本文關(guān)鍵詞：酶聯(lián)合消化法和貼塊法分離小鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞及其生物學(xué)特性的研究

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【摘要】：目的:探討適用于小鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)分離培養(yǎng)及鑒定的技術(shù)方法。方法:采用Ⅰ型膠原酶、木瓜蛋白酶聯(lián)合消化法及組織貼塊2種方法對PASMCs進(jìn)行體外培養(yǎng)。在倒置顯微鏡下觀察PASMCs的生長特點(diǎn);臺盼藍(lán)法測定細(xì)胞傳代成活率;分別對PASMCs行生長曲線、MTT法、DNA周期檢測比較增殖情況;免疫熒光染色法鑒定細(xì)胞。結(jié)果:酶消化法分離培養(yǎng)的細(xì)胞1 d后,在倒置相差顯微鏡下可見細(xì)胞貼壁呈橢圓形生長,4d后生長迅速呈典型的谷-峰狀生長,7d后達(dá)80%融合即可傳代;貼塊法培養(yǎng)的細(xì)胞3d后,可見細(xì)胞從組織塊邊緣長出,7d后細(xì)胞數(shù)量逐漸增多,10d后細(xì)胞生長迅速呈單層致密排列,細(xì)胞傳代成活率均為96%。2種方法獲得的第2代PASMCs經(jīng)平滑肌ɑ-肌動(dòng)蛋白(ɑ-SM actin)免疫熒光染色鑒定,其陽性率均為90%以上;生長曲線、MTT法顯示細(xì)胞增殖及細(xì)胞DNA周期無明顯差異。結(jié)論:2種方法均可高效獲得PASMCs在體外穩(wěn)定培養(yǎng),為研究肺血管疾病提供較為理想的種子細(xì)胞。
【作者單位】： 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院北京市心肺血管疾病研究所;
【關(guān)鍵詞】： 肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 原代培養(yǎng) 生物學(xué)特性
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81270217)
【分類號】：R363
【正文快照】： 肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(pulmonary arterial smoothmuscle cells,PASMCs)的結(jié)構(gòu)和功能對維持肺循環(huán)低阻高排的正常生理功能,在調(diào)控肺血管的收縮和舒張功能中有重要作用。PASMCs的異常是肺動(dòng)脈高壓(pulmonary arterial hypertension,PAH)發(fā)生發(fā)展的重要病理學(xué)特征,其凋亡和增殖失衡

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3 郭悅R，

本文編號：705168