本文關鍵詞：帶有Flag標簽的ZNF580真核表達載體的構建及擴增，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構建并擴增帶有Flag標簽的ZNF580真核表達載體,用于免疫共沉淀實驗。方法 pGB-ZNF580質(zhì)粒進行SfiI酶切,瓊脂糖電泳,切膠并純化回收ZNF580片段,與同樣酶切的真核表達載體pCDEF-Flag連接構建重組質(zhì)粒pCDEF-Flag-ZNF580。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化細菌感受態(tài),鋪于氨芐抗性LB平板,37℃培養(yǎng)箱過夜,挑取轉(zhuǎn)化了重組質(zhì)粒的單克隆接種于液體LB培養(yǎng)基中搖床培養(yǎng)4～8 h。從大腸桿菌中提取質(zhì)粒酶切鑒定及送Takara公司測序鑒定。結(jié)果成功構建重組質(zhì)粒pCDEF-Flag-ZNF580并轉(zhuǎn)化細菌感受態(tài),于大腸桿菌中擴增得到足夠用于細胞轉(zhuǎn)染和免疫共沉淀實驗的重組質(zhì)粒,Takara測序結(jié)果顯示重組質(zhì)粒序列完全正確。結(jié)論成功構建和擴增了重組質(zhì)粒pCDEF-Flag-ZNF580,為后續(xù)進行真核細胞的轉(zhuǎn)染及免疫共沉淀實驗奠定了基礎。
【作者單位】： 中國人民武裝警察部隊后勤學院生理學與病理生理學教研室;
【關鍵詞】： ZNF 轉(zhuǎn)錄因子 真核表達載體
【基金】：國家自然科學基金面上項目(81170106) 天津市自然科學基金(10JCYBJC26500) 武警后勤學院面上項目(WYM2010-5)
【分類號】：R341
【正文快照】： 人ZNF580基因是本課題組以致動脈粥樣硬化因素-低密度脂蛋白誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞,采用差異顯示逆轉(zhuǎn)錄PCR技術分析得到的一個新基因(Genbank注冊號:AF184939)。其cDNA編碼的蛋白屬于C2H2型鋅指核轉(zhuǎn)錄因子家族的新成員〔1,2〕。前期研究顯示:ZNF580在人體多種組織均有表達,可能

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本文編號：499650