本文關鍵詞：副溶血性弧菌鞭毛蛋白單克隆抗體的制備及其活性分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的制備副溶血性弧菌鞭毛蛋白單克隆抗體(mAb)并建立雙抗夾心ELISA。方法采用差速離心法提取副溶血性弧菌ATCC 17802菌株的鞭毛蛋白,并以此為抗原免疫BALB/c小鼠,抗血清效價達到1∶32 000時,取脾細胞與生長良好的對數期Sp2/0骨髓瘤細胞進行融合。多次克隆化培養(yǎng)后獲得雜交瘤細胞株并制備腹水,純化后得到抗體。結果獲得6株持續(xù)、穩(wěn)定分泌抗副溶血性弧菌鞭毛蛋白mAb的雜交瘤細胞株,命名為VpNo.1～VpNo.6,抗體效價高達1∶2×106。對抗體進行了Ig類和亞類檢測以及Western blot法鑒定,其Ig亞類依次為IgG1、IgG1、IgM、IgG1、IgG2a和IgM。SDS-PAGE結果顯示,提取出的鞭毛蛋白相對分子質量(Mr)為42 000并且純度較高。采用VpNo.6抗體建立了副溶血性弧菌雙抗夾心ELISA,該方法的檢測靈敏度達到103CFU/mL菌液,通過采用134株副溶血性弧菌和74株非副溶血性弧菌進行特異性實驗,結果表明134株副溶血性弧菌呈陽性反應,74株非副溶血性弧菌呈陰性反應,VpNo.6抗體具有非常好的特異性。在基質添加試驗中,最低檢出限為21 CFU/g樣品。結論成功制備了副溶血性弧菌鞭毛蛋白mAb,并將其應用于雙抗夾心ELISA,該方法的檢測靈敏度達到1×103CFU/mL菌液,與所測試的非副溶血性弧菌沒有交叉反應。
【作者單位】： 北京出入境檢驗檢疫局;北京農學院;北京大學實驗動物中心;
【關鍵詞】： 副溶血性弧菌 鞭毛蛋白 單克隆抗體 雙抗夾心ELISA
【基金】：質檢總局公益項目(201110034) 國家質檢總局科技計劃項目(2009IK184)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： )副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)是一種重要的食源性致病菌,分布在世界各地,通常存在于海水浮游生物和魚貝類中,人們多因食用污染本菌而又未經良好加工的海產品而引起食物中毒,癥狀為腹瀉、腸痙攣、嘔吐等,重癥患者還會脫水、休克昏迷,甚至死亡[1-2]。目前,副溶血

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本文編號：499558