本文關(guān)鍵詞：重組人C反應(yīng)蛋白在甲醇酵母中的分泌表達(dá)及鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建重組人C反應(yīng)蛋白(rhCRP)甲醇酵母分泌表達(dá)菌株,表達(dá)、純化rhCRP并鑒定其免疫反應(yīng)性。方法將人工設(shè)計合成的rhCRP基因克隆到甲醇酵母表達(dá)載體pPICZαA上,經(jīng)SacⅠ線性化得到重組質(zhì)粒pPICZαA/rhCRP后轉(zhuǎn)化至甲醇酵母X-33中,利用甲醇誘導(dǎo)進(jìn)行分泌表達(dá),并用組氨酸標(biāo)簽進(jìn)行親和層析純化rhCRP。采用SDS-PAGE、Western blotting檢測表達(dá)、純化的目的蛋白,通過間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)鑒定其免疫反應(yīng)性和穩(wěn)定性。結(jié)果成功構(gòu)建人CRP的重組甲醇酵母表達(dá)載體pPICZαA/rhCRP,重組酵母菌株成功誘導(dǎo)分泌表達(dá)23×103的rhCRP;一步純化即得純度為90.42%的目的蛋白,間接ELISA法檢測表明,純化產(chǎn)物rhCRP具有特異的免疫反應(yīng)性和一定的穩(wěn)定性。結(jié)論利用甲醇酵母表達(dá)系統(tǒng),成功獲得了較高純度的具有免疫反應(yīng)性的rhCRP,為下一步制備抗人CRP抗體及自主研發(fā)人CRP檢測試劑提供重要的實驗基礎(chǔ)。
【作者單位】： 大連大學(xué)醫(yī)學(xué)院;大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： C反應(yīng)蛋白質(zhì) 甲醇酵母 誘導(dǎo)表達(dá) 分泌表達(dá) 免疫反應(yīng)性
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(31070822) 遼寧省教育廳高�？蒲杏媱濏椖�(L2010015)
【分類號】：R392.1
【正文快照】： C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP)是目前發(fā)現(xiàn)的重要急性時相反應(yīng)蛋白之一。其作為靈敏的炎癥指標(biāo)、良好的心血管疾病發(fā)病診斷及其發(fā)病風(fēng)險預(yù)測指標(biāo),對于許多疾病的篩查、監(jiān)測以及療效評估具有重要價值[1-3]。目前商品化的CRP及其檢測試劑多依賴進(jìn)口,價格昂貴,阻礙了其臨床

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：680087