本文關鍵詞：原癌基因c-myc真核表達載體構建及其生物學作用

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【摘要】：目的利用基因工程技術構建攜帶原癌基因c-myc的真核表達載體pIRES2-AcGFP1-Nuc-c-myc重組質粒并在Hela細胞中表達。方法以構建好的表達質粒pET28a-c-myc為基礎,利用PCR方法擴增c-myc基因,并加入EcoRⅠ和SmaⅠ酶切位點,克隆至pMD19-T Simple載體,雙酶切后將其與同樣經過雙酶切的真核表達載體pIRES2-AcGFP1-Nuc連接,通過PCR、酶切及測序鑒定重組質粒的正確性,再將重組質粒pIRES2-AcGFPl-Nuc-c-myc轉染Hela細胞,利用熒光顯微鏡觀察GFP表達,利用MTT和免疫印跡證實c-myc蛋白表達量提高。結果經PCR和酶切鑒定與預期結果相符,測序結果與GenBank中報道的序列完全一致,成功構建了重組表達質粒。免疫印跡證實c-myc基因在Hela細胞中得到表達。MTT結果顯示Hela細胞數量顯著增加。結論真核表達載體pIRES2-AcGFP1-Nuc-c-myc成功構建,c-myc基因在Hela細胞中成功表達,具有生物學活性。
【作者單位】： 大連大學生命科學與技術學院基礎生物學教研室;
【關鍵詞】： c-myc pIRES-AcGFP-Nuc 載體構建
【基金】：國家自然科學基金(31202020)
【分類號】：R346
【正文快照】： Myc基因家族是較早發(fā)現(xiàn)的一組癌基因,包括c-myc、l-myc、n-myc、b-myc和s-myc等[1]。myc基因屬于編碼核蛋白的癌基因,通過其產物與核內DNA結合而實現(xiàn)對細胞周期的調控[2]。myc基因家族及其產物可促進細胞增殖,永生化,去分化和轉化等,因此在多種腫瘤的形成過程中處于重要地位[3

【參考文獻】

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6 魏s，

本文編號：603929