本文關(guān)鍵詞：炭疽桿菌莢膜表面寡糖抗原的合成研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：炭疽是由炭疽桿菌引起的致死性人畜共患傳染病。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計(jì),全年平均炭疽發(fā)病人數(shù)為20000-100000例。同時(shí),炭疽孢子由于具有重量輕、少量吸入即可致命的特點(diǎn),可以制成生物武器,用于戰(zhàn)爭(zhēng)以及生物恐怖襲擊。炭疽感染早期治療首選抗生素,但對(duì)于中后期的炭疽毒血癥治療價(jià)值極其有限。而且,抗生素的廣泛使用所致的耐藥菌株不斷出現(xiàn)也給治療帶來(lái)了前所未有的挑戰(zhàn)。因此,做好炭疽感染的預(yù)防措施非常重要。而在各種預(yù)防手段中,免疫接種是防控人類(lèi)傳染病最有效且經(jīng)濟(jì)的方法。傳統(tǒng)的炭疽疫苗主要有減毒活炭疽桿菌疫苗,AVA(Anthrax Vaccine Absorbed)以及AVP(Anthrax Vaccine Precipitated)疫苗。這些疫苗都存在成分不明確、產(chǎn)量不穩(wěn)定,免疫效果差、劑量難以掌控和不良反應(yīng)發(fā)生率高等缺陷。因此,研發(fā)新型炭疽疫苗具有很大的臨床意義及市場(chǎng)需求。炭疽感染依賴于炭疽桿菌的兩大毒力因子:炭疽毒素以及莢膜。在炭疽感染的發(fā)生與發(fā)展過(guò)程中,炭疽莢膜都發(fā)揮著決定性作用,如屏障作用,粘附作用,耐藥作用,抵抗極端環(huán)境威脅等。因此,炭疽莢膜表面的多種特異性結(jié)構(gòu)便成為了炭疽診斷與疫苗研發(fā)的熱點(diǎn)靶標(biāo)。近年炭疽莢膜表面一個(gè)特異性寡糖分子結(jié)構(gòu)的闡明,又為發(fā)展炭疽疫苗提供了新的靶標(biāo)抗原和分子基礎(chǔ)。然而,單純寡糖疫苗免疫原性較差,T-細(xì)胞非依賴性的抗體免疫反應(yīng)發(fā)生率高。將糖抗原和載體蛋白結(jié)合,不僅可以提高糖類(lèi)抗原的免疫原性還能夠?qū)⑺鼈冝D(zhuǎn)化成T-細(xì)胞依賴性的免疫抗原。近年來(lái),具有免疫原性的糖蛋白綴合物已逐漸成為新型疫苗的研發(fā)熱點(diǎn),目前已有數(shù)十種糖蛋白疫苗用于臨床。本課題以常見(jiàn)的葡萄糖,半乳糖和氨基葡萄糖鹽酸鹽為起始原料,采用乙�；�、芐基和對(duì)甲苯氧基等保護(hù)策略得到:單糖供體3、11和17及單糖受體5和7。經(jīng)過(guò)連續(xù)的硫苷糖基化得到了四個(gè)炭疽寡糖化合物片段,包括:氨乙基-β-D-吡喃半乳糖基-(α1→3)-2-脫氧-2-乙酰氨基-β-D-吡喃葡萄糖苷(23),氨乙基-β-D-吡喃半乳糖基-(α1→6)-(β-D-吡喃半乳糖基)-(α1→3)-2-脫氧-2-乙酰氨基-β-D-吡喃葡萄糖苷(28),氨乙基-2-脫氧-2-乙酰氨基-β-D-吡喃葡萄糖基-(α1→6)-(β-D-吡喃半乳糖基)-(α1→3)-2-脫氧-2-乙酰氨基-β-D-吡喃葡萄糖苷(31),氨乙基β-D-吡喃葡萄糖基-(β1→4)-(β-D-吡喃半乳糖基)(α1→3)-2-脫氧-2-乙酰氨基-β-D-吡喃葡萄糖苷(34)。而后,采用戊二醛法將上述寡糖片段偶聯(lián)至血藍(lán)蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)上,得到了8個(gè)糖蛋白綴合物:TM-1,TM-2,TM-3,TM-4 TM-5,TM-6,TM-7,TM-8。目標(biāo)化合物及關(guān)鍵中間體的結(jié)構(gòu)均通過(guò)1H-NMR,13C-NMR,ESI-MS和HR-QTOF-MS,MALDI-TOF確證。對(duì)KLH偶聯(lián)物的初步免疫學(xué)研究顯示,三糖綴合物TM-4,TM-6能夠在小鼠體內(nèi)引發(fā)抗原特異性的免疫反應(yīng),其中TM-4誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體滴度較高。本研究驗(yàn)證了低聚糖對(duì)疫苗開(kāi)發(fā)和其它免疫學(xué)研究的潛力。
【關(guān)鍵詞】：炭疽桿菌 糖蛋白 化學(xué)合成 糖基化
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 縮略詞表10-12
• 第一章 前言12-18
• 一、炭疽桿菌感染現(xiàn)狀12-14
• 二、歷史上的炭疽戰(zhàn)與現(xiàn)代生物恐怖襲擊14-15
• 三、炭疽致病機(jī)制15
• 四、炭疽臨床表現(xiàn)15-16
• 五、炭疽的治療與預(yù)防16-17
• 六、多糖疫苗的研究進(jìn)展17-18
• 第二章 課題設(shè)計(jì)及逆合成分析18-26
• 一、設(shè)計(jì)思想18-20
• 二、逆合成分析20-21
• 三、合成路線21-26
• 第三章 實(shí)驗(yàn)部分26-43
• 第一部分 化學(xué)實(shí)驗(yàn)部分26-41
• 一、儀器設(shè)備與試劑耗材26
• 二、化學(xué)合成方法26-41
• 第二部分 免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)部分41-43
• 一、儀器設(shè)備與試劑耗材41
• 二、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）41-43
• 第四章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論43-50
• 一、中間體21的制備43
• 二、化合物27的制備43
• 三、化合物23的制備43-44
• 四、二糖受體的選擇44-45
• 五、保護(hù)基的選擇45-46
• 六、正交法探索α-硫苷糖基化最佳的反應(yīng)條件46-48
• 七、ELISA檢測(cè)結(jié)果48-50
• 第五章 小結(jié)50-51
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 綜述 O-型糖苷化反應(yīng)研究新進(jìn)展56-70
• 參考文獻(xiàn)64-70
• 在讀期間發(fā)表論文與科研工作情況說(shuō)明70-71
• 致謝71-72
• 附錄72-93

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 徐莉;;研究者確定炭疽桿菌基因組序列[J];傳染病信息;2002年03期

2 ;對(duì)炭疽桿菌的基因和蛋白質(zhì)方面的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)生物工程學(xué)雜志;2002年01期

3 張文元;炭疽桿菌芽胞的滅活[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).流行病學(xué)傳染病學(xué)分冊(cè);2003年05期

4 索南多杰;;炭疽桿菌病的預(yù)防措施[J];養(yǎng)殖與飼料;2010年10期

5 李懷文,顧士圻;從猞猁臟器中分離出一株炭疽桿菌[J];中國(guó)人獸共患病雜志;1988年04期

6 梁旭東，，馬鳳琴，俞東征;模擬土壤環(huán)境中炭疽桿菌生態(tài)學(xué)的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)人獸共患病雜志;1995年05期

7 鄧秀芳,海力且木,格熱提,竇大慶,王明軍,爾肯;吉爾吉斯坦國(guó)入境動(dòng)物產(chǎn)品攜帶炭疽桿菌調(diào)查[J];中國(guó)人獸共患病雜志;1997年03期

8 梁旭東,楊珊,劉軍,邱燕,馬鳳琴,俞東征;炭疽桿菌外環(huán)境生態(tài)學(xué)的研究(摘要)(英文)[J];地方病通報(bào);1999年02期

9 趙光強(qiáng);炭疽桿菌與炭疽病[J];濰坊學(xué)院學(xué)報(bào);2001年02期

10 劉桂紅;恐怖活動(dòng)中的炭疽桿菌[J];中國(guó)人民公安大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2003年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 雷連成;;炭疽桿菌生物戰(zhàn)劑的研究現(xiàn)狀[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

2 徐明;畢玉海;李志杰;丁壯;;炭疽桿菌及炭疽病研究進(jìn)展[A];第六屆全國(guó)會(huì)員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（下）[C];2005年

3 徐明;畢玉海;李志杰;丁壯;;炭疽桿菌及炭疽病研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第六屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第11次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2005年

4 陶好霞;王艷春;袁盛凌;王們;王令春;張兆山;劉純杰;;炭疽桿菌S層蛋白SLH結(jié)構(gòu)域多抗的制備及其在S層蛋白表達(dá)分析中的應(yīng)用[A];第五次全國(guó)免疫診斷暨疫苗學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2011年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王顯峰;炭疽桿菌與炭疽熱[N];農(nóng)民日?qǐng)?bào);2003年

2 陳瑜;紅茶具有抑制炭疽桿菌的功效[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

3 省預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì) 李希明;炭疽桿菌和它的芽胞[N];山東科技報(bào);2001年

4 毛磊;對(duì)炭疽桿菌發(fā)動(dòng)“雙重打擊”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

5 新華;30分鐘檢測(cè)炭疽桿菌：快而準(zhǔn)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

6 本報(bào)記者 姚雪青 王偉健 王有佳 何勇;“蘇州牛肉感染炭疽桿菌”是謠言[N];人民日?qǐng)?bào);2012年

7 記者 洪琦　張瑛;檢測(cè)周期由7天縮短為24小時(shí)[N];寧夏日?qǐng)?bào);2009年

8 王有國(guó);炭疽桿菌自述[N];家庭醫(yī)生報(bào);2006年

9 李爭(zhēng)艷;國(guó)產(chǎn)消毒技術(shù)新突破[N];中國(guó)教育報(bào);2002年

10 通訊員 嚴(yán)鞠;阿拉山口檢驗(yàn)檢疫局兩項(xiàng)科研成果獲州科技進(jìn)步獎(jiǎng)[N];博爾塔拉報(bào);2008年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 王雪芳;炭疽桿菌S-層基因sap和eag的功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

2 黃蕾;炭疽桿菌莢膜表面寡糖抗原的合成研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

3 邵冬冬;炭疽桿菌芽胞外壁膠原樣蛋白基因的克隆、表達(dá)及其單克隆抗體的制備[D];揚(yáng)州大學(xué);2007年

4 謝應(yīng)國(guó);炭疽桿菌中性蛋白酶免疫效果研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2006年

5 植懿丹;炭疽桿菌假想S-層蛋白BA3338的功能研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2008年

6 高美琴;炭疽桿菌eag基因的功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

7 韓威超;炭疽桿菌GNMT和GalE蛋白表達(dá)、純化和結(jié)晶研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2013年

8 唐恒明;炭疽桿菌假想S-層蛋白slp基因的功能研究[D];江南大學(xué);2009年

9 王華貴;炭疽桿菌毒力大質(zhì)粒的驅(qū)除及比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];江南大學(xué);2010年

  本文關(guān)鍵詞：炭疽桿菌莢膜表面寡糖抗原的合成研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：446087