本文關(guān)鍵詞：原癌基因c-myc真核表達(dá)載體構(gòu)建及其生物學(xué)作用

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【摘要】：目的利用基因工程技術(shù)構(gòu)建攜帶原癌基因c-myc的真核表達(dá)載體pIRES2-AcGFP1-Nuc-c-myc重組質(zhì)粒并在Hela細(xì)胞中表達(dá)。方法以構(gòu)建好的表達(dá)質(zhì)粒pET28a-c-myc為基礎(chǔ),利用PCR方法擴(kuò)增c-myc基因,并加入EcoRⅠ和SmaⅠ酶切位點(diǎn),克隆至pMD19-T Simple載體,雙酶切后將其與同樣經(jīng)過雙酶切的真核表達(dá)載體pIRES2-AcGFP1-Nuc連接,通過PCR、酶切及測序鑒定重組質(zhì)粒的正確性,再將重組質(zhì)粒pIRES2-AcGFPl-Nuc-c-myc轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞,利用熒光顯微鏡觀察GFP表達(dá),利用MTT和免疫印跡證實(shí)c-myc蛋白表達(dá)量提高。結(jié)果經(jīng)PCR和酶切鑒定與預(yù)期結(jié)果相符,測序結(jié)果與GenBank中報(bào)道的序列完全一致,成功構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒。免疫印跡證實(shí)c-myc基因在Hela細(xì)胞中得到表達(dá)。MTT結(jié)果顯示Hela細(xì)胞數(shù)量顯著增加。結(jié)論真核表達(dá)載體pIRES2-AcGFP1-Nuc-c-myc成功構(gòu)建,c-myc基因在Hela細(xì)胞中成功表達(dá),具有生物學(xué)活性。
【作者單位】： 大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院基礎(chǔ)生物學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： c-myc pIRES-AcGFP-Nuc 載體構(gòu)建
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31202020)
【分類號】：R346
【正文快照】： Myc基因家族是較早發(fā)現(xiàn)的一組癌基因,包括c-myc、l-myc、n-myc、b-myc和s-myc等[1]。myc基因?qū)儆诰幋a核蛋白的癌基因,通過其產(chǎn)物與核內(nèi)DNA結(jié)合而實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞周期的調(diào)控[2]。myc基因家族及其產(chǎn)物可促進(jìn)細(xì)胞增殖,永生化,去分化和轉(zhuǎn)化等,因此在多種腫瘤的形成過程中處于重要地位[3

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 孫慧慧;樸敬愛;李文哲;樸君;;原核表達(dá)c-myc蛋白的多克隆抗體制備[J];安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)(上半月刊);2011年01期

2 林斌彬;張子平;王藝?yán)?張雅芝;;七鰓鰻遺傳多樣性與演化研究進(jìn)展[J];動物學(xué)雜志;2009年01期

3 魏素菊;張凱;;C-myc蛋白結(jié)構(gòu)、功能及對腫瘤細(xì)胞調(diào)控作用[J];河北醫(yī)藥;2009年21期

4 吳一飛;李灼日;;原癌基因c-myc與惡性腫瘤[J];醫(yī)學(xué)臨床研究;2008年09期

5 孫慧慧;王旭;王惠國;譚建華;樸敬愛;樸君;馬彪;劉慶平;李文哲;;C-myc單克隆抗體的制備及鑒定[J];免疫學(xué)雜志;2011年08期

6 黃權(quán);楊志強(qiáng);;七鰓鰻資源研究進(jìn)展[J];水產(chǎn)科技情報(bào);2009年03期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 金建麗;楊春文;金志民;安文和;;雷氏七鰓鰻LDH與SOD同工酶的電泳分析[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年04期

2 韓慧平;于三科;;小鼠抗HCMV-gB多克隆抗體的制備及初步應(yīng)用[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2012年02期

3 劉光明;史千玉;曹敏杰;蘇國成;倪輝;蔡慧農(nóng);;利用PCR和限制性酶切技術(shù)鑒別3種鰻魚[J];集美大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年03期

4 薛雷;王緒凱;;VEGF和c-Myc在血管瘤不同時期的表達(dá)[J];口腔頜面外科雜志;2009年05期

5 李慶偉;馮波;陳立勇;吳芬芳;蘇鵬;趙春暉;;雷氏七鰓鰻(Lampetra reissneri)消化系統(tǒng)組成及消化液主要組分的鑒定分析[J];遼寧師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2012年02期

6 魏s，

本文編號：603929