本文關(guān)鍵詞：Dead-box RNA解旋酶DDX25和DDX3X在登革病毒感染中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：登革病毒是當今世界分布最廣泛的一種蟲媒病毒,為單股正鏈RNA病毒,主要由埃及伊蚊和白紋伊蚊傳播。人類、靈長類動物和蚊蟲是登革病毒的天然宿主。人體被登革病毒感染后表現(xiàn)的癥狀不同,嚴重的會引發(fā)登革出血熱和登革休克綜合癥甚至死亡。據(jù)統(tǒng)計,每年大約新增數(shù)百萬登革病毒感染。由于登革病毒感染的機制仍不明確,各血清型之間抗原性存在交叉、存在抗體依賴的增強作用等,至今仍無安全有效的疫苗可用。含Dead-box結(jié)構(gòu)域的RNA解旋酶DDX家族屬于剪接因子2解旋酶超家族的一類,參與了RNA代謝的多種過程。此外,一些Dead-box RNA解旋酶被報道能夠參與抗病毒免疫反應(yīng)。在本研究中,我們采取了RNAi文庫篩選的方法,研究40多個Dead-box家族成員在登革病毒感染過程中的作用。我們篩選出DDX3X和DDX25作為研究對象,RNAi結(jié)果顯示,干擾DDX3X能夠促進登革病毒復(fù)制,而沉默DDX25能抑制登革病毒復(fù)制。為了進一步研究DDX3X的抗病毒作用,我們在HEK293T細胞中過表達DDX3X,進行登革病毒感染實驗。結(jié)果顯示,登革病毒的復(fù)制水平顯著降低。RNAi和過表達的結(jié)果說明DDX3X具有抗登革病毒的功能。進一步研究發(fā)現(xiàn),在登革病毒感染早期,干擾DDX3X,IFN-β的表達水平降低;在登革病毒感染的條件下,過表達DDX3X后,IFN-β的表達水平顯著升高。而且DDX3X促進了登革病毒誘導(dǎo)的IRF3的轉(zhuǎn)錄活性及磷酸化和二聚化。同時,我們發(fā)現(xiàn)DDX3X既促進了RIG-I誘導(dǎo)的NFκB的轉(zhuǎn)錄活性,也促進了登革病毒誘導(dǎo)的NFκB的啟動子活性。因此,我們得出結(jié)論,DDX3X在登革病毒感染的早期通過IRF3和NFκB兩條支路促進了IFN-β的產(chǎn)生,抑制了登革病毒的復(fù)制。不同于之前的文獻報道——DDX25是組織特異性表達的,我們發(fā)現(xiàn)DDX25在人體多種組織及細胞系中均表達,而且在細胞質(zhì)和細胞核中均有分布。上皮細胞感染登革病毒后DDX25的表達量顯著升高。沉默DDX25能抑制登革病毒復(fù)制,而過表達DDX25,登革病毒的復(fù)制水平顯著升高。這些結(jié)果表明DDX25能夠促進病毒復(fù)制。而對于具體機制的研究發(fā)現(xiàn),在HEK293T細胞中,干擾DDX25后,IFN-β的表達水平顯著升高;過表達DDX25后,IFN-β的表達水平顯著降低。DDX25還能抑制Se V,VSV和poly I:C誘導(dǎo)的IFN-β的轉(zhuǎn)錄。在IFN-β信號通路中,DDX25抑制由RIG-I,MDA5,MAVS,TBK1,IRF3過表達所誘導(dǎo)的IFN-β的啟動子轉(zhuǎn)錄活性,與此同時,DDX25也抑制了RIG-I,IKKα和p65亞基過表達所誘導(dǎo)的NFκB的轉(zhuǎn)錄活性。因此,我們得出結(jié)論,DDX25通過IRF3和NFκB兩條支路抑制了IFN-β的產(chǎn)生,促進了登革病毒的復(fù)制。本研究首次證實了DDX3X的抗登革病毒功能;同時,也首次發(fā)現(xiàn)DDX25能夠抑制IFN-β信號通路,進一步豐富了Dead-box家族成員在抗病毒天然免疫中所起到的作用,為抗病毒藥物的研究提供了新的靶點。
【關(guān)鍵詞】：登革病毒 DDX25 DDX3X IFN-β
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R373.33
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-13
• 材料與方法13-21
• 一、實驗材料13-14
• 二、實驗方法14-21
• 實驗結(jié)果21-22
• 第一部分 解旋酶DDX3X抑制登革病毒復(fù)制22-29
• 一、登革病毒感染的細胞中DDX3X表達上調(diào)22
• 二、DDX3X具有抗登革病毒的作用22-24
• （一）沉默DDX3X基因，登革病毒感染水平升高22-23
• （二）過表達DDX3X，抑制登革病毒感染23-24
• 三、DDX3X影響了IFN-Β 的產(chǎn)生24-26
• （一）干擾DDX3X后，，IFN-β 的表達量在登革病毒感染的早期降低24-25
• （二）過表達 DDX3X， IFN-β 的表達量上升25-26
• 四、DDX3X促進登革病毒誘導(dǎo)的IRF3 和NFΚB的轉(zhuǎn)錄活性26-27
• （一）DDX3X促進登革病毒誘導(dǎo)的IRF3 的轉(zhuǎn)錄活性26
• （二）DDX3X促進DENV和RIG-I誘導(dǎo)的NFκB的轉(zhuǎn)錄活性26-27
• 討論27-29
• 第二部分 解旋酶DDX25 促進登革病毒復(fù)制29-39
• 一、DDX25 在人體各組織中廣譜表達29
• 二、細胞中DDX25 的表達水平隨登革病毒的感染而增加29-30
• 三、DDX25 能夠幫助登革病毒復(fù)制30-32
• （一）干擾DDX25 后，登革病毒的感染水平顯著降低30-31
• （二）過表達DDX25 后，登革病毒的感染水平顯著升高31-32
• 四、DDX25 抑制了IFN-Β 的表達32-37
• （一）干擾DDX25 后， IFN-β 的表達量上升32
• （二）過表達DDX25 后， IFN-β 的表達水平顯著降低32-33
• （三）在VSV，Poly I:C和SeV刺激下，DDX25 都能顯著抑制IFN-β的啟動子活性33-34
• （四）DDX25 能夠抑制RLR介導(dǎo)的IFN-β 啟動子活性34-35
• （五）DENV感染前后，細胞質(zhì)和細胞核中DDX25 的含量都增加 2635-37
• 討論37-39
• 參考文獻39-44
• 綜述44-56
• 參考文獻50-56
• 碩士期間完成的論文56-57
• 致謝57-58

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Megha Haridas Upadya;Jude Juventus Aweya;Yee-Joo Tan;;Understanding the interaction of hepatitis C virus with host DEAD-box RNA helicases[J];World Journal of Gastroenterology;2014年11期

  本文關(guān)鍵詞：Dead-box RNA解旋酶DDX25和DDX3X在登革病毒感染中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：467447