本文關(guān)鍵詞：Robo1基因miR-218靶位點(diǎn)序列克隆及其突變體構(gòu)建

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【摘要】：目的克隆Robo1基因3'UTR的miR-218靶位點(diǎn)區(qū)域序列并構(gòu)建"seed"區(qū)位點(diǎn)突變體,以便進(jìn)一步研究miR-218對(duì)Robo1基因的調(diào)控作用。方法通過(guò)targetscan 6.2對(duì)Robo1 3'UTR進(jìn)行分析找出miR-218靶位點(diǎn),根據(jù)NCBI GenBank中Robo1 mRNA序列設(shè)計(jì)引物,利用RT-PCR技術(shù)從人類細(xì)胞總RNA中對(duì)包含miR-218靶位點(diǎn)的序列進(jìn)行克隆;并設(shè)計(jì)一對(duì)突變引物,通過(guò)重疊PCR法獲得"seed"區(qū)點(diǎn)突變基因序列;通過(guò)雙熒光報(bào)告基因檢測(cè)miR-218對(duì)Robo1基因的調(diào)控。結(jié)果經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證,成功克隆了目的基因序列,并成功構(gòu)建了"seed"區(qū)點(diǎn)突變體,并且通過(guò)報(bào)告基因檢測(cè)發(fā)現(xiàn)miR-218對(duì)Robo1表達(dá)有顯著抑制(P0.05)。結(jié)論成功克隆了含有miR-218靶位點(diǎn)的Robo1 3'UTR基因序列及構(gòu)建了"seed"區(qū)點(diǎn)突變體,并闡明miR-218直接作用于Robo1基因3'UTR區(qū),為進(jìn)一步研究miR-218對(duì)Robo1基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 廣東藥學(xué)院血管生物學(xué)研究所;
【關(guān)鍵詞】： Robo miR- 靶位點(diǎn) 突變體
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31200896) 廣東省自然科學(xué)基金(S2012040007658) 廣東省醫(yī)學(xué)科研基金(B2012181)
【分類號(hào)】：R346
【正文快照】： Robo(Roundabout)家族包括4個(gè)成員(Robo1,2,3和4),是一類保守的跨膜蛋白家族,在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育中發(fā)揮重要調(diào)控作用〔1〕。Robo1主要表達(dá)于神經(jīng)系統(tǒng),對(duì)神經(jīng)軸突延伸和神經(jīng)細(xì)胞遷移有重要調(diào)控作用。研究發(fā)現(xiàn),Robo1作為癌基因和抑癌基因在不同的腫瘤中發(fā)揮調(diào)控作用。作為癌基因,R

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