本文關(guān)鍵詞：大鼠Pig-a基因突變?cè)囼?yàn)高通量方法的建立和驗(yàn)證

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【摘要】：目的體內(nèi)Pig-a基因突變?cè)囼?yàn)是近年來(lái)新開發(fā)的一種基因突變?cè)囼?yàn)方法,該試驗(yàn)具有諸多優(yōu)點(diǎn),有望成為管理遺傳毒理學(xué)的試驗(yàn)方法。之前建立的基礎(chǔ)型方法具有良好的重復(fù)性,但其靈敏度有待進(jìn)一步的提升。本研究作為國(guó)際聯(lián)合驗(yàn)證的一部分,旨在引入免疫磁珠預(yù)篩選策略,對(duì)基礎(chǔ)型方法進(jìn)行優(yōu)化,建立大鼠Pig-a基因突變?cè)囼?yàn)高通量方法,并驗(yàn)證其靈敏度和特異性,并探討與流式體內(nèi)微核試驗(yàn)結(jié)合到同一個(gè)試驗(yàn)中的可能性。方法首先采用N-乙基-N-亞硝基脲(ENU)為陽(yáng)性藥建立大鼠Pig-a基因突變?cè)囼?yàn)高通量方法,初步驗(yàn)證該方法的靈敏度和重復(fù)性,然后采用三聚氰胺、4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)和5-氟尿嘧啶(5-FU)等作為受試物來(lái)驗(yàn)證該方法的靈敏度和特異性。每個(gè)受試物試驗(yàn)中至少設(shè)置四個(gè)劑量組:最大耐受劑量(MTD)組、1/2MTD劑量組、1/4MTD劑量組和陰性對(duì)照組,每組5只雄性SD大鼠,均口服灌胃給藥,給藥容積為10 m.lkg-1,除4NQO連續(xù)給藥28 d外,其他受試物均連續(xù)給藥3 d,每天給藥1次,分別于給藥前1 d、首次給藥后第15,29,45(或60)天頸靜脈取血,檢測(cè)Pig-a基因突變率,指標(biāo)包括總紅細(xì)胞(RBCs)Pig-a基因突變率、網(wǎng)織紅細(xì)胞(RETs)Pig-a基因突變率和%RET。在末次給藥后24 h頸靜脈取血,檢測(cè)微核率,檢測(cè)指標(biāo)包括網(wǎng)織紅細(xì)胞微核率和%RET。結(jié)果 ENU試驗(yàn)中分析RBCs和RETs的數(shù)目分別提升到約108個(gè)和106個(gè),單個(gè)樣品的分析時(shí)間由約基礎(chǔ)型方法的20 min降低到約7 min,ENU誘導(dǎo)的Pig-a基因突變率與Litron實(shí)驗(yàn)室采用高通量方法得到的結(jié)果一致,Pig-a基因突變的基線水平得到良好的控制;三聚氰胺試驗(yàn)中Pig-a基因突變和微核結(jié)果均呈陰性;5-FU試驗(yàn)中Pig-a基因突變結(jié)果呈陰性,微核結(jié)果均呈陽(yáng)性;4NQO試驗(yàn)中Pig-a基因突變結(jié)果呈陽(yáng)性,微核試驗(yàn)結(jié)果可疑。上述結(jié)果均基本符合預(yù)期。結(jié)論本研究成功建立了大鼠Pig-a基因突變?cè)囼?yàn)高通量方法,與基礎(chǔ)型方法比較,高通量方法具有良好的重復(fù)性和更高的靈敏度;試驗(yàn)結(jié)果初步表明大鼠Pig-a基因突變?cè)囼?yàn)高通量方法具有較高的靈敏度和特異性,且可以整合至重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)中;大鼠Pig-a基因突變?cè)囼?yàn)和流式體內(nèi)微核試驗(yàn)可以有效地結(jié)合到同一個(gè)試驗(yàn)中。
【作者單位】： 中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)研究總院上海醫(yī)藥工業(yè)研究院 國(guó)家上海新藥安全評(píng)價(jià)研究中心;
【關(guān)鍵詞】： 基因突變?cè)囼?yàn) 高通量
【基金】：國(guó)家科技重大專項(xiàng)(2012ZX09505-001-003)
【分類號(hào)】：R-331
【正文快照】： 大鼠Pig-a基因突變?cè)囼?yàn)高通量方法的建立和驗(yàn)證@張銘$中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)研究總院上海醫(yī)藥工業(yè)研究院,國(guó)家上海新藥安全評(píng)價(jià)研究中心!上海201203 @周長(zhǎng)慧$中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)研究總院上海醫(yī)藥工業(yè)研究院,國(guó)家上海新藥安全評(píng)價(jià)研究中心!上海201203 @黃鵬程$中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)研究總院上海醫(yī)藥

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本文編號(hào)：705682