本文關(guān)鍵詞：Robo1基因miR-218靶位點序列克隆及其突變體構(gòu)建

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【摘要】：目的克隆Robo1基因3'UTR的miR-218靶位點區(qū)域序列并構(gòu)建"seed"區(qū)位點突變體,以便進一步研究miR-218對Robo1基因的調(diào)控作用。方法通過targetscan 6.2對Robo1 3'UTR進行分析找出miR-218靶位點,根據(jù)NCBI GenBank中Robo1 mRNA序列設計引物,利用RT-PCR技術(shù)從人類細胞總RNA中對包含miR-218靶位點的序列進行克隆;并設計一對突變引物,通過重疊PCR法獲得"seed"區(qū)點突變基因序列;通過雙熒光報告基因檢測miR-218對Robo1基因的調(diào)控。結(jié)果經(jīng)測序驗證,成功克隆了目的基因序列,并成功構(gòu)建了"seed"區(qū)點突變體,并且通過報告基因檢測發(fā)現(xiàn)miR-218對Robo1表達有顯著抑制(P0.05)。結(jié)論成功克隆了含有miR-218靶位點的Robo1 3'UTR基因序列及構(gòu)建了"seed"區(qū)點突變體,并闡明miR-218直接作用于Robo1基因3'UTR區(qū),為進一步研究miR-218對Robo1基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機制奠定了基礎。
【作者單位】： 廣東藥學院血管生物學研究所;
【關(guān)鍵詞】： Robo miR- 靶位點 突變體
【基金】：國家自然科學基金(31200896) 廣東省自然科學基金(S2012040007658) 廣東省醫(yī)學科研基金(B2012181)
【分類號】：R346
【正文快照】： Robo(Roundabout)家族包括4個成員(Robo1,2,3和4),是一類保守的跨膜蛋白家族,在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育中發(fā)揮重要調(diào)控作用〔1〕。Robo1主要表達于神經(jīng)系統(tǒng),對神經(jīng)軸突延伸和神經(jīng)細胞遷移有重要調(diào)控作用。研究發(fā)現(xiàn),Robo1作為癌基因和抑癌基因在不同的腫瘤中發(fā)揮調(diào)控作用。作為癌基因,R

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本文編號：638265