本文關(guān)鍵詞：H3亞型流感重組腺病毒候選疫苗的構(gòu)建及鑒定

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【摘要】：目的研制一種制備工藝簡單、無需雞胚即可大量生產(chǎn)的預(yù)防季節(jié)性H3亞型流感重組腺病毒候選疫苗。方法構(gòu)建含有外源H3HA基因的重組腺病毒穿梭載體質(zhì)粒pacAd5-H3HA,并用酶切的方法進行鑒定;將鑒定陽性的pacAd5-H3HA與腺病毒骨架載體質(zhì)粒線性化后用脂質(zhì)體介導(dǎo)共轉(zhuǎn)染HEK293細胞,分別采用RT-PCR、間接免疫熒光試驗以及Western blot方法對構(gòu)建的H3亞型流感重組腺病毒疫苗進行鑒定。結(jié)果 RT-PCR擴增出約1.8kb片段,與目的片段大小相同,表明外源基因H3HA成功插入重組腺病毒。間接免疫熒光試驗顯示重組腺病毒轉(zhuǎn)染后的HEK293細胞中檢測到特異性蛋白,Western blot顯示在70ku處有一反應(yīng)條帶,表明該H3HA蛋白能被兔抗H3亞型HA蛋白血清識別。結(jié)論構(gòu)建的H3亞型流感重組腺病毒能在HEK293細胞中表達具有反應(yīng)原性的H3HA蛋白,為后續(xù)的動物實驗奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所;吉林大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： H亞型流感病毒 重組腺病毒疫苗 HEK細胞
【基金】：國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃項目(No.2012AA02A403) 重點基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃項目(No.2012CB722501) 全軍醫(yī)學(xué)科技“十二五”科研項目(No.BWS11J048)
【分類號】：R392
【正文快照】： 流行性感冒是由流感病毒引起的能夠在人群中廣泛傳播的急性呼吸道傳染病,根據(jù)癥狀不同可分為季節(jié)性流感和大流感。其中以H3亞型流感病毒為主引起的季節(jié)性流感每年均有發(fā)生,嚴重時可導(dǎo)致死亡,且死亡病例多數(shù)(90%)為老年人,以及有潛在慢性病的健康人群[1,2]。腺病毒作為重組疫

【相似文獻】

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1 呂茂民,賈莉瑋,王建國,楊姝,熊景峰,章金剛;G418抗性HEK293細胞的培育[J];中國實驗動物學(xué)報;2003年01期

2 宋\，

本文編號：767043