本文關鍵詞：人MT2A基因在哺乳動物細胞株中的定位與表達

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【摘要】：目的用基因克隆方法構建帶FLAG-tag的人金屬硫蛋白2A(MT2A)真核表達載體,用其轉染HEK 293T,COS-7細胞觀察MT2A在增殖細胞內(nèi)的表達和定位。方法設計帶FLAG-tag的引物,以人MT2A全長cDNA序列的質(zhì)粒為模板,PCR法擴增MT2A全長序列,然后插入pCDNA 3.1中構建pCDNA 3.1-MT2A-FLAG質(zhì)粒;將構建的質(zhì)粒轉染至HEK293T細胞,提取總蛋白,進行Western blot檢測;脂質(zhì)體法轉染至COS-7細胞,熒光顯微鏡下觀察MT2A表達的蛋白在細胞內(nèi)定位。結果正確構建了pCDNA 3.1-MT2A-FLAG質(zhì)粒;其在HEK 293T細胞中能有效地表達;免疫熒光實驗表明在COS-7細胞中,MT2A主要分布在細胞質(zhì)內(nèi)。結論該研究結果為了解MT2A在細胞內(nèi)與其他蛋白質(zhì)相互作用及功能提供了一定的基礎。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學生命科學學院生物學教研室;
【關鍵詞】： 金屬硫蛋白 細胞定位 轉染 免疫印跡
【基金】：安徽省教育廳自然科學重點科研項目(編號:KJ2010A187) 安徽省自然科學基金項目(編號:11040606M170);安徽省自然科學基金項目(編號:11040606M164)
【分類號】：R341
【正文快照】： 人金屬硫蛋白(metallothionein,MT)是一類低分子量(6 000～7 000)、富含半胱氨酸、可被金屬誘導的特異蛋白[1]。根據(jù)其氨基酸殘基及所帶電荷不同,MT分為MT1、MT2、MT3、MT4 4個亞型,其中MT1、MT2在哺乳動物所有細胞中都有表達。MT具有廣泛的生物學特性,包括對重金屬的解毒作

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