本文關(guān)鍵詞：高密度脂蛋白作為調(diào)理素促進(jìn)單核細(xì)胞對A群鏈球菌的吞噬

  更多相關(guān)文章： 高密度脂蛋白 A群鏈球菌 調(diào)理素 單核細(xì)胞 吞噬作用

【摘要】：高密度脂蛋白(high-density lipoprotein, HDL)的基本功能是作為反向運(yùn)載工具,將膽固醇從肝外組織運(yùn)送回肝臟進(jìn)行代謝,在清除膽固醇的過程中發(fā)揮了重要作用。但許多研究證實(shí)HDL具有抗感染的作用。近來,我們證明了HDL可以與M41型A群鏈球菌(group A Streptococcus, GAS)表面的Ⅰ型膠原樣蛋白(streptococcal collagen-like protein 1,Sell)特異性結(jié)合,但其相互作用的病理或生理意義并不清楚。另外有研究證明一些清道夫受體可以介導(dǎo)單核細(xì)胞吞噬HDL。因此,我們提出了HDL可能作為調(diào)理素介導(dǎo)單核細(xì)胞對M41型GAS的吞噬的假說。本研究利用熒光標(biāo)記和平板菌落計數(shù)等手段對這一假說進(jìn)行了驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,HDL能夠顯著促進(jìn)U937單核細(xì)胞對GAS的吞噬效率,比對照提高了20%-30%,但小于低密度脂蛋白(low-density lipoprotein, LDL)介導(dǎo)的調(diào)理吞噬效率(55.2%)。GAS與U937單核細(xì)胞共孵育60min后,被單核細(xì)胞吞噬的GAS均被殺死。盡管,極低密度脂蛋白(very-low-density lipoprotein, VLDL)也能夠與M41型GAS(ATCC 12373)特異性結(jié)合,但VLDL不能夠提高U937單核細(xì)胞對GAS的吞噬效率。由于M41型GAS(CMCC 32198)不能與HDL、LDL和VLDL特異性結(jié)合,因此HDL、LDL、VLDL并不能促進(jìn)U937單核細(xì)胞對該菌的吞噬。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),生理濃度的HDL (1000μg/ml)同樣具有類似的調(diào)理作用。用CD36單抗處理U937單核細(xì)胞后,HDL基本失去了介導(dǎo)調(diào)理吞噬作用的能力,而CD4單抗對此調(diào)理吞噬作用無影響,因此,單核細(xì)胞表面參與調(diào)理吞噬作用的受體是CD36。另外,重組表達(dá)的M41型GAS的Ⅰ型膠原樣蛋白(recombinant streptococcal collagen-like protein 1,rScll)可以競爭性的抑制GAS與HDL的結(jié)合,幾乎完全抑制了這種調(diào)理吞噬作用。因此,本研究證明了HDL可以作為調(diào)理素促進(jìn)U937單核細(xì)胞對GAS的吞噬效率,也證明了單核細(xì)胞表面的CD36是調(diào)理素受體。
【關(guān)鍵詞】：高密度脂蛋白 A群鏈球菌 調(diào)理素 單核細(xì)胞 吞噬作用
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R378.12
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-9
• 縮略詞表9-11
• 1 引言11-16
• 1.1 A群鏈球菌11-13
• 1.1.1 A群鏈球菌及其致病性11-12
• 1.1.2 A群鏈球菌膠原樣蛋白12-13
• 1.2 高密度脂蛋白及其功能13-16
• 1.2.1 血漿脂蛋白13-14
• 1.2.2 高密度脂蛋白及其功能14-15
• 1.2.3 清道夫受體CD3615-16
• 1.3 立題依據(jù)16
• 1.4 研究內(nèi)容16
• 2 實(shí)驗(yàn)材料16-20
• 2.1 主要儀器設(shè)備16-17
• 2.2 主要試劑17-20
• 2.2.1 化學(xué)試劑17
• 2.2.2 抗原抗體17-18
• 2.2.3 菌株和細(xì)胞18
• 2.2.4 培養(yǎng)基的配制18-19
• 2.2.5 化學(xué)貯存液的配制19-20
• 3. 實(shí)驗(yàn)方法20-29
• 3.1 A群鏈球菌ATCC 12373-M41 type GAS和CMCC 32198-M41 type GAS的培養(yǎng)及標(biāo)記20-21
• 3.1.1 GAS的培養(yǎng)20-21
• 3.1.2 GAS的標(biāo)記21
• 3.2 U937單核細(xì)胞的凍存、復(fù)蘇及培養(yǎng)21
• 3.2.1 U937單核細(xì)胞的凍存21
• 3.2.2 U937單核細(xì)胞的復(fù)蘇及培養(yǎng)21
• 3.3 ELISA檢測兩株GAS與LDL、HDL、VLDL的結(jié)合21-23
• 3.3.1 ELISA檢測兩株GAS與LDL的結(jié)合22
• 3.3.2 ELISA檢測兩株GAS與HDL的結(jié)合22-23
• 3.3.3 ELISA檢測兩株GAS與VLDL的結(jié)合23
• 3.4 rScl1的誘導(dǎo)表達(dá)及純化23-26
• 3.4.1 工程菌的培養(yǎng)及誘導(dǎo)表達(dá)23
• 3.4.2 rScl1表達(dá)產(chǎn)物的SDS-PAGE檢測23-25
• 3.4.3 rScl1的純化25-26
• 3.4.4 蛋白含量的測定26
• 3.5 r Scl1內(nèi)毒素的去除及蛋白質(zhì)內(nèi)毒素含量的測定26-27
• 3.5.1 去除rScl1的內(nèi)毒素26
• 3.5.2 測定內(nèi)毒素的含量26-27
• 3.6 體外吞噬實(shí)驗(yàn)27-29
• 3.6.1 LDL、HDL、VLDL介導(dǎo)的調(diào)理吞噬試驗(yàn)27
• 3.6.2 不同濃度HDL介導(dǎo)的調(diào)理吞噬效率的差異27-28
• 3.6.3 Anti CD36單克隆抗體對HDL介導(dǎo)的調(diào)理作用的影響28
• 3.6.4 rScl對HDL介導(dǎo)的U937單核細(xì)胞吞噬M41型GAS(ATCC 12373)的影響28-29
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析29-36
• 4.1 ELISA驗(yàn)證LDL、HDL、VLDL與GAS的結(jié)合29
• 4.2 HDL可以作為調(diào)理素介導(dǎo)U937單核細(xì)胞吞噬M41型GAS(ATCC 12373)29-33
• 4.3 不同濃度HDL介導(dǎo)U937單核細(xì)胞對ATCC-M41型GAS吞噬效率的影響33-34
• 4.4 U937單核細(xì)胞表面參與調(diào)理吞噬作用的受體是CD3634-35
• 4.5 rScl1抑制HDL介導(dǎo)的U937單核細(xì)胞對ATCC-M41型GAS的吞噬35-36
• 5 討論36-37
• 6 結(jié)論37-38
• 致謝38-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 作者簡介43

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本文編號：767902