本文關(guān)鍵詞：過表達DNMT3B7質(zhì)粒載體的構(gòu)建及對293A細胞增殖的影響

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【摘要】：目的構(gòu)建DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3B(DNMT3B)的一種異構(gòu)體3B7的真核質(zhì)粒表達載體,在體外評價其對人胚腎細胞株293A增殖影響。方法據(jù)GenBank中人DNMT3B7 cDNA序列設(shè)計并合成特異性引物,以DNMT3B1為模板,利用高保真Taq酶,進行PCR技術(shù)擴增DNMT3B7,并將擴增產(chǎn)物克隆到真核表達載體pCMV-2B中。將攜帶DNMT3B7基因的質(zhì)粒pCMV-DNMT3B7及空質(zhì)粒pCMV-2B轉(zhuǎn)染293A細胞,通過G418篩選出穩(wěn)定表達的細胞系,MTT法檢測細胞的增殖;流式細胞儀檢測細胞的細胞周期分布。同時檢測p21蛋白表達情況。結(jié)果成功構(gòu)建DNMT3B7的真核表達載體并篩選出穩(wěn)定表達株,與轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組相比,穩(wěn)定過表達DNMT3B7組293A細胞株增殖減慢(P0.01);過表達DNMT3B7的293A細胞S期細胞比例顯著增多(P0.05)。p21 mRNA和蛋白表達增加(P0.05)。結(jié)論 DNMT3B7基因過表達可抑制293A細胞增殖,p21可能參與了這一過程的調(diào)節(jié)。
【作者單位】： 包頭醫(yī)學(xué)院生物醫(yī)學(xué)研究中心;包頭醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;包頭醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院消化科;泰山醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;麗水學(xué)院醫(yī)學(xué)院;首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院
【關(guān)鍵詞】： DNA甲基轉(zhuǎn)移酶B A細胞 細胞增殖 p
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(81060212,81160244,81360316) 中國博士后基金資助項目(20080430851) 內(nèi)蒙古自然科學(xué)基金資助項目(2010BS1104) 內(nèi)蒙古自治區(qū)高等學(xué)�？蒲许椖抠Y助課題(NJZY12221,NJZY12225,NJYT-13-A10)
【分類號】：R363
【正文快照】： 0引言細胞中表觀遺傳學(xué)變化主要包括DNA甲基化的變化以及組蛋白的修飾,DNA甲基化的變化包括高甲基化和低甲基化,DNA高甲基化伴隨基因轉(zhuǎn)錄失活而DNA低甲基化伴隨著轉(zhuǎn)錄的開放。異常的DNA甲基化是疾病發(fā)生的一個重要因素。真核生物中催化DNA發(fā)生甲基化的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNAmethyl

【共引文獻】

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本文編號：738058