本文關鍵詞：大鼠骨髓間充質干細胞體外培養(yǎng)及CM-DiI標記的實驗研究

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【摘要】：目的建立骨髓間充質干細胞(MSCs)的體外分離純化、擴增以及標記的方法,為后期體內(nèi)實驗提供依據(jù)。方法采用全骨髓培養(yǎng)和差速貼壁法分離純化MSCs,培養(yǎng)期間觀察細胞形態(tài),流式細胞儀檢測細胞周期和表面標記物,成脂成骨分化誘導鑒定。MSCs經(jīng)氯甲基苯甲酰氨熒光染料(CM-DiI)標記后,熒光顯微鏡觀察熒光標記情況,流式細胞儀檢測標記率,并通過繪制生長曲線明確CM-DiI對MSCs生長增殖的影響。結果 MSCs接種24～48 h后,貼壁細胞多為圓形、多角形、梭形,傳至第3代時形態(tài)呈均一的長梭形。第3代MSCs高表達CD44,低表達CD106,不表達CD11b、CD45,85%以上細胞處于G0/G1期;成脂成骨誘導分別經(jīng)油紅O和茜素紅染色均呈陽性。CM-DiI標記后熒光顯微鏡下細胞呈紅色熒光,體外培養(yǎng)2周熒光未見明顯減弱;流式細胞術檢測顯示標記率達95%以上,標記后細胞生長增殖不受影響。結論通過全骨髓貼壁法及其擴增后可獲得大量純度較高的間充質干細胞,CM-DiI標記是一種簡單、穩(wěn)定、無毒的細胞標記方法。
【作者單位】： 桂林醫(yī)學院附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科;美國國立衛(wèi)生研究院癌癥研究所病理實驗部細胞和癌癥生物學分會;
【關鍵詞】： 骨髓間充質干細胞 原代培養(yǎng) CM-DiI 細胞標記
【基金】：國家自然科學基金(編號:30760083) 廣西自然科學基金重點課題(編號:2012GXNSFDA053020) 廣西科學研究與技術開發(fā)計劃課題(編號:0719006-2-8) 廣西衛(wèi)生廳重點課題(編號:200732,200976) 廣西青年科學基金(編號:0991085)
【分類號】：R329
【正文快照】： 2012-12-17接收近年來,運用復合骨髓間充質干細胞(bonemarrow mesenchymal stem cells,MSCs)生物材料或者直接靜脈注射促進骨、心肌和神經(jīng)組織等修復引導再生已在很多動物模型上獲得成功[1-3],但通過何種方法標記干細胞以便更全面有效地研究干細胞是否歸巢于靶器官仍然是一個

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本文編號：766836