本文關鍵詞：慢病毒感染方法構建穩(wěn)定干涉PDRG1的HeLa細胞系

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【摘要】：PDRG1(p53 and DNA-damage regulated 1)是實驗室通過文庫篩選發(fā)現(xiàn)的參與NF-kB信號通路調控的一個新基因。已知PDRG1在多種腫瘤中高表達,并參與p53信號通路;同時該基因受UV以及基因毒性等刺激調控。但其在NF-κB信號通路中作用尚未見報道,為了深入研究PDRG1對NF-κB信號通路的調控機理,構建了穩(wěn)定干涉PDRG1的HeLa細胞系。選擇了基于慢病毒載體pLKO.1的感染體系,該慢病毒體系可以同時感染分裂期與非分裂期的細胞,將目的基因干涉序列穩(wěn)定整合至靶細胞基因組中;再經過抗生素壓力篩選后在短時間內獲得穩(wěn)定干涉目的基因表達的細胞株。設計合成PDRG1干涉序列并克隆至pLKO.1載體,轉染病毒包裝細胞293TN后收集慢病毒上清感染HeLa細胞系,進一步經過嘌呤霉素壓力篩選成功獲得穩(wěn)定表達PDRG1干涉序列的細胞株。該穩(wěn)定細胞株的建立為PDRG1的功能研究提供了必要的實驗工具。
【作者單位】： 軍事醫(yī)學科學院生物醫(yī)學分析中心;
【關鍵詞】： PDRG 慢病毒感染 抗生素篩選 穩(wěn)定敲低細胞系
【分類號】：R363
【正文快照】： PDRG1(Gene Bank:NM_030815)表達廣泛,在多種腫瘤中高表達,目前僅知其參與p53信號通路,并受UV以及基因毒性等刺激調控,其它功能尚未見報道[1—3]。本實驗室在相關文庫篩選中初步發(fā)現(xiàn),該基因參與調控NF-κB信號通路。NF-κB是一類重要的核轉錄因子,廣泛參與免疫、炎癥、發(fā)育、

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本文編號：603738