本文關(guān)鍵詞：沙門菌菌影負(fù)載的淋病奈瑟菌PorB基因疫苗的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：細(xì)菌菌影(Bacterial Ghost)是革蘭陰性菌通過(guò)噬菌體PhiX174裂解基因E的誘導(dǎo)形成不含核酸、核糖體等胞質(zhì)內(nèi)容物的細(xì)菌空殼。細(xì)菌菌影保留了天然細(xì)菌完整的外膜結(jié)構(gòu),不僅可作為疫苗誘導(dǎo)相關(guān)免疫應(yīng)答,也可作為DNA、抗原和藥物等的遞送載體。淋病奈瑟菌是性傳播疾病淋病(Gonorrhea)的病原菌。隨著耐藥菌株的增多,抗生素治療效果并不理想。新型疫苗是新的淋病防治策略之一,淋病奈瑟菌外膜孔蛋白B(PorB)是研制淋病疫苗理想的候選抗原。然而,研究發(fā)現(xiàn)淋病DNA疫苗可能在體內(nèi)轉(zhuǎn)染效率不高導(dǎo)致誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答比較弱,無(wú)法滿足機(jī)體相應(yīng)的免疫保護(hù)需要。本研究旨在借助新型的遞送載體細(xì)菌菌影來(lái)提高淋病奈瑟菌PorB DNA疫苗的免疫保護(hù)性。通過(guò)沙門菌菌影SE-ghost裝載淋病奈瑟菌PorB基因疫苗制備淋病疫苗SE-ghost (PorB),并對(duì)其免疫原性及免疫應(yīng)答機(jī)制進(jìn)行研究。研究?jī)?nèi)容包括以下兩部分：一、沙門菌菌影作為載體裝載外源物質(zhì)體外轉(zhuǎn)染細(xì)胞的評(píng)價(jià)‘將含有溫控系統(tǒng)的重組沙門菌HA2-EBOX進(jìn)行誘導(dǎo)制備出沙門菌菌影SE-ghost。用掃描電鏡和透射電鏡對(duì)SE-ghost進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。結(jié)果顯示,重組沙門菌胞質(zhì)內(nèi)容物流出形成菌影。將異硫氰酸熒光素FITC裝載入SE-ghost并在體外分別轉(zhuǎn)染3LL細(xì)胞、HeLa細(xì)胞和RAW264.7細(xì)胞48h后,熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)的熒光；將SE-ghost凍干粉重懸于真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-N1緩沖液中,采用分光光度計(jì)檢測(cè)樣品離心后上清游離DNA含量分析裝載效率,體外轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞48h后,熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)綠色熒光蛋白。結(jié)果表明,SE-ghost裝載的FITC在3LL細(xì)胞、HeLa細(xì)胞和RAW264.7細(xì)胞中顯示黃綠色熒光；SE-ghost裝載的質(zhì)粒pEGFP-N1在RAW264.7細(xì)胞中表達(dá)了綠色熒光蛋白。二、以沙門菌菌影為遞送載體的淋病奈瑟菌PorB基因疫苗免疫應(yīng)答特性研究將SE-ghost凍干粉重懸于真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1-PorB緩沖液中制備沙門菌菌影裝載的淋病疫苗SE-ghost (PorB)。經(jīng)SE-ghost (PorB)刺激原代培養(yǎng)誘導(dǎo)的BALB/c小鼠骨髓樹突狀細(xì)胞(BMDC),流式檢測(cè)BMDC表面分子CD86、CD80、CD40和MHC-Ⅱ的表達(dá)；間接ELISA檢測(cè)BMDC上清的細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12p70的分泌。流式檢測(cè)BMDC對(duì)同種異體CD4+T細(xì)胞增殖的情況。結(jié)果表明,成功制備出沙門菌菌影裝載的淋病候選疫苗SE-ghost (PorB)。 BMDC經(jīng)SE-ghost (PorB)刺激后,高表達(dá)表面成熟分子CD86、CD80、CD40、MHC-Ⅱ;高分泌細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12p70;刺激同種異體T細(xì)胞增殖的能力顯著提高。將40只6周齡左右BALB/c小鼠,隨機(jī)分為4組：SE-ghost (PorB)組、pVAX1-PorB組、SE-ghost組和PBS對(duì)照組。通過(guò)灌胃口服的方式免疫接種。間接ELISA檢測(cè)小鼠血清中IgG抗體水平和陰道洗液IgA抗體水平。用淋病奈瑟菌WHO-A菌株,檢測(cè)第三次免疫小鼠血清中補(bǔ)體介導(dǎo)的抗體殺菌活性。結(jié)果表明,與對(duì)照組相比,SE-ghost (PorB)免疫組小鼠血清中IgG和陰道洗液IgA抗體水平明顯提高,血清抗體具有補(bǔ)體介導(dǎo)的殺菌作用。流式檢測(cè)第三次免疫小鼠外周血CD3+CD4+T、CD3+ CD8+T細(xì)胞頻率變化,胞內(nèi)染色檢測(cè)脾臟CD4+T細(xì)胞亞群細(xì)胞因子IL-4、IFN-γ分泌情況。取第三次免疫小鼠脾細(xì)胞,經(jīng)淋病奈瑟菌WHO-A刺激48h,流式檢測(cè)脾細(xì)胞增殖情況。結(jié)果表明,與對(duì)照組相比,SE-ghost (PorB)免疫組小鼠外周血CD3+CD4+T和CD3+CD8+T細(xì)胞頻率上調(diào)；胞內(nèi)染色脾臟CD4+T細(xì)胞細(xì)胞因子IL-4和IFN-γ含量增加。淋病奈瑟菌WHO-A刺激48h, SE-ghost (PorB)免疫組小鼠脾細(xì)胞明顯增殖。
【關(guān)鍵詞】：細(xì)菌菌影 遞送載體 淋病奈瑟菌 疫苗
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 符號(hào)說(shuō)明9-11
• 第一部分：沙門菌菌影作為載體裝載外源物質(zhì)體外轉(zhuǎn)染細(xì)胞的評(píng)價(jià)11-27
• 1 材料11-14
• 2 方法14-18
• 3 統(tǒng)計(jì)分析18
• 4 結(jié)果18-23
• 5 討論23-25
• 參考文獻(xiàn)25-27
• 第二部分：以沙門菌菌影為載體的淋病奈瑟菌PorB基因疫苗的研究27-55
• 1 材料27-29
• 2 方法29-38
• 3 統(tǒng)計(jì)分析38
• 4 結(jié)果38-50
• 5 討論50-52
• 參考文獻(xiàn)52-55
• 文獻(xiàn)綜述 淋病奈瑟菌孔蛋白PorB的研究進(jìn)展55-61
• 參考文獻(xiàn)57-61
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文61-62
• 致謝62-63

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

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  本文關(guān)鍵詞：沙門菌菌影負(fù)載的淋病奈瑟菌PorB基因疫苗的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：447189