本文關(guān)鍵詞：炭疽桿菌莢膜表面寡糖抗原的合成研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：炭疽是由炭疽桿菌引起的致死性人畜共患傳染病。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計,全年平均炭疽發(fā)病人數(shù)為20000-100000例。同時,炭疽孢子由于具有重量輕、少量吸入即可致命的特點,可以制成生物武器,用于戰(zhàn)爭以及生物恐怖襲擊。炭疽感染早期治療首選抗生素,但對于中后期的炭疽毒血癥治療價值極其有限。而且,抗生素的廣泛使用所致的耐藥菌株不斷出現(xiàn)也給治療帶來了前所未有的挑戰(zhàn)。因此,做好炭疽感染的預(yù)防措施非常重要。而在各種預(yù)防手段中,免疫接種是防控人類傳染病最有效且經(jīng)濟(jì)的方法。傳統(tǒng)的炭疽疫苗主要有減毒活炭疽桿菌疫苗,AVA(Anthrax Vaccine Absorbed)以及AVP(Anthrax Vaccine Precipitated)疫苗。這些疫苗都存在成分不明確、產(chǎn)量不穩(wěn)定,免疫效果差、劑量難以掌控和不良反應(yīng)發(fā)生率高等缺陷。因此,研發(fā)新型炭疽疫苗具有很大的臨床意義及市場需求。炭疽感染依賴于炭疽桿菌的兩大毒力因子:炭疽毒素以及莢膜。在炭疽感染的發(fā)生與發(fā)展過程中,炭疽莢膜都發(fā)揮著決定性作用,如屏障作用,粘附作用,耐藥作用,抵抗極端環(huán)境威脅等。因此,炭疽莢膜表面的多種特異性結(jié)構(gòu)便成為了炭疽診斷與疫苗研發(fā)的熱點靶標(biāo)。近年炭疽莢膜表面一個特異性寡糖分子結(jié)構(gòu)的闡明,又為發(fā)展炭疽疫苗提供了新的靶標(biāo)抗原和分子基礎(chǔ)。然而,單純寡糖疫苗免疫原性較差,T-細(xì)胞非依賴性的抗體免疫反應(yīng)發(fā)生率高。將糖抗原和載體蛋白結(jié)合,不僅可以提高糖類抗原的免疫原性還能夠?qū)⑺鼈冝D(zhuǎn)化成T-細(xì)胞依賴性的免疫抗原。近年來,具有免疫原性的糖蛋白綴合物已逐漸成為新型疫苗的研發(fā)熱點,目前已有數(shù)十種糖蛋白疫苗用于臨床。本課題以常見的葡萄糖,半乳糖和氨基葡萄糖鹽酸鹽為起始原料,采用乙酰基、芐基和對甲苯氧基等保護(hù)策略得到:單糖供體3、11和17及單糖受體5和7。經(jīng)過連續(xù)的硫苷糖基化得到了四個炭疽寡糖化合物片段,包括:氨乙基-β-D-吡喃半乳糖基-(α1→3)-2-脫氧-2-乙酰氨基-β-D-吡喃葡萄糖苷(23),氨乙基-β-D-吡喃半乳糖基-(α1→6)-(β-D-吡喃半乳糖基)-(α1→3)-2-脫氧-2-乙酰氨基-β-D-吡喃葡萄糖苷(28),氨乙基-2-脫氧-2-乙酰氨基-β-D-吡喃葡萄糖基-(α1→6)-(β-D-吡喃半乳糖基)-(α1→3)-2-脫氧-2-乙酰氨基-β-D-吡喃葡萄糖苷(31),氨乙基β-D-吡喃葡萄糖基-(β1→4)-(β-D-吡喃半乳糖基)(α1→3)-2-脫氧-2-乙酰氨基-β-D-吡喃葡萄糖苷(34)。而后,采用戊二醛法將上述寡糖片段偶聯(lián)至血藍(lán)蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)上,得到了8個糖蛋白綴合物:TM-1,TM-2,TM-3,TM-4 TM-5,TM-6,TM-7,TM-8。目標(biāo)化合物及關(guān)鍵中間體的結(jié)構(gòu)均通過1H-NMR,13C-NMR,ESI-MS和HR-QTOF-MS,MALDI-TOF確證。對KLH偶聯(lián)物的初步免疫學(xué)研究顯示,三糖綴合物TM-4,TM-6能夠在小鼠體內(nèi)引發(fā)抗原特異性的免疫反應(yīng),其中TM-4誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體滴度較高。本研究驗證了低聚糖對疫苗開發(fā)和其它免疫學(xué)研究的潛力。
【關(guān)鍵詞】：炭疽桿菌 糖蛋白 化學(xué)合成 糖基化
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 縮略詞表10-12
• 第一章 前言12-18
• 一、炭疽桿菌感染現(xiàn)狀12-14
• 二、歷史上的炭疽戰(zhàn)與現(xiàn)代生物恐怖襲擊14-15
• 三、炭疽致病機(jī)制15
• 四、炭疽臨床表現(xiàn)15-16
• 五、炭疽的治療與預(yù)防16-17
• 六、多糖疫苗的研究進(jìn)展17-18
• 第二章 課題設(shè)計及逆合成分析18-26
• 一、設(shè)計思想18-20
• 二、逆合成分析20-21
• 三、合成路線21-26
• 第三章 實驗部分26-43
• 第一部分 化學(xué)實驗部分26-41
• 一、儀器設(shè)備與試劑耗材26
• 二、化學(xué)合成方法26-41
• 第二部分 免疫學(xué)實驗部分41-43
• 一、儀器設(shè)備與試劑耗材41
• 二、酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）41-43
• 第四章 實驗結(jié)果與討論43-50
• 一、中間體21的制備43
• 二、化合物27的制備43
• 三、化合物23的制備43-44
• 四、二糖受體的選擇44-45
• 五、保護(hù)基的選擇45-46
• 六、正交法探索α-硫苷糖基化最佳的反應(yīng)條件46-48
• 七、ELISA檢測結(jié)果48-50
• 第五章 小結(jié)50-51
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 綜述 O-型糖苷化反應(yīng)研究新進(jìn)展56-70
• 參考文獻(xiàn)64-70
• 在讀期間發(fā)表論文與科研工作情況說明70-71
• 致謝71-72
• 附錄72-93

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐莉;;研究者確定炭疽桿菌基因組序列[J];傳染病信息;2002年03期

2 ;對炭疽桿菌的基因和蛋白質(zhì)方面的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)生物工程學(xué)雜志;2002年01期

3 張文元;炭疽桿菌芽胞的滅活[J];國外醫(yī)學(xué).流行病學(xué)傳染病學(xué)分冊;2003年05期

4 索南多杰;;炭疽桿菌病的預(yù)防措施[J];養(yǎng)殖與飼料;2010年10期

5 李懷文,顧士圻;從猞猁臟器中分離出一株炭疽桿菌[J];中國人獸共患病雜志;1988年04期

6 梁旭東，，馬鳳琴，俞東征;模擬土壤環(huán)境中炭疽桿菌生態(tài)學(xué)的實驗研究[J];中國人獸共患病雜志;1995年05期

7 鄧秀芳,海力且木,格熱提,竇大慶,王明軍,爾肯;吉爾吉斯坦國入境動物產(chǎn)品攜帶炭疽桿菌調(diào)查[J];中國人獸共患病雜志;1997年03期

8 梁旭東,楊珊,劉軍,邱燕,馬鳳琴,俞東征;炭疽桿菌外環(huán)境生態(tài)學(xué)的研究(摘要)(英文)[J];地方病通報;1999年02期

9 趙光強(qiáng);炭疽桿菌與炭疽病[J];濰坊學(xué)院學(xué)報;2001年02期

10 劉桂紅;恐怖活動中的炭疽桿菌[J];中國人民公安大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2003年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 雷連成;;炭疽桿菌生物戰(zhàn)劑的研究現(xiàn)狀[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

2 徐明;畢玉海;李志杰;丁壯;;炭疽桿菌及炭疽病研究進(jìn)展[A];第六屆全國會員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會論文集（下）[C];2005年

3 徐明;畢玉海;李志杰;丁壯;;炭疽桿菌及炭疽病研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第六屆全國會員代表大會暨第11次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2005年

4 陶好霞;王艷春;袁盛凌;王們;王令春;張兆山;劉純杰;;炭疽桿菌S層蛋白SLH結(jié)構(gòu)域多抗的制備及其在S層蛋白表達(dá)分析中的應(yīng)用[A];第五次全國免疫診斷暨疫苗學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2011年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王顯峰;炭疽桿菌與炭疽熱[N];農(nóng)民日報;2003年

2 陳瑜;紅茶具有抑制炭疽桿菌的功效[N];科技日報;2008年

3 省預(yù)防醫(yī)學(xué)會 李希明;炭疽桿菌和它的芽胞[N];山東科技報;2001年

4 毛磊;對炭疽桿菌發(fā)動“雙重打擊”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2003年

5 新華;30分鐘檢測炭疽桿菌：快而準(zhǔn)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2001年

6 本報記者 姚雪青 王偉健 王有佳 何勇;“蘇州牛肉感染炭疽桿菌”是謠言[N];人民日報;2012年

7 記者 洪琦　張瑛;檢測周期由7天縮短為24小時[N];寧夏日報;2009年

8 王有國;炭疽桿菌自述[N];家庭醫(yī)生報;2006年

9 李爭艷;國產(chǎn)消毒技術(shù)新突破[N];中國教育報;2002年

10 通訊員 嚴(yán)鞠;阿拉山口檢驗檢疫局兩項科研成果獲州科技進(jìn)步獎[N];博爾塔拉報;2008年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 王雪芳;炭疽桿菌S-層基因sap和eag的功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

2 黃蕾;炭疽桿菌莢膜表面寡糖抗原的合成研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

3 邵冬冬;炭疽桿菌芽胞外壁膠原樣蛋白基因的克隆、表達(dá)及其單克隆抗體的制備[D];揚(yáng)州大學(xué);2007年

4 謝應(yīng)國;炭疽桿菌中性蛋白酶免疫效果研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2006年

5 植懿丹;炭疽桿菌假想S-層蛋白BA3338的功能研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2008年

6 高美琴;炭疽桿菌eag基因的功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

7 韓威超;炭疽桿菌GNMT和GalE蛋白表達(dá)、純化和結(jié)晶研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2013年

8 唐恒明;炭疽桿菌假想S-層蛋白slp基因的功能研究[D];江南大學(xué);2009年

9 王華貴;炭疽桿菌毒力大質(zhì)粒的驅(qū)除及比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];江南大學(xué);2010年

  本文關(guān)鍵詞：炭疽桿菌莢膜表面寡糖抗原的合成研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：446087