本文關(guān)鍵詞：人MT2A基因在哺乳動物細(xì)胞株中的定位與表達(dá)

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【摘要】：目的用基因克隆方法構(gòu)建帶FLAG-tag的人金屬硫蛋白2A(MT2A)真核表達(dá)載體,用其轉(zhuǎn)染HEK 293T,COS-7細(xì)胞觀察MT2A在增殖細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)和定位。方法設(shè)計(jì)帶FLAG-tag的引物,以人MT2A全長cDNA序列的質(zhì)粒為模板,PCR法擴(kuò)增MT2A全長序列,然后插入pCDNA 3.1中構(gòu)建pCDNA 3.1-MT2A-FLAG質(zhì)粒;將構(gòu)建的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEK293T細(xì)胞,提取總蛋白,進(jìn)行Western blot檢測;脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染至COS-7細(xì)胞,熒光顯微鏡下觀察MT2A表達(dá)的蛋白在細(xì)胞內(nèi)定位。結(jié)果正確構(gòu)建了pCDNA 3.1-MT2A-FLAG質(zhì)粒;其在HEK 293T細(xì)胞中能有效地表達(dá);免疫熒光實(shí)驗(yàn)表明在COS-7細(xì)胞中,MT2A主要分布在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。結(jié)論該研究結(jié)果為了解MT2A在細(xì)胞內(nèi)與其他蛋白質(zhì)相互作用及功能提供了一定的基礎(chǔ)。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生物學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 金屬硫蛋白 細(xì)胞定位 轉(zhuǎn)染 免疫印跡
【基金】：安徽省教育廳自然科學(xué)重點(diǎn)科研項(xiàng)目(編號:KJ2010A187) 安徽省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號:11040606M170);安徽省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號:11040606M164)
【分類號】：R341
【正文快照】： 人金屬硫蛋白(metallothionein,MT)是一類低分子量(6 000～7 000)、富含半胱氨酸、可被金屬誘導(dǎo)的特異蛋白[1]。根據(jù)其氨基酸殘基及所帶電荷不同,MT分為MT1、MT2、MT3、MT4 4個亞型,其中MT1、MT2在哺乳動物所有細(xì)胞中都有表達(dá)。MT具有廣泛的生物學(xué)特性,包括對重金屬的解毒作

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