本文關(guān)鍵詞：慢病毒感染方法構(gòu)建穩(wěn)定干涉PDRG1的HeLa細胞系

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【摘要】：PDRG1(p53 and DNA-damage regulated 1)是實驗室通過文庫篩選發(fā)現(xiàn)的參與NF-kB信號通路調(diào)控的一個新基因。已知PDRG1在多種腫瘤中高表達,并參與p53信號通路;同時該基因受UV以及基因毒性等刺激調(diào)控。但其在NF-κB信號通路中作用尚未見報道,為了深入研究PDRG1對NF-κB信號通路的調(diào)控機理,構(gòu)建了穩(wěn)定干涉PDRG1的HeLa細胞系。選擇了基于慢病毒載體pLKO.1的感染體系,該慢病毒體系可以同時感染分裂期與非分裂期的細胞,將目的基因干涉序列穩(wěn)定整合至靶細胞基因組中;再經(jīng)過抗生素壓力篩選后在短時間內(nèi)獲得穩(wěn)定干涉目的基因表達的細胞株。設(shè)計合成PDRG1干涉序列并克隆至pLKO.1載體,轉(zhuǎn)染病毒包裝細胞293TN后收集慢病毒上清感染HeLa細胞系,進一步經(jīng)過嘌呤霉素壓力篩選成功獲得穩(wěn)定表達PDRG1干涉序列的細胞株。該穩(wěn)定細胞株的建立為PDRG1的功能研究提供了必要的實驗工具。
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物醫(yī)學(xué)分析中心;
【關(guān)鍵詞】： PDRG 慢病毒感染 抗生素篩選 穩(wěn)定敲低細胞系
【分類號】：R363
【正文快照】： PDRG1(Gene Bank:NM_030815)表達廣泛,在多種腫瘤中高表達,目前僅知其參與p53信號通路,并受UV以及基因毒性等刺激調(diào)控,其它功能尚未見報道[1—3]。本實驗室在相關(guān)文庫篩選中初步發(fā)現(xiàn),該基因參與調(diào)控NF-κB信號通路。NF-κB是一類重要的核轉(zhuǎn)錄因子,廣泛參與免疫、炎癥、發(fā)育、

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 馮小明;張杰;劉永生;陳豪泰;馬麗娜;孫德惠;;慢病毒載體及慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2009年03期

2 江飛;袁華;丁思陽;牛玉明;杜一飛;陳寧;;E2F-1基因RNAi慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定[J];口腔生物醫(yī)學(xué);2011年01期

3 李騰;高彥飛;常艷;王玉博;穆蕊;陳亮;甄誠;韓秋影;于鳴;鞏偉麗;張維娜;李慧艷;;HeLa/GFP—H2B細胞系的構(gòu)建及對其有絲分裂進程的動態(tài)觀察[J];科學(xué)技術(shù)與工程;2011年21期

4 陳媛;鞏偉麗;韓秋影;張颯;李濤;;逆轉(zhuǎn)錄病毒感染結(jié)合流式細胞分選方法構(gòu)建穩(wěn)定過表達CUEDC2的MCF-10A細胞系[J];科學(xué)技術(shù)與工程;2012年24期

5 宋波;韓志強;吳少璞;劉景偉;蔡曉輝;楊靖;許予明;;重組慢病毒載體pLKO-1-EGFP-puro的構(gòu)建[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2010年06期

6 曾思聰;周兟;盧光t;;端粒酶shRNA慢病毒載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染人類胚胎干細胞[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2011年08期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 杜一飛;周薇娜;江飛;袁華;;E2F-1基因沉默對舌鱗癌細胞環(huán)氧化酶-2基因表達影響的研究[J];口腔醫(yī)學(xué);2011年10期

2 陳媛;鞏偉麗;韓秋影;張颯;李濤;;逆轉(zhuǎn)錄病毒感染結(jié)合流式細胞分選方法構(gòu)建穩(wěn)定過表達CUEDC2的MCF-10A細胞系[J];科學(xué)技術(shù)與工程;2012年24期

3 黃瑩瑩;;流式細胞分選術(shù)的應(yīng)用進展[J];科技視界;2013年03期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳媛;CUEDC2調(diào)控巨噬細胞功能的機制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2012年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 楊永青,楊公社;現(xiàn)代豬分子育種技術(shù)[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2003年12期

2 高雅琴;常玉蘭;梁麗娜;牛春娥;郭天芬;王宏博;;我國藍狐皮改良效果的分析研究[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2007年06期

3 譚書巖;譚樹良;張愛東;譚緒成;譚緒富;宋延平;譚樹萍;譚廷波;;芬蘭原種北極狐改良提高地產(chǎn)狐的效果評定[J];經(jīng)濟動物學(xué)報;2007年02期

4 李騰;高彥飛;常艷;王玉博;穆蕊;陳亮;甄誠;韓秋影;于鳴;鞏偉麗;張維娜;李慧艷;;HeLa/GFP—H2B細胞系的構(gòu)建及對其有絲分裂進程的動態(tài)觀察[J];科學(xué)技術(shù)與工程;2011年21期

5 郜巖;孫茂盛;;腺病毒載體的研究進展及其在輪狀病毒疫苗研究中的應(yīng)用[J];中國生物制品學(xué)雜志;2012年03期

6 馬寧強;鄧智平;蘇海川;張賀龍;;人鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶Aα RNAi慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2012年03期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王治東;葛常輝;許望翔;詹軼群;李長燕;曹萌萌;董波;楊曉明;;慢病毒顆粒包裝、濃縮及對臍帶血CD34~+細胞感染[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2009年06期

2 梁旭競;陳小佳;陳友鵬;楊冬華;;慢病毒介導(dǎo)hTERT基因?qū)Ω渭毎飳W(xué)特性的影響[J];細胞與分子免疫學(xué)雜志;2010年08期

3 張立群;段文元;許雪青;黃鋼;陳雪丹;白云;;B7-H1慢病毒的制備及其在B16F10細胞中的表達鑒定[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2007年01期

4 傅立波;陶朝陽;;CD151基因RNAi慢病毒載體構(gòu)建與穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株建立[J];臨床軍醫(yī)雜志;2008年03期

5 王新武;劉文革;;人bFGF重組慢病毒轉(zhuǎn)染BMSCs的實驗研究[J];中國現(xiàn)代醫(yī)生;2010年06期

6 陳玉萍;王樹樹;高璀鄉(xiāng);劉展;劉燕;彭聿平;;大鼠IP_3R1 miRNA慢病毒表達載體的構(gòu)建及其沉默效應(yīng)鑒定[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2010年08期

7 智深深;朱靜;田杰;劉官信;魯榮;林建萍;劉建平;;小鼠Islet-1基因RNAi慢病毒載體的構(gòu)建[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2011年02期

8 陳鵬;馬忠森;王秀麗;李博;任錦;胡娛新;郟博;劉鋒;石瑩;;人HMGN5基因shRNA慢病毒載體構(gòu)建與RNAi效率的鑒定[J];中國實驗診斷學(xué);2011年01期

9 房麗君;黃世威;王穎;劉曄;張守峰;扈榮良;;狂犬病病毒糖蛋白基因重組慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定[J];中國生物制品學(xué)雜志;2011年02期

10 潘松;付勇;劉強;劉立思;劉杰;;Math1基因重組慢病毒的構(gòu)建及其在293T細胞中的表達[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2011年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 魏夢綺;;TFR和VEGF基因雙順反動子慢病毒感染骨髓基質(zhì)細胞的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十八次全國放射學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

2 陳敏;何丹;馮九庚;唐容;洪濤;蔣麗萍;;RNA干擾沉默Cx43基因表達抑制血管再狹窄[A];中國藥理學(xué)會第十一次全國學(xué)術(shù)會議�？痆C];2011年

3 薛美思;劉毅;;攜帶人胰島素基因慢病毒載體轉(zhuǎn)染臍帶間充質(zhì)干細胞的實驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會整形外科學(xué)分會第十一次全國會議、中國人民解放軍整形外科學(xué)專業(yè)委員會學(xué)術(shù)交流會、中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會醫(yī)學(xué)美容專業(yè)委員會全國會議論文集[C];2011年

4 宋達疆;黃曉元;任利成;楊興華;肖目張;王雙;;TREM-1基因RNAi慢病毒載體的構(gòu)建及功能初步檢測[A];中華醫(yī)學(xué)會燒傷外科學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

5 顏次慧;楊銘;李真真;熊冬生;;AFP啟動子調(diào)控下TRAIL在臍帶間充質(zhì)干細胞中的特異性表達[A];第13屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 余海若;諾貝爾獎為何13次關(guān)注傳染病[N];大眾科技報;2004年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 宋燕;雙向調(diào)控整合素α5、β1表達對人主動脈血管平滑肌細胞增殖及遷移的影響[D];鄭州大學(xué);2010年

2 賈雪梅;艾滋病毒Vpr蛋白抑制KSHV裂解性周期復(fù)制：GSK-3β信號通路的作用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

3 范雁;轉(zhuǎn)錄因子Phox2對去甲腎上腺素能神經(jīng)元表型的調(diào)控研究[D];蘇州大學(xué);2010年

4 張銳;穩(wěn)定表達靶向HSV2 VP16 shRNA重組細胞系的建立及其對HSV2復(fù)制能力影響研究[D];鄭州大學(xué);2012年

5 劉劍鳴;PPFP基因轉(zhuǎn)染對人正常甲狀腺細胞生物學(xué)特性的影響及蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];中南大學(xué);2010年

6 胡廉;RNAi調(diào)控雄性小鼠睪丸uPA表達的研究[D];華中科技大學(xué);2011年

7 楊應(yīng)斌;人骨髓干細胞源性惡性轉(zhuǎn)化細胞的靶向清除[D];重慶大學(xué);2010年

8 蘇冠華;肝細胞生長因子基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細胞移植的促血管新生作用[D];華中科技大學(xué);2010年

9 王毅飛;GILZ在脂肪細胞分化中的作用及其調(diào)節(jié)機制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

10 楊麗;成骨細胞礦化過程中microRNA表達譜分析及miR-93的功能研究[D];中南大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 毛亞江;腫瘤轉(zhuǎn)移抑制蛋白Mtss1慢病毒干擾載體的構(gòu)建和鑒定[D];湖南師范大學(xué);2010年

2 張文娟;慢病毒介導(dǎo)豬HOXB4基因在骨髓間充質(zhì)干細胞中表達的研究[D];吉林大學(xué);2013年

3 曹戰(zhàn)江;p55PIK慢病毒表達載體的構(gòu)建及鑒定[D];華中科技大學(xué);2011年

4 李光亞;白細胞介素6在人臍帶來源間充質(zhì)干細胞中的表達調(diào)控[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

5 孫海軍;慢病毒介導(dǎo)HO-1基因轉(zhuǎn)染對骨髓間充質(zhì)干細胞體外缺血性損傷保護作用的實驗研究[D];蘇州大學(xué);2011年

6 李晨;表達雙報告基因的慢病毒顆粒的制備及體外標記小鼠間充質(zhì)干細胞[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

7 黃友金;慢病毒介導(dǎo)hVEGF-165基因轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細胞治療大鼠后肢缺血實驗研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2011年

8 郭滿;慢病毒介導(dǎo)RNA干擾技術(shù)制備骨橋蛋白基因沉默小鼠模型[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

9 魯強;慢病毒eIF4E-shRNA的構(gòu)建及其感染Hela細胞株的初步研究[D];青島大學(xué);2011年

10 王海峰;C57BL小鼠Survivin基因RNAi慢病毒的構(gòu)建及其體外對未成熟樹突狀細胞的作用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

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本文編號：603738