本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用磁性分選方法從人臍血中分離極小類胚胎干細(xì)胞

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【摘要】：目的建立從人臍血中分離極小類胚胎干細(xì)胞的磁性分選方法。方法臍帶血標(biāo)本與0.9%生理鹽水以1∶1充分混勻,形成單細(xì)胞懸液層加到比重為1.077 g/mL的淋巴細(xì)胞分離液上,經(jīng)密度梯度離心收集單個核細(xì)胞層。應(yīng)用Lineage Cell Depletion Kit、CD45 MicroBeads、CD133 MicroBead Kit和CD34 MicroBead Kit進(jìn)行磁性分選。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測分選的細(xì)胞群的表面標(biāo)志。利用兔抗人Oct4與Nanog單克隆抗體和鼠抗兔IgG二抗分別檢測分選細(xì)胞核內(nèi)Oct-4和Nanog表達(dá)。RT-PCR檢測分選細(xì)胞的Oct-4和Nanog mRNA表達(dá)。通過與人正常紅細(xì)胞比較分析細(xì)胞大小。結(jié)果磁性分選獲得Lin-CD45-CD133+和Lin-CD45-CD34+這2群細(xì)胞。免疫熒光法檢測顯示這2群細(xì)胞中均表達(dá)Oct-4和Nanog。RQ-PCR結(jié)果顯示2群細(xì)胞均表達(dá)Oct-4和Nanog轉(zhuǎn)錄子。瑞氏染色鏡下可見Lin-CD45-CD133+和Lin-CD45-CD34+這2群細(xì)胞大小比正常紅細(xì)胞小,且核質(zhì)比高。結(jié)論應(yīng)用磁性分選方法可獲得表達(dá)Lin-CD45-CD133+和Lin-CD45-CD34+的極小類胚胎干細(xì)胞。
【作者單位】： 浙江省血液中心衛(wèi)生部血液安全研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 極小類胚胎干細(xì)胞 臍血 磁性分選
【基金】：浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科學(xué)研究基金(2011RCA018)
【分類號】：R329
【正文快照】： 干細(xì)胞是1類具有全能分化增殖能力的細(xì)胞,理論上干細(xì)胞可以通過體外增殖分化產(chǎn)生多系成熟功能細(xì)胞,顯示了良好的應(yīng)用前景。新近研究發(fā)現(xiàn)人體內(nèi)存在1種極小類胚胎干細(xì)胞(very small embryonic-like stem cells,VSELs),可表達(dá)胚胎轉(zhuǎn)錄因子Oct-4和Nanog,具有胚胎干細(xì)胞(ESC)無限

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本文編號：603531