本文關(guān)鍵詞：組胺受體H4R介導(dǎo)ERK信號(hào)通路分子機(jī)制與受體內(nèi)吞定量分析方法的研究

  更多相關(guān)文章： H4R ERK 轉(zhuǎn)激活 定量?jī)?nèi)吞 Rab5

【摘要】：組胺受體隸屬于G蛋白偶聯(lián)受體超家族,在生物體的各個(gè)組織器官中都存在分布,參與調(diào)控機(jī)體各項(xiàng)生理功能。其中H4R為最新發(fā)現(xiàn)的一種亞型,它參與調(diào)節(jié)機(jī)體包括免疫與過(guò)敏反應(yīng)在內(nèi)的多種生理功能,有著巨大的研究潛力。本論文針對(duì)H4R調(diào)控胞內(nèi)ERK1/2磷酸化所涉及的分子機(jī)制展開(kāi)研究。利用多種特異性的抑制劑抑制相關(guān)蛋白的功能,然后檢測(cè)胞內(nèi)ERK1/2磷酸化水平的變化情況。最終確定了參與調(diào)控H4R介導(dǎo)的ERK1/2過(guò)程的蛋白。Ga蛋白以及Gβγ蛋白都能夠影響H4R介導(dǎo)的ERK1/2磷酸化的過(guò)程。鈣離子非依賴型的PKC,P13K相關(guān)蛋白也涉及其中。另外,H4R還能通過(guò)轉(zhuǎn)激活途徑激活ERK1/2。這為進(jìn)一步研究H4R對(duì)生理功能影響的分子機(jī)制,打下了一定的基礎(chǔ)。同時(shí),本論文還改進(jìn)了以DnaE為基礎(chǔ)的受體內(nèi)吞定量分析技術(shù)�；贕PCR與Rab5在內(nèi)吞過(guò)程中的相互作用,設(shè)計(jì)出新的內(nèi)吞定量檢測(cè)方法。該方法適用面更廣,靈敏度、可靠性高,能夠更好的被應(yīng)用于GPCR的相關(guān)研究。
【關(guān)鍵詞】：H4R ERK 轉(zhuǎn)激活 定量?jī)?nèi)吞 Rab5
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R363
【目錄】：

• 致謝5-6
• 摘要6-7
• ABSTRACT7-8
• 英文縮寫詞表8-12
• 1 綜述12-32
• 1.1 組胺受體的研究發(fā)展12-18
• 1.1.1 H1R的發(fā)現(xiàn)與研究13-15
• 1.1.2 H2R的發(fā)現(xiàn)與研究15-16
• 1.1.3 H3R的發(fā)現(xiàn)與研究16-17
• 1.1.4 總結(jié)17-18
• 1.2 H4R的研究發(fā)展18-24
• 1.2.1 H4R的發(fā)現(xiàn)18-20
• 1.2.2 H4R的激動(dòng)劑20-21
• 1.2.3 H4R的拮抗劑21-23
• 1.2.4 總結(jié)23-24
• 1.3 定量分析GPCR內(nèi)吞的實(shí)驗(yàn)技術(shù)24-26
• 1.3.1 GPCR的內(nèi)吞24-25
• 1.3.2 以DnaE為基礎(chǔ)的定量?jī)?nèi)吞檢測(cè)方法25
• 1.3.3 總結(jié)25-26
• 參考文獻(xiàn)26-32
• 2 組胺H4R介導(dǎo)的ERK1/2信號(hào)通路分子機(jī)制研究32-56
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料33-35
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法35-40
• 2.2.1 質(zhì)粒擴(kuò)增與提取35-37
• 2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)、凍存與復(fù)蘇37
• 2.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染37
• 2.2.4 胞內(nèi)Ca~(2+)的測(cè)定37-38
• 2.2.5 基于CRE報(bào)告基因的胞內(nèi)cAMP的檢測(cè)38
• 2.2.6 蛋白免疫印跡檢測(cè)反洗磷酸化ERK1/238-40
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-51
• 2.3.1 H4R介導(dǎo)的濃度依賴性與時(shí)間梯度的ERK1/2的激活40-43
• 2.3.2 PTX對(duì)H4R介導(dǎo)的ERK1/2激活的影響43-44
• 2.3.3 Gβγ亞基在H4R介導(dǎo)的ERK1/2磷酸化過(guò)程中的作用44-45
• 2.3.4 PKC對(duì)H4R介導(dǎo)的ERK1/2磷酸化過(guò)程的影響45-49
• 2.3.5 PI3K、PDK1、Src對(duì)H4R介導(dǎo)的ERK1/2磷酸化過(guò)程的影響49-50
• 2.3.6 H4R通過(guò)轉(zhuǎn)激活途徑激活ERK1/250-51
• 2.4 討論51-54
• 參考文獻(xiàn)54-56
• 3 以DnaE與Rab5為基礎(chǔ)的GPCR內(nèi)吞定量分析56-72
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料58-60
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法60-64
• 3.2.1 目的基因載體的構(gòu)建60-63
• 3.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)、凍存與復(fù)蘇63-64
• 3.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染64
• 3.2.4 胞內(nèi)熒光素酶活性的檢測(cè)64
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果64-67
• 3.3.1 G蛋白偶聯(lián)受體內(nèi)吞的定量檢測(cè)64-66
• 3.3.2 功能缺失型G蛋白偶聯(lián)受體內(nèi)吞的定量檢測(cè)66-67
• 3.4 討論67-70
• 參考文獻(xiàn)70-72
• 作者簡(jiǎn)歷72

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