本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用SOEing方法構(gòu)建SOD1-G93A的真核表達(dá)載體

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【摘要】：目的構(gòu)建銅/鋅超氧化物歧化酶(Cu/Zn superoxide dismutase,SOD1)-G93A的真核表達(dá)載體。方法應(yīng)用重疊區(qū)擴(kuò)增基因拼接法(SOEing)分別擴(kuò)增前段M1基因與包含突變位點(diǎn)的后段M2基因,然后將2段基因拼接起來(lái),得到SOD1-G93A基因,并克隆至pcDNA3.1(-)真核表達(dá)載體上。結(jié)果成功擴(kuò)增出SOD1-G93A基因,測(cè)序結(jié)果與GenBank完全一致;對(duì)重組質(zhì)粒SOD1-G93A-pcDNA3.1(-)進(jìn)行雙酶切鑒定,測(cè)序結(jié)果與預(yù)期完全一致。結(jié)論成功構(gòu)建了SOD1-G93A-pcDNA3.1(-)真核表達(dá)載體。
【作者單位】： 山東省臨沂市人民醫(yī)院神經(jīng)病學(xué)實(shí)驗(yàn)室;山東省臨沂市人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 超氧化物歧化酶 點(diǎn)突變 質(zhì)粒 DNA 重組 肌萎縮側(cè)索硬化 重疊區(qū)擴(kuò)增基因拼接法
【基金】：山東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào):ZR2010HM041) 山東省博士后創(chuàng)新項(xiàng)目專(zhuān)項(xiàng)資金(項(xiàng)目編號(hào):201102004)
【分類(lèi)號(hào)】：R341
【正文快照】： 銅/鋅超氧化物歧化酶(Cu/Zn superoxide dismutase,SOD1)主要存在于真核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中,是一種重要的氧自由基清除劑,能使超氧陰離子自由基歧化,生成過(guò)氧化氫(H2O2)和O2,而H2O2則被過(guò)氧化氫酶和谷胱甘肽過(guò)氧化氫酶清除,從而保護(hù)機(jī)體免受損傷[1]。當(dāng)前國(guó)際上已發(fā)現(xiàn)SOD1基因有15

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