本文關(guān)鍵詞：重組人C反應蛋白在甲醇酵母中的分泌表達及鑒定

  更多相關(guān)文章： C反應蛋白質(zhì) 甲醇酵母 誘導表達 分泌表達 免疫反應性

【摘要】：目的構(gòu)建重組人C反應蛋白(rhCRP)甲醇酵母分泌表達菌株,表達、純化rhCRP并鑒定其免疫反應性。方法將人工設計合成的rhCRP基因克隆到甲醇酵母表達載體pPICZαA上,經(jīng)SacⅠ線性化得到重組質(zhì)粒pPICZαA/rhCRP后轉(zhuǎn)化至甲醇酵母X-33中,利用甲醇誘導進行分泌表達,并用組氨酸標簽進行親和層析純化rhCRP。采用SDS-PAGE、Western blotting檢測表達、純化的目的蛋白,通過間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)鑒定其免疫反應性和穩(wěn)定性。結(jié)果成功構(gòu)建人CRP的重組甲醇酵母表達載體pPICZαA/rhCRP,重組酵母菌株成功誘導分泌表達23×103的rhCRP;一步純化即得純度為90.42%的目的蛋白,間接ELISA法檢測表明,純化產(chǎn)物rhCRP具有特異的免疫反應性和一定的穩(wěn)定性。結(jié)論利用甲醇酵母表達系統(tǒng),成功獲得了較高純度的具有免疫反應性的rhCRP,為下一步制備抗人CRP抗體及自主研發(fā)人CRP檢測試劑提供重要的實驗基礎(chǔ)。
【作者單位】： 大連大學醫(yī)學院;大連大學生命科學與技術(shù)學院;
【關(guān)鍵詞】： C反應蛋白質(zhì) 甲醇酵母 誘導表達 分泌表達 免疫反應性
【基金】：國家自然科學基金資助項目(31070822) 遼寧省教育廳高�？蒲杏媱濏椖�(L2010015)
【分類號】：R392.1
【正文快照】： C反應蛋白(C-reactive protein,CRP)是目前發(fā)現(xiàn)的重要急性時相反應蛋白之一。其作為靈敏的炎癥指標、良好的心血管疾病發(fā)病診斷及其發(fā)病風險預測指標,對于許多疾病的篩查、監(jiān)測以及療效評估具有重要價值[1-3]。目前商品化的CRP及其檢測試劑多依賴進口,價格昂貴,阻礙了其臨床

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 黃國團;王麗蘭;蔡豪斌;秦新民;陽艷華;貝鴻池;張旋;;人C-反應蛋白的分離純化及初步應用[J];中國民族民間醫(yī)藥;2010年15期

2 劉平果;李國強;陳毅歆;羅海峰;黃德黨;王穎彬;葛勝祥;張軍;夏寧邵;;一種定量檢測人血清高敏C反應蛋白的化學發(fā)光免疫方法[J];生物工程學報;2010年08期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 丘媛媛;鮑俊杰;邱先桃;江志銳;;兩種方法測定C反應蛋白的比較[J];廣州醫(yī)藥;2011年05期

2 吳學煒;陳長江;張學東;;免疫學與生化方法檢測C反應蛋白相關(guān)性分析[J];河南科學;2012年08期

3 李軍明;林衡;葛高順;張立超;于f ;胡學軍;;組成型表達重組人C-反應蛋白的畢赤酵母菌株構(gòu)建[J];生物技術(shù);2013年01期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 宮曉飛;冠心病病人血清載脂蛋白B與超敏C反應蛋白濃度的變化及其臨床意義[D];青島大學;2012年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 陳毅歆;羅海峰;葛勝祥;郭永利;彭耿;王嘉;陳鴻霖;張軍;管軼;夏寧邵;;高致病性H5亞型禽流行性感冒病毒血凝素單克隆抗體的制備與初步應用[J];病毒學報;2005年06期

2 杭建峰;吳英松;徐偉文;周志聰;李明;;超敏C-反應蛋白時間分辨熒光免疫分析法的建立[J];第四軍醫(yī)大學學報;2007年03期

3 袁洪;閭宏偉;桑海強;陽國平;黃志軍;林玲;邢曉為;;液相蛋白質(zhì)芯片檢測血清C反應蛋白方法的建立[J];臨床檢驗雜志;2007年01期

4 馬宏偉;趙衛(wèi)國;潘柏申;;親和層析法分離純化人心肌肌鈣蛋白Ⅰ[J];檢驗醫(yī)學;2007年03期

5 焦燕;孟學剛;王明遠;阿斯亞;朱沂;;超敏C-反應蛋白水平與心腦血管病的關(guān)系分析[J];心血管康復醫(yī)學雜志;2009年05期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王昌梅!310018,謝異泓!310018,王同映!310018,楊武劍!310018,李春澍!310018,周金寶!310018;重組血小板第4因子在甲醇酵母中的高效表達[J];中華血液學雜志;2001年03期

2 吳騰捷,徐帆洪,孫九如,路煜,葉凡,史曉明,劉桂珍,郭盛淇;甲醇酵母分泌表達重組人干擾素α1b純化工藝的建立[J];微生物學免疫學進展;2004年02期

3 王霞,封志純,蘭和魁,任大明,杜江;人肺表面活性相關(guān)蛋白A1在甲醇酵母的胞內(nèi)表達[J];中國當代兒科雜志;2002年06期

4 胡旭初,余新炳,徐勁,吳忠道,陳守義;弓形蟲SAG1成熟蛋白編碼區(qū)基因在甲醇酵母中的初步表達[J];熱帶醫(yī)學雜志;2002年04期

5 劉忠;范天生;;及時—早期原癌基因的誘導表達[J];腫瘤基礎(chǔ)與臨床;1993年01期

6 胡旭初,徐勁,陸家海,陳守義,余新炳;細粒棘球蚴Eg95全長基因的克隆與在甲醇酵母中的表達[J];熱帶醫(yī)學雜志;2003年01期

7 楊軍;孟紅;;單純皰疹病毒-2型抗原gG-2在大腸埃希菌中的表達及純化[J];實用醫(yī)藥雜志;2008年02期

8 劉紅,潘紅春,蔡紹皙,楊紅濤,朱列文;大腸桿菌重組人成骨蛋白-1的非誘導表達特性[J];中國生物制品學雜志;2004年06期

9 潘紅春,劉紅,王伯初,楊紅濤,陳喜文,周玲;重組人成骨蛋白-1基因在大腸桿菌中的克隆和非誘導表達[J];中國生物制品學雜志;2005年02期

10 許兵紅;曾莉萍;陳萍;;金黃色葡萄球菌對家蠅抗菌物質(zhì)的誘導[J];現(xiàn)代預防醫(yī)學;2007年16期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李昌瑜;宣文靜;李洋;王行國;;大腸桿菌pcs+pss-菌株的構(gòu)建[A];2006年度學術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2006年

2 周斌;陳新生;殷明;;誘導表達5-脂氧合酶PC12細胞系的建立[A];中國藥理學會第十屆全國神經(jīng)學術(shù)會議暨浙江省藥理學會2002年年會論文摘要集[C];2002年

3 馬小彤;張秀軍;張斌;耿以琪;林永敏;李戈;吳克復;;白細胞介素-23(IL-23)的誘導表達[A];第九屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2003年

4 朱洪;孫強;孫海燕;孫懷昌;李厚達;;Tet-on誘導SV40Tag表達的轉(zhuǎn)基因鼠模型的建立[A];中國實驗動物學會第六屆學術(shù)年會論文集[C];2004年

5 楊恒麗;李端;姬新穎;王平忠;潘蕾;連建奇;徐哲;王偉;賈戰(zhàn)生;;TLR7蛋白在DC2.4細胞的誘導表達及其介導的免疫應答[A];中華醫(yī)學會第四次全國艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全國熱帶病學術(shù)會議論文匯編[C];2009年

6 廖文俊;陳e，

本文編號：680087