流式細(xì)胞術(shù)分析抗血清,用MTS實(shí)驗(yàn)鑒定抗體對(duì)白血病LCL細(xì)胞系的增殖抑制作用。結(jié)果建立了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞系。鑒定出有高效價(jià)抗體存在。MTS實(shí)驗(yàn)檢測(cè)免疫血清有抑制LCL細(xì)胞生長作用。結(jié)論功能性抗體制備成功并建立了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染CD52的CHO細(xì)胞系。
【作者單位】： 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所血液病醫(yī)院;內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院;協(xié)和干細(xì)胞基因工程有限公司;
【關(guān)鍵詞】： CD抗體 真核表達(dá)載體 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞 抗體制備
【基金】：天津市科技創(chuàng)新專項(xiàng)資金項(xiàng)目(08FDZDSH03000)
【分類號(hào)】：R392.11
【正文快照】： CD52抗原是一個(gè)只有十二個(gè)氨基酸殘基(GQNDTSQTSSPS)的糖基磷脂酰肌醇(glycosyl phos-phatidyl inositol,GPI)錨定糖蛋白,其C末端通過與GPI連接而固定在細(xì)胞膜上,N末端在3位天冬酰氨上連接有一個(gè)復(fù)雜的富含陰離子的糖基,在其四角巖藻糖基化的甘露糖核心上有幾個(gè)唾液酸化的多

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