本文關(guān)鍵詞：大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)及CM-DiI標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的建立骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)的體外分離純化、擴(kuò)增以及標(biāo)記的方法,為后期體內(nèi)實(shí)驗(yàn)提供依據(jù)。方法采用全骨髓培養(yǎng)和差速貼壁法分離純化MSCs,培養(yǎng)期間觀察細(xì)胞形態(tài),流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期和表面標(biāo)記物,成脂成骨分化誘導(dǎo)鑒定。MSCs經(jīng)氯甲基苯甲酰氨熒光染料(CM-DiI)標(biāo)記后,熒光顯微鏡觀察熒光標(biāo)記情況,流式細(xì)胞儀檢測(cè)標(biāo)記率,并通過(guò)繪制生長(zhǎng)曲線(xiàn)明確CM-DiI對(duì)MSCs生長(zhǎng)增殖的影響。結(jié)果 MSCs接種24～48 h后,貼壁細(xì)胞多為圓形、多角形、梭形,傳至第3代時(shí)形態(tài)呈均一的長(zhǎng)梭形。第3代MSCs高表達(dá)CD44,低表達(dá)CD106,不表達(dá)CD11b、CD45,85%以上細(xì)胞處于G0/G1期;成脂成骨誘導(dǎo)分別經(jīng)油紅O和茜素紅染色均呈陽(yáng)性。CM-DiI標(biāo)記后熒光顯微鏡下細(xì)胞呈紅色熒光,體外培養(yǎng)2周熒光未見(jiàn)明顯減弱;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示標(biāo)記率達(dá)95%以上,標(biāo)記后細(xì)胞生長(zhǎng)增殖不受影響。結(jié)論通過(guò)全骨髓貼壁法及其擴(kuò)增后可獲得大量純度較高的間充質(zhì)干細(xì)胞,CM-DiI標(biāo)記是一種簡(jiǎn)單、穩(wěn)定、無(wú)毒的細(xì)胞標(biāo)記方法。
【作者單位】： 桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科;美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院癌癥研究所病理實(shí)驗(yàn)部細(xì)胞和癌癥生物學(xué)分會(huì);
【關(guān)鍵詞】： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 原代培養(yǎng) CM-DiI 細(xì)胞標(biāo)記
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(編號(hào):30760083) 廣西自然科學(xué)基金重點(diǎn)課題(編號(hào):2012GXNSFDA053020) 廣西科學(xué)研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)計(jì)劃課題(編號(hào):0719006-2-8) 廣西衛(wèi)生廳重點(diǎn)課題(編號(hào):200732,200976) 廣西青年科學(xué)基金(編號(hào):0991085)
【分類(lèi)號(hào)】：R329
【正文快照】： 2012-12-17接收近年來(lái),運(yùn)用復(fù)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bonemarrow mesenchymal stem cells,MSCs)生物材料或者直接靜脈注射促進(jìn)骨、心肌和神經(jīng)組織等修復(fù)引導(dǎo)再生已在很多動(dòng)物模型上獲得成功[1-3],但通過(guò)何種方法標(biāo)記干細(xì)胞以便更全面有效地研究干細(xì)胞是否歸巢于靶器官仍然是一個(gè)

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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1 劉宏志;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為神經(jīng)前體細(xì)胞的研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2005年

2 董玉泉;兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、鑒定及生物學(xué)特性研究[D];青島大學(xué);2006年

3 項(xiàng)正兵;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向膽堿能神經(jīng)元樣細(xì)胞定向分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];南昌大學(xué);2007年

4 周雅麗;Survivin基因在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中的表達(dá)研究[D];蘭州大學(xué);2009年

5 王佳南;仿生電刺激在離體心肌細(xì)胞誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化中的作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

6 張小飛;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外心肌樣細(xì)胞分化過(guò)程中結(jié)構(gòu)蛋白發(fā)育的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

7 林曉斌;鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化肝干細(xì)胞的研究[D];汕頭大學(xué);2005年

8 李立;綠熒光蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成內(nèi)皮細(xì)胞的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

9 李偉;造血干細(xì)胞條件培養(yǎng)基對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的影響[D];武漢大學(xué);2005年

10 汪蕾;“心肌樣”環(huán)境誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的研究[D];武漢大學(xué);2005年

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